实 验 指 导
目 录
实验一 硫喷妥钠的兔体药代动力学研究……………………………………………………（1）
实验二 罗红霉素犬体药代动力学及相对生物利用度研究…………………………………（7）
实验三 厄贝沙坦胶囊的人体生物利用度实验设计…………………………………………（10）
实验四 个例药物不良反应的判断……………………………………………………………（22）
实验五 药物临床研究的盲法设计……………………………………………………………（28）
实验一 硫喷妥钠的兔体药代动力学研究
实验目的
本实验以药代动力学原理为指导，分析测定静脉麻醉时硫喷妥钠在血液中的浓度，研究
体内血药浓度随时间变化的规律，为制定临床用药方案提供依据。
实验材料
1 动物
健康家兔12只，♀♂各半，体重（2.5+0.5）kg。安徽医科大学实验动物中心提供。
2 药物
硫喷妥钠，上海新亚药业有限公司，批号9910501，9902102。
3 试剂
二氯甲烷，广州新港化工厂产品，批号950503。
0.45mol?l-1氢氧化钠溶液，临用前配制。
4 仪器
S53/54紫外可见分光光度计，上海棱光技术有限公司产品；
XW-80A旋涡混合器，上海精科实业有限公司产品；
TDZ5多管架自动平衡离心机，长沙湘仪离心机有限公司产品；
DL-5M低速冷冻离心机。
三、实验方法
1 动物实验部分
1.1 2.5%硫喷妥钠溶液的配制
取硫喷妥钠1支（0.5g），用2ml生理盐水充分溶解，取1ml至另一试管，加入生理盐
水至10ml，混匀。
1.2 取家兔，称体重，置于兔架中。平底试管13只编号0-12，加入肝素数滴备用。
1.3 家兔注射部位去毛、热敷和消毒，待血管扩张后，以左手拇指与食指压住静脉耳根端，
使静脉充盈，给药前用12号针头自耳静脉取血1-1.5ml，置于0管中。
1.4 将5号或7号针头平行刺入静脉，抽动针管，见有回血即可推注。静脉注射2.5%硫喷妥钠溶液20mg·kg-1。采用小量、缓慢注射法，以每30s注入1ml为宜。注射完毕后，拔出针头，用手或药棉压迫针眼片刻。（一般耳内缘静脉深不易固定，故不用或少用，外缘静脉浅易固定，常用。）
1.5于给药后5min、15 min、25 min、35min、45 min、1h、2h、3h、4h、5h、6h用12号针头自另一侧耳缘静脉采血1-1.5ml，血标本均用肝素抗凝。
1.6 分离血浆（3000r·min-1，10min）至另一试管，于-20℃保存，直至测定。
2 血药浓度测定（紫外分光光度法）
2.1 硫喷妥钠标准溶液的配制
精密称取硫喷妥钠对照品100mg，用蒸馏水适量溶解，移入100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，得1 mg·ml-1浓度的标准储备液，取储备液配制成3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μg·ml- 1的硫喷妥钠标准溶液。
2.2 标准曲线的制备
精密称取3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μg·ml- 1的硫喷妥钠标准溶液
0.1ml，分置10ml具塞试管中，加入0.45mol?l-1氢氧化钠溶液4ml，混匀。用0.45mol?l-1氢氧化钠溶液为参比，以1cm吸收池，于大约304nm波长处测定各管的吸光度，以硫喷妥钠C为横坐标，吸光度A为纵坐标，求得线性回归方程。
2.3 血浆标准曲线的制备
取空白血浆7份分置10ml具塞试管中，分别加入浓度为3.125、6.25、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μg·ml- 1的硫喷妥钠标准溶液0.1ml，每份用二氯甲烷4ml和3ml萃取两次（旋涡混合提取2min），离心（3000r·min-1，10min），合并萃取液6ml。向萃取液中加入0.45mol?l-1氢氧化钠溶液4ml，混匀（旋涡混合30s），离心（3000r·min-1，10min），抽取氢氧化钠层供测定。余同标准曲线制备项下。以硫喷妥钠C为横坐标，吸光度A为纵坐标，求得线性回归方程。
2.4 回收率和精密度实验
分别取空白血浆0.5ml，精密加入不同浓度的硫喷妥钠标准溶液，使其血浆浓度分别为6.25、25.0、100.0μg·ml- 1。余同标准曲线制备项下。于1日内5次和连续5日内分别考察其回收率和日内、日间变异结果。
2.5 血浆样品测定
取血浆0.1ml，每份用二氯甲烷4ml和3ml萃取两次（旋涡混合提取2min），离心（3000r·min-1，10min），合并萃取液6ml。向萃取液中加入0.45mol?l-1氢氧化钠溶液4ml，混匀（旋涡混合30s），离心（3000r·min-1，10min），抽取氢氧化钠层供测定。用0min管为参比，以1cm吸收池，于大约304nm波长处测定各管的吸光度。
S53/54紫外可见分光光度计的正常基本操作：
1、开机自检与自校 开机后显示窗两侧8灯全亮，指示进入自检与自校状态，约需十余分钟。当TRANS灯亮即说明自校结束进入待机状态，可随时应用。
2、重调100%基线（基线校正） 在样品室通光位上置入参考样品；在λSTART、λEND、λINT三标尺下用▲或▼确定起始波长、结束波长、波长间隔参数值（缺省参数为200nm、1000nm、1nm）后，再按λPara至λNOW灯亮。先后按FUNC2、▲启动基线校正功能。
3、调零 按“0%”键，即能自动调整零位。
4、调整100%T 将用作背景的空白样品置入样品室光路中，盖下试样盖（同时打开光门）按一下“100%T”键即能自动调整100%T（一次有误差时可加按）。
5、设定波长 按λPara键到λNOW灯亮，按▲或▼至要求波长，再按λPara键确认，显示窗改变波长至设定值，即完成波长设定步骤。
6、改变试样槽位置让不同样品进入光路。
7、改变标尺 本仪器设有两类各四种标尺，第一类光度类有：TRANS．透射比、ABS．吸光度、FACT．浓度因子、CONC．浓度直读。各标尺间的转换用Mode键操作，并由“TRANS．透射比”，“ABS．吸光度”，“FACT．浓度因子”，“CONC．浓度直读”指示灯分别指示，开机初始状态为TRANS，每按一次顺序循环。第二类波长类有：λNOW当前波长、λSTART起始波长、λEND结束波长、λINT波长扫描间隔。
测定透明溶液的吸光度的应用操作：
自检校正→设定波长→置入空白→调100%T、0% T→置吸光度标尺→样品置入光路→读出数据
3 药动学参数的计算
血药浓度-时间数据采用实用药代动力学计算程序3P87（Practical Pharmacokinetic
Program-Version 87）进行处理。本程序可处理各种给药方法的线性和非线性药代动力学模型，给出有关药代动力学参数，适用于新药开发研制、药代动力学分析及临床药代动力学计算。3P87用全屏幕提示方式编辑和修改输入数据，并自动形成输入文件，可供随时调用或修改。计算结果建立输出文件，随时可以输出各种图表齐备的详细计算结果供用户分析研究，可对多剂量组数据进行批处理，给出统计结果，并备有简化系统，在输入数据后，即可得出结果。
3.1 3P87的调用
使用硬盘及一个软盘驱动器时，将3P87程序盘放入A驱动器，键入[A:3P87]并按[ENTER]键，即可显示3P87程序的首页，再任意按一键即显示主菜单（MAIN MENU）：1、输入或修改数据；2、用主数据计算药代动力学参数，选择模型；3、对多组数据的批处理；4、用户指定算法和条件计算药代动力学参数；5、计算结果输出；6、药代动力学参数计算的简化系统；7、药代动力学模型的说明；8、退出3P87程序。
3.2 在屏幕出现程序主菜单后，由键盘键功能数码[1]时，屏幕左上角显示Please Execute [a:inp]，键入a:inp并回车后，屏幕显示输入菜单（INPUT MENU），供输入功能的选择。其内容为：1、输入数据；2、修改标题文件；3、修改浓度-时间数据；4、增添浓度-时间数据；5、删除浓度-时间数据；6、显示输入数据；7、打印输入数据；8、返回主菜单。
在屏幕显示输入菜单后，由键盘键功能数码[1]时，即显示标题文件内容，用户按光标提示项目逐项输入标题文件内容，包括有：1、药名或文件名；2、实验对象；3、研制单位；4、日期；5、实验者；6、计算者；7、测定灵敏度；8、浓度单位；9、测定精密度（CV%）；10、时间单位；11、给药剂量单位。其中1、8、10和11项与实验记录及计算有密切关系，必须输入。
3.3 输入给药途径
屏幕显示三种给药途径：1、静脉推注；2、静脉滴注；3、非静脉给药。
3.4 输入剂量组数
3.5 输入各剂量组的个体数目、剂量和静脉滴注时的滴注时间
3.6 输入浓度-时间数据：1、输入主数据；2、数据记录序号；3、输入浓度-时间数据；4、建立输入文件；5、显示或打印输入文件。
3.7 药代动力学计算：1、用主数据进行计算；2、批处理的计算；3、指定算法和条件的计算
3.8 计算结果的输出
屏幕显示主菜单后，由键盘键功能数码[5]时，即进入输出程序，屏幕显示[File name]，要求键入文件名，并予确认，然后显示输出菜单（OUTPUT MENU），输出菜单包括5项：
1、常规打印输出；2、个别计算结果显示；3、相关图及散点图；4、输出文件的清单打印；5、返回主菜单。在屏幕显示输出菜单时，键[1]则显示常规打印输出菜单（ROUTINE PRINT OUT），其内容有7项：1、标题文件；2、供选择模型用的计算结果；3、批处理的结果；4、用户指定计算的结果；5、个别数据的计算结果；6、统计矩结果；7、返回输出菜单。
供选择模型用的计算结果包括：1、拟合优度比较表；2、主数据拟合曲线；3、主数据的F检验；4、主数据的统计矩计算结果。
3.9 房室数的选择
可根据F检验和AIC值选择房室数，当F检验有显著意义（P<0.05或P<0.01）时，应取AIC值较小的房室数，当F检验无显著意义（P>0.05）时，则取房室数少者为宜。
3.10 权重选择
在估算药代动力学参数时，如何选择权重在实践和理论上都是一个重要的问题，为许多学者所关注。本程序中给出三种最常用的权重：1、1/C及1/C2，供用户选择。如何选择权重，至今意见不一，但有以下意见可供参考：首先比较拟合优度值（Goodness of fit），数值越小，表示拟合越好，如数值相等或相近时，再同时结合最低检测浓度，参考最大绝对误差及相对误差。一般来说，权重为1时，最大绝对误差较小，对高浓度数据拟合较好，有利于计算表观分布容积及生物利用度。权重为1/C2时，最大相对误差较小，对低浓度数据拟合较好，有利于计算消除相半衰期。权重为1/C时，通常能兼顾高低浓度的数据，但最大绝对误差及最大相对误差，往往并非最小。
四、实验结果
1 硫喷妥钠标准曲线的绘制
试管号 1 2 3 4 5 6
硫喷妥钠浓度
（ug·ml-1）
吸光度
（A）
标准曲线回归方程及相关系数：
2 硫喷妥钠的血药浓度
试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
吸光度
（A）
血药浓度
(ug?ml-1)
3 硫喷妥钠的药代动力学参数
试验组 ke（h-1） t1/2（ka）（h） t1/2（ke）（h） C（max）（ug/ml） AUC（ug/ml）·h CL（mg/kg/h/(ug/ml)）
1
2
3
4
5
6
χ
s
五、讨论
1 为什么要做药动学实验？
2 标准曲线的制备应注意哪些问题？
3 从你做的结果讨论药代动力学参数的生理意义及如何制定临床用药方案。
实验二 罗红霉素的犬体药代动力学及相对生物利用度研究
实验目的
1．掌握微生物法测定罗红霉素血药浓度的基本原理与操作。
2．熟悉相对生物利用度的测定。
3．了解罗红霉素的动物药代动力学研究过程。
二、实验材料
1 动物
健康犬12只，♂，体重12kg左右，由安徽医科大学实验动物中心提供（皖医实动准第01号）。
2 药品
罗红霉素片，商品名罗迈新，丽珠集团丽珠制药厂，规格150mg/片，批号020602。
罗红霉素片，商品名浦虹，上海医药工业研究院亚东药业公司浦东药厂，规格150mg/片，批号020601。
罗红霉素标准品，含量949.5（u/mg），批号020205M。
3 检定菌
藤黄微球菌标准菌株CMCC（B）28001，卫生部药品生物制品检验所提供。
4 试剂
磷酸盐缓冲液（pH6.0），安徽医科大学第一附属医院检验科临床微生物室配制，过滤，115℃高压30分钟。
培养基Ⅱ，安徽医科大学第一附属医院检验科临床微生物室配制，过滤，115℃高压30分钟。
营养琼脂干粉，杭州天和微生物试剂厂，按其说明书配制，用于转种藤黄微球菌标准菌株和细菌菌落计数。
三、实验方法
1 标准曲线制备
将已高压灭菌的培养基Ⅱ加热溶解后倾入无菌培养皿，藤黄微球菌标准菌株菌液（104-105CFU/ml）均匀涂抹无菌培养皿，置35℃温箱10-20分钟。用直径为3.5mm打孔器在培养皿打2孔，用于加入标准品及血浆样品。精密称取罗红霉素标准品50mg，用1ml无水乙醇溶解后，加入4mlPH6.0磷酸盐缓冲液，制成储备液（1000 mg·l-1）。取0.1ml储备液加入9.9mlPH6.0磷酸盐缓冲液，制成中间液体（100 mg·l-1），用犬血浆稀释成10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625mg·l-1，取20ul加入上述孔中，置35℃温箱16小时，用游标卡尺测量抑菌环直径（mm）。以抑菌环直径D为横坐标，浓度C（mg·l-1）的对数为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为：lgC=-1.219+0.083D，r =0.9958。
2 回收率试验
分别制备高、中、低3种浓度的罗红霉素血浆样品，按标准曲线制备项下方法操作，将抑菌环直径代入标准曲线计算罗红霉素浓度，以测得值与加入值之比计算回收率。
3 精密度试验
分别制备高、中、低3种浓度的罗红霉素血浆样品，按标准曲线制备项下方法操作，1日内连续测定5次，计算日内相对标准差；将制备的高、中、低3种浓度的罗红霉素血浆样品连续测定5日，计算日间相对标准差。
4 药动学试验方案
12只犬随机分为2组，每组6只，用药前禁食12小时，用药后禁食4小时，禁水2小时。供试药物组与对照药物组分别灌胃浦虹、罗迈新2片（150mg×2），分别于0h（给药前）及给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、18、24、36、48、60、72h。采血3ml，血标本收集于一次性肝素抗凝的负压真空采血管（成都瑞琪C.D.RICH产品，批号020313）内，离心（3000r?min-1，10min）分离出血浆，血浆样品保存于-20℃待测。血药浓度测定方法同标准曲线。
5 数据处理
血药浓度-时间数据采用3p87药代动力学软件计算。峰浓度（Cmax）和达峰时间（Tmax）为实测值，对浦虹和罗迈新的主要药代动力学参数采用配对t检验进行统计分析，以罗迈新药时曲线下面积为标准，计算浦虹的相对生物利用度。
四、实验结果
1 罗红霉素标准曲线的绘制
平皿编号 1 2 3 4 5 6 7
罗红霉素浓度C（mg·l-1） 10 5 2.5 1.25 0.625 0.3125 0.15625
抑菌环直径D（mm） 25/26 23/23 20/20 18/17 13/13 9/9 4/4
26/26 22/23 20/20 15/15 13/13 9/8 4/4
平均抑菌环直径D（mm） 25.75 22.75 20 16.25 13 8.75 4
标准曲线回归方程及相关系数：lgC=-1.219+0.083D，r =0.9958
2 罗红霉素的血药浓度
平皿号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
平均抑菌环直径
（mm）
血药浓度
（mg·l-1）
3 浦虹和罗迈新的药代动力学参数（χ+ s，n=6）
药代动力学参数 浦 虹 罗迈新
Cmax（mg·L -1）
Tmax（h）
ke（h-1）
t1/2（ka）（h）
t1/2（ke）（h）
AUC（mg·h·L -1 ）
V/F（L）
MRT（h）
4 浦虹相对生物利用度
五、讨论
从罗红霉素的药动学过程看，其主要优点是什么？
如何进行浦虹和罗迈新的生物等效性评价？
实验三 厄贝沙坦胶囊的人体生物利用度实验设计
厄贝沙坦是AT1受体阻断剂，临床上用于高血压病的治疗。由于该药疗效确切，在治疗剂量下（常用量为50-300 mg/d，耐受量>900 mg/d），几乎无不良反应，因此可望成为抗高血压的一线药物。药代动力学研究表明，厄贝沙坦胶囊口服吸收较快（Tmax 1.5-2h），其绝对生物利用度约为60%-80%，半衰期t1/2 约为11-16 h，该药主要通过代谢后从尿中排出体外，原形肾排不到3%。
一、试验目的
本试验旨在研究国产厄贝沙坦胶囊的相对生物利用度，为它是否与剂量相同的进口厄贝沙坦胶囊具有生物等效性提供依据。
二、研究人员
总 负 责：
试验设计：
临床工作：
：
：
色谱分析：
统计分析和报告书写：
三、生物样品分析方法的建立和验证
采用HPLC法测定血药浓度(1(
样品制备：样品制备过程中，高、中、低三个浓度的提取回收率高于50%
HPLC测定条件：（略）
3、特异性：
须证明所测定物质是受试药品的原形药物。生物样品所含内源性物质或代谢物不得干扰对样品所测物质的分析。应提供空白生物样品、标准品、空白生物样品加入标准品及用药后生物样品的色谱图，以反映分析方法的特异性。
4、最低定量限：
最低定量限（LOQ）是标准曲线上的最低浓度点，又称灵敏度，表示测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度（应能满足测定3-5个半衰期时样品中的药物浓度，或Cmax1/10~1/20时的药物浓度）。
5、标准曲线与线性范围
所测定物质的浓度与响应的相关性，用回归分析方法（如用加权最小二乘法）所得的回归方程来评价。标准曲线高低浓度范围为线性范围，在线性范围内浓度测定结果应可达到试验要求的精密度和准确度。
必须用至少5个浓度建立标准曲线，应使用与待测样品相同生物介质，线性范围要能覆盖全部待测浓度，不得用线性范围外推的方法求算未知样品的浓度。标准曲线不包括零点。
6、精密度与准确度
要求选择三个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察，低浓度选择在最低量限（LOQ）附近，高浓度在标准曲线的上限附近，中间选一个浓度，每一浓度至少测定5个样品。
精密度用质控样品的日内和日间相对标准差（RSD）表示，一般RSD应小于15%，在LOQ附近RSD应小于20%。
准确度是指用特定方法测得的生物样品浓度与真实浓度的接近程度，可用相对回收率表示，一般应85%~115%范围内，在LOQ附近应在80%~120%范围内。
7、样品稳定性
对含药生物样品在冰冻条件下不同存放时间进行稳定性考察，以确定生物样品的存放时间。
8、质控样品
质控样品系将已知量的待测药物加入到生物介质中配制的样品，用于质量控制。一般配制高、中、低三个浓度的质控样品。
9、质量控制
应在生物样品分析方法确证完成之后开始测试未知样品。每个未知样品一般测定一次，必要时可进行复测。每批生物样品测定时应建立新的标准曲线，并随行测定高、中、低三个浓度的质控样品。质控样品测定结果的偏差一般应小于20%。
四、志愿受试者
1．志愿受试者条件
性别：男性；
年龄：18~40岁；
体重：标准体重±10%。 [标准体重=身高(cm)－80]×0.7；或=[身高(cm)－170]×0.6+62。全部受试者的体重尽量控制在55-65kg范围内；
不吸烟；
不嗜酒；
经病史询问、全身体检和实验室检查证明健康者；
无药物过敏史和精神病史；
无药物依赖史；
至少两周未服用其它任何药物；
受试期间禁服任何药物；
2．受试者例数：20例。
3．分组方案：
表1 分组方案
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
随机号
A
A
B
B
B
B
A
A
B
B
A
A
A
A
A
A
B
B
B
B
4．签署知情同意书。
五、参比制剂
Sinofi Pharma 生产的厄贝沙坦片剂，每片150 mg，批号：173
六、试验制剂
国产厄贝沙坦胶囊，每粒75 mg，批号：
七、给药方案
1、剂量：两制剂均给150 mg。
2、给药方案：采用双周期随机交叉试验设计，给药方案见表2。
表2 给药方案
分组
周期1
周期2
A
参比制剂
试验制剂
B
试验制剂
参比制剂
洗脱期：1周。
取血点：服药前（0小时）、服药后0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，4，8，12，24，36，48，60小时从静脉采血3 ml。立即离心，血浆储存在-20(C保存。详细记录采血准确时间。
八、预试验（略）
九、数据处理
（一）、药代动力学基本参数的计算：
AUC0(60：梯形面积法，单位：(g(h/ml；
AUC0→( = AUC0(60 + C60/K；
消除速率常数(Ke)：以二乘法求出消除相的最佳曲线以斜率K和2.303相乘，得Ke值；
T1/2 = 0.693/Ke；
Tmax (达峰浓度时间)和Cmax(峰浓度)用实测值；
总清除率：CL/F = D/AUC0(( (D为给药剂量)；
分布容积：Vd/F = (CL/F/ke)
相对生物利用度：F = AUC0(60,试验制剂/AUC0(60,参比制剂 (%)或F = AUC0((,试验制剂/ AUC0((,参比制剂 (%)，采用各个受试者的AUC分别计算出各自的生物利用度F值，然后计算全部受试者F值的均数和标准差。
（二）、生物等效性评价
对受试制剂与参比制剂的生物等效性评价，应从药物吸收程度和吸收速度两方面进行。药代动力学参数AUC和Cmax，经对数转换后进行交叉试验的方差分析与双单侧t检验处理。若受试制剂AUC的90%可信限落在参比制剂80~125％范围内，Cmax的90％可信限落在70~143％范围内，Tmax经非参数法检验无差异，可认定受试制剂与参比制剂生物等效。
十、提供的数据
分别提供每个受试者的血药时间、浓度原始数据和由之计算出的药物代谢动力学参数，同时还应提供药时曲线。
Cmax，Tmax，AUC，生物利用度；
其它药物代谢动力学参数：ke、T1/2、Vd等；
生物等效性的评价结论及过程。
十一、资料整理和保存
1、资料保存于遗传药理学研究所。
2、 应归档的资料包括：
（1）受试者个人知情同意书；
（2）临床试验记录；
（3）色谱图；
（4）数据和统计学处理资料；
（5）科研记录本；
（6）其它关于试验的所有有关资料。
安徽医科大学国家药品临床研究基地
临床药理研究志愿受试者知情同意书
成年病人 儿童病人 健康成人志愿者
研究项目负责人：
研究项目名称：厄贝沙坦胶囊的相对生物利用度研究
受试者姓名： 年龄： 性别： 男 女
致志愿受试者：
下列各项内容向你对本试验作了简略的介绍，请仔细阅读。如果你对试验还有什么问题，可以随时向研究人员提出，他们会解答你的问题。
一、关于本研究的（1）研究目的；（2）试验方法；（3）试验所需时间：
研究目的：本试验的目的是研究国产厄贝沙坦胶囊的相对生物利用度，了解该药进入人体内的速度和数量，为它是否与剂量相同的进口厄贝沙坦胶囊具有生物等效性提供依据。
试验方法：整个试验分两个周期， 每一周期，您将口服150 mg的国产或进口厄贝沙坦胶囊，然后按时从肘静脉抽血14次（为了减少抽血次数，研究人员会用静脉留置针），每次抽血3毫升左右，总量约为52毫升。
试验所需时间：实验每周期需时60小时，前12小时你必须在临床观察室内休息，不能外出。
二、在试验过程中对你做的所有检查都是本研究课题所需要的，不是为了其它目的或是有什么其它用途。
三、试验过程中可能出现的不适和可能给你带来的不便：
厄贝沙坦是一种新型抗高血压药，物血管紧张素II受体拮抗剂，它特异性地作用于血管紧张素II受体（AT1），产生抗高血压作用。由于厄贝沙坦疗效确切，在治疗剂量下几乎无不良反应，该药可望成为抗高血压的一线药物。给您的剂量是安全量，但不能完全排除发生不良反应的可能。
每个周期60个小时间，采血52毫升，不会损害您的健康。因为正常情况下，您全身的总血量为5000-6000毫升。而且，人体自身的造血功能旺盛，能很快补偿失去的血液。
四、本研究对你有无直接好处：
无
五、研究人员将以下述方式保护有关你个人的资料：
（1） 试验中所得到的所有有关你的资料将予以保密，除本项目的研究人员可以了解这些资料外，不会向任何其他人提供有关你个人的资料；
（2） 发表本项目研究结果或者申请研究成果等时，如须直接引用您的个人资料，不会用您的名字，只会以数字或字母代替。
六、在试验过程中您有权随时撤消本知情同意书并退出试验。
志愿受试者声明：
我已仔细阅读了本知情同意书内的所有内容，我提出的所有有关本试验的问题也得到了满意的回答，我志愿参加本试验。
志愿受试者签名：
证人签名：
日期： 年 月 日
安徽医科大学国家药品临床研究基地
临床药理研究试验记录
研究项目负责人：
研究项目名称：厄贝沙坦胶囊的相对生物利用度研究
受试者姓名：
编号：
编号： 电话：
性别：男
出生： 年 月
籍贯：
民族：
身高： cm
体重： kg
住址：
病 史
肝脏疾病（肝炎）：
胃肠道疾病（胃溃疡，结肠炎，克隆病）：
肾脏疾病（肾炎，肾功能衰竭）：
心血管疾病（高血压，冠心病，心率失常）：
肺脏疾病（肺结核，肺心病，哮喘）：
中枢疾病（癔病，癫痫，精神疾病）：
内分泌疾病（甲亢，糖尿病）：
吸烟史： 年
支/天
饮酒史： 年
毫升/天
近2周药物服用史：
药物过敏史：
体 格 检 查
体温： (C
脉搏： bpm
呼吸： /min
血压： mmHg
胸部：
腹部：
其它：
实 验 室 检 查
心电图:
肝功能：
乙肝表面抗原：
血常规：
尿常规：
大便常规
血肌酐：
尿常规：
粪常规：
研究项目负责人：
研究项目名称：厄贝沙坦胶囊的相对生物利用度研究
受试者姓名：
编号：
编号：
试验日期： 年 月 日
药物名称：
剂型： 给药途径：
规格：
给药剂量： 150 mg
生产单位：
生产日期： 批号：
服药前禁食时间： 10 小时
服药后禁食时间： 2 小时
给药时间： 时 分
12小时饮水量： ml 服药后排大便时间： 时 分
尿 液 收 集
收集持续时间： 给药后 小时
总尿量： 毫升
血 样 采 集 (每次采血量：3 ml)
序 号号
给药后（时）
规 定 采 血 时 间
实 际 采 血 时 间
1
0
时 分
时 分
2
0.25
时 分
时 分
3
0.5
时 分
时 分
4
0.75
时 分
时 分
5
1
时 分
时 分
6
1.5
时 分
时 分
7
2
时 分
时 分
8
4
时 分
时 分
9
8
时 分
时 分
10
12
时 分
时 分
11
24
时 分
时 分
12
36
时 分
时 分
13
48
时 分
时 分
14
60
时 分
时 分
15
时 分
时 分
记录者签名: 项目负责人签名：
研究项目负责人：
研究项目名称：厄贝沙坦胶囊的相对生物利用度研究
受试者姓名：
编号：
编号：
试验日期： 年 月 日
药物名称：
剂型： 给药途径：
规格：80 mg
给药剂量：
生产单位：
生产日期： 批号：
药物的不良反应或不良事件
症状或体征
发生时间
持续时间
严重程度
措施与结局
神经系统
眩晕
头痛
失眠
嗜睡
消化系统
恶心
呕吐
腹痛
腹胀
腹泻
便秘
便血
泌尿系统
尿少
尿多
尿频
尿急
血尿
心血管呼吸系统
心悸
心律失常
血压变化
气促
哮喘
其它
注：严重程度：0=无 1=轻度 2=中度 3=重度
医生签名: 项目负责人签名：
试验研究人员签名表
内 容
签 名
项目总负责人
项目执行负责人
临床研究负责人
样品分析负责人
医护人员
临床研究参加者
样品分析参加者
实验四 个例药物不良反应的判断
实验目的
1、掌握如何对个例药物不良反应进行准确的判断。
2、了解ADR的发现与判断程序。
3、熟悉ADR的判断标准及判断的常用方法。
二、ADR判断的要点：
1、发生反应的潜伏期 从用药开始时间到出现临床症状的间隔时间称为ADR的潜伏期。A型反应的潜伏期决定于致病药物的药理作用。B型反应的潜伏期，如果反应是属于变态反应性，其潜伏期决定于该种药物的变态反应特点；如果反应与遗传因素有关，应根据这种药物的药物遗传学判断该药的潜伏期。病人的用药史及药物不良反应史（包括个人和家庭成员）对B型反应诊断有重要参考价值。
2、鉴别诊断 主要目的是准确地排除药物以外的其它因素所造成的假象。应注意：（1）询问病史时要防止遗漏致病药物的用药史；（2）疾病表现是单种药物所引起的，抑或是数种药物相互作用引起的；（3）患者原有的基础疾病引起的可能性；（4）原先手术或诊断可能造成的后果；（5）其它诊断方法或治疗方法的可能影响；（6）安慰剂反应的可能性；（7）上述某几项因素综合作用的可能性。
3、从多种用药中找出致病药 从药物的鉴定、临床病理类型的引证、排除法、去激发与再激发、特殊试验方法等着手，找出致病药物。
三、ADR的发现与判断程序
应包括三个主要过程：首先对病人出现的不良情况（事件AE），医师应作出诊断，判定病人所患疾病或综合征的类型；其次是对AE进行鉴别，判定这一AE可能为药物所致，得出ADE的结论；最后作验证性检查，从而判定ADE很可能为药物所致，得出ADR的结论。
ADR因果关系的评估：（1）、复习有关出版文献。（2）、其它原因的鉴别。（3）、事件的时间顺序。（4）、药物浓度（水平）。（5）、去激发。（6）、激发。（7）、详细了解病人过去的有关反应。以上七个步骤是判断ADR最基本也是最重要的操作过程，必须认真分析各个步骤所得的结果，之后进行综合分析、判断。
四、ADR的判断标准
中国国家卫生部ADR监察中心制定的原则为：
（1）开始用药时间与可疑ADR出现有无合理的先后关系。
（2）可疑ADR是否符合该药品已知的ADR的类型。
（3）可疑ADR能否用并用药作用、病人的临床状况或其它疗法的影响来解释。
（4）停药或减量后，可疑ADR是否消失或减轻。
（5）再次接触同样药品后，同样反应是否重新出现。
根据这些原则，分5个级别来判断ADR，即肯定的、很可能的、可能的、可疑的（条件性的）、不可能的（很可疑的）。
肯定的：给药与反应有合理的时间顺序；在体液或组织液中测定得药物浓度；已知可疑药物的不良反应类型；去激发和再激发结果相符合。
很可能的：给药与反应有合理的时间顺序；已知可疑药物的不良反应类型；去激发结果正确，但不能被已知的病人临床特征来解释。
可能的：给药与反应有合理的时间顺序；已知可疑药物的不良反应类型，但可由病人的临床状况或其它疗法产生。
可疑的：给药与反应时间顺序相关；不遵循可疑药物的已知不良反应类型，不能用已知病人临床状况的特征来解释。
不可能的：不满足上述标准。
具体标准可参考表1。
表 药物不良反应因果关系判断标准
标准 肯定 很可能 可能 可疑
合理的时间顺序 是 是 是 是
已知药物的反应类型 是 是 是 否
去除原因可以改善 是 是 是或否 是或否
再次给药可重复出现 是 ？ ？ ？
反应可有另外解释 否 否 是 否
说明：？表示医德所限，不允许再重复给药；可疑表示有待进一步观察再分类
五、ADR判断的常用方法
1、ADR判断常用的术语
暴露和再暴露：健康志原者或患者在临床试验中接受了某种待评估的药物就是志原者或患者暴露于药物（expose to drug），也可以称为药物暴露（drug expose）。当患者暴露于某种药物出现了可疑的药物不良反应时，为了验证药物和药物不良反应之间的因果关系，可根据情况选用激发试验（诱发试验），就是再给患者用一次药，以观察不良反应是否再现，这一过程就叫做再暴露（repeated expose）.
激发和再激发（challenge and rechallenge）：意义与暴露和再暴露相同。
去激发（dechallenge）：撤药的过程即为去激发，亦有用除去暴露一词来描述此过程的。
2、ADR判断的方法包括临床医学中的常规诊断方法和ADR判断的专属性方法，确定病例报告中药物与可疑ADR之间因果关系有四种方法，即综合判断法、描述性系统评价法、记分评定法、统计学分析判断法。另外，开发诊断试验技术则可提供更多可靠的鉴别诊断材料。其中记分评定法、统计学分析判断法具有定量化的特点，评定准确程度和一致性大大提高，这是ADR判断方法的发展方向。这里仅介绍后者。
3、统计学分析方法
（1）泊松分布判断法
泊松分布的概念 泊松分布（Poisson distribution）最初是作为二项分布的一种特例提出来的，当某事件的发生率π或（1-π）很小（比如小于0.05），而每次的观察单位数n很大时，用二项分布计算某事件出现的次数X（X=0，1，2，…，n）的概率很麻烦，而用泊松分布则能得到良好的概率近似值。后来泊松分布发展成为描述小概率事件出现规律性的一种重要的离散型分布。本法适用于发生频率很小（小于1%）的不良反应的判断。
泊松分布概率计算公式
p（X）=e-μ·μx/X! （X=0，1，2，…，n）
式中e为自然对数的底，约为2.71828。μ为总体平均数，μ=nπ。p（X）亦可按下列递推公式计算：
p（0）=e-μ 当X=0时
p（X）= p（X-1）·μ/X 当X=1，2，…时
泊松分布的应用
例1 用某药治疗40人，一人出现精神抑郁症，此现象可能为药物引起，也可能在不用药的人群中出现，过去抑郁症在人群中发生率为0.01%，问用某药治疗的人群中精神抑郁症的出现是否比一般人群中的要高即40个服药病人中出现1例抑郁症是否与服药有关？
本例的观察单位为40人，出现精神抑郁症人数X=1，已知一般人群中抑郁症出现的概率π0=0.0001，按每40人的观察单位中出现精神抑郁症的平均数μ0=nπ0=40（0.0001）=0.004，检验假设为H0：μ=μ0，备择假设为H1：μ>μ0，给定单侧a=0.05。需计算p（1≤X）的值。
p（1≤X）=1- p（0）
p（0）= e0.004=0.99600799
p（1≤X）=1- p（0）=0.00399201
由于有p（1≤X）<0.05，故拒绝检验假设而接受备择假设，认为用某药治疗的人群中精神抑郁症的出现比一般人群中的要高，说明这一例在不用药人群中出现的概率太小，因而可以认为40个服药病人中出现1例抑郁症与服药有关。
（2）贝叶斯判别（Bayes discrimination）法
贝叶斯判别的基本思想 有一个新样品，计算把它归入每一类的概率，最后把该新样品判归概率最大的一类中去。由于概率计算不太方便，实际上还是对每一类建立一个判别函数式，然后按函数值的大小作判别归类。
此法基于贝叶斯判别的基本思想，将一个可能的药物不良事件作为一种特殊的条件概率对病例加以鉴别诊断。本法中要计算两种主要方面的概率：一是事件以往药物引起的可能性相对于其它可能性的概率；二是待评定病例中药物引起的可能性相对于其它可能性的概率。应用公式为：
PsO （后验机会比，posterior odds）=PrO（先验机会比，prior odds）×LR（拟然比）
= PrO×LR（Hi，病史及用药史）×LR（Ti，服药的起始时间）×LR（Ch，特征）
×LR（De，去激发）×LR（Re，再激发）
最终结果用后验概率PsP（posterior probability）表示，即PsP= PsO/（PsO+1）
例2 某一病人用了镇痛剂45min后发生恶心，用贝叶斯判别法来计算因果关系：
PrO（先验机会比，prior odds）：以往资料记载该药致恶心的发生率为1/8，都在用后1h内发生；病人所患疾病引起恶心的发生率为1/10，在发病的48h内发生。
则仅由药物引起的机会：P（D→E，由药物D引起事件）/B（背景资料）=1/8-1/10=1/40
非药物引起的机会：：P（D→|E，药物未引发事件）/B（背景资料）=1/10=4/40
过去用该药治疗本病发生恶心的概率为：PrO= P（D→E）/B /{P（D→|E）/B}=1/40/（4/40）=0.25
LR求算：由于药物与非药物致恶心的特点、过程相同，病例又没有经历去激发和再激发试验，完全符合该药引起恶心的时间特征在1h内发生，即：P（T：D→E）/B=1.0
非药物引起恶心的机会：如果为非药物所致则48小时内任何1个小时都可能发生，而本例是在1h内发生的，故P（T：D→|E）/B=1/48
那么，LR= P（T：D→E）/B/{P（T：D→|E）/B}=1/（1/48）=48
PsO= PrO×LR=0.25×48=12，即药物比非药物致病的机会大12倍。
药物引起恶心的概率为：PsP=PsO/（PsO+1）=12/（12+1）=12/13=0.92
目前贝叶斯判别法已用于评价各种严重的不良事件，如肝中毒、肾中毒等。
（3）利用死亡率统计调查不良反应发生的原因
有些不良反应调查不适于运用病例对照或前瞻性方法来研究，简单的死亡统计资料可以合理地分析问题。如通过不同国家使用气雾剂类型和销售量与副作用、死亡人数作比较，可以找出哮喘病人使用气雾剂后发生不良反应的原因，肯定了使用浓气雾剂为致病、致死因素，因没有使用这种剂型的国家无这种死亡增加现象。
（4）干预试验法 干预试验可判断药物与不良反应的关系。
如反应停（商品名Grippex）有安眠和镇静作用，常为孕妇所使用。在联邦德国，从1959年开始在市场销售，1960年销售量迅速上升。1960年底和1961年初出生短肢畸形病例数亦随之上升。两条曲线相隔3个季度，故反应停销售量曲线正与这些病例的母亲怀孕初期相吻合。1961年12月对反应停进行干预，从联邦德国市场撤消，反应停停止出售后，1962年下半年以后出生的儿童便很少发生这种畸形。说明此不良反应是反应停所致。见图1。
图1 联邦德国反应停销售总量（虚线）与短肢畸形病例数（实线）的时间分布
（Davis and Dobbling.1974）
六、讨论与练习
1、如何认识个例ADR判断的复杂性。
2、一般人群中某异常反应发生率约为1/万。今有一批药品在受试的100人中有1人出现该异常反应。检验该批药品的异常反应率是否高于一般人群即是否与服药有关。
实验五 药物临床研究的盲法设计
一、实验目的
1、掌握如何进行药物临床研究的盲法设计；
2、熟悉盲法设计的注意问题；
3、了解盲法设计的意义。
二、盲法的分类及应用
盲法（blinding，masking）是指在药品临床试验中，为避免研究者和（或）受试者因已知道不同试验分组所用药物类型而对有关评价产生影响（偏倚）的一种方法。盲法主要分为单盲试验（Single Blind Trial）、双盲试验（Double Blind Trial）及双盲、双模拟试验（Double Blind，Double Dummy Trial）。
（1）在单盲研究中，研究者知道不同试验组所用药物而受试者不了解该情况。其优点是研究者可更好地观察研究对象，必要时可以及时处理研究对象可能发生的意外问题，保障受试者的安全；缺点为不能避免研究者方面所带来的偏倚。（2）在双盲研究中，研究者和受试者双方都不知道研究的具体情况，需要第三者负责安排、控制整个试验，主要用于药物临床研究。（3）双盲、双模拟试验即在双盲研究中为试验药与对照药各准备一种安慰剂，以达到试验组与对照组在用药的外观与给药方法上的一致。
临床试验应尽量采用盲法，但是采用盲法也会带来许多技术上的困难，尤其是双盲法，实验的药物与对照药物或安慰剂，在剂型、外观、气味、包装上均需一致，分发办法、保密方法都要有一套措施。试验的组织者采用代码来区分两组分别使用的药物，而且只有组织者掌握这一信息。只有在研究结束时，或由于安全的问题需终止试验时才允许公开。如果采用盲法，一定要制订严格的措施，不致于中途破密。
三、设计和实施方法
本实验重点强调双盲。现以某注册分类3的新药（抗生素）随机盲法对照临床试验（以肺、泌尿感染为主要病种，由3家医院进行）为例介绍双盲设计及实施方法。
1、属注册分类3的新药，应当进行至少100对随机对照临床试验。多个适应症的，每个主要适应症的病例数不少于60对。采取双盲法设计，双盲试验病例数安排见表1。
表1 双盲试验病例数安排
医 院
新药组
对照组
甲 院
20
20
乙 院
20
20
丙 院
20
20
合 计
60
60
2、双盲法设计包括一级设盲和二级设盲。为保证组间主要因素的可比性，又能适应临床床位周转的特点，减少就诊季节对疗效的干扰，采取分层分段均衡随机进行一级设盲是较好的方法。本实验为减少季节影响，避免出现一连串A药或一连串B药，取每4-10例为一段进行分段随机，即每4-10人中A或B药的分布随机地各占一半，见表2。
表2 一级设盲表
医院
分段随机（每4例为一段，以下号码为就诊序号）
1
2
3
4
5
6
7
8
…
41
42
43
44
45
…
甲院
A
B
B
A，
A
A
B
B，
…
A
B
A
B，
B
…
乙院
A
A
B
B，
B
A
A
B，
…
A
B
B
A，
A
…
丙院
B
A
A
B，
A
B
A
B，
…
B
A
A
A，
B
…
表中A，B按随机表或计算机随机法安排，但A或B何者为供试品，何者为对照药，由二级设盲表随机规定，见表3。
表3 二级设盲表
A为对照药
B为供试药
3、实施方法 ① 负责人指定专人指导药厂，按表2，表4进行大袋的封面编号，放入药品及中小袋，核对无误后提交临床研究单位。② 临床研究单位按患者就诊顺序，取用药袋。③ 临床研究结束后，按一级设盲解盲，以便对A，B进行统计分析。④ 最后将二级设盲表解盲，进行临床疗效分析总结。
表4 双盲试验药袋封面及内容
封面：甲院1 大袋：放对照药
中袋：41，43小袋：对照药抢救措施
封面：甲院2 大袋：放供试药
中袋：42，45小袋：供试药抢救措施
封面：甲院3 大袋：放供试药
中袋：44，45小袋：供试药抢救措施
封面：甲院4 大袋：放对照药
中袋：41，43小袋：对照药抢救措施
封面：甲院5 大袋：放对照药
中袋：43，46小袋：对照药抢救措施
封面：甲院6 大袋：放对照药
中袋：41，46小袋：对照药抢救措施
封面：甲院7 大袋：放供试药
中袋：42，44小袋：供试药抢救措施
封面：甲院8 大袋：放供试药
中袋：42，45小袋：供试药抢救措施
封面：甲院41
大袋：放对照药
中袋：43，46小袋：对照药抢救措施
封面：甲院42
大袋：放供试药
中袋：44，45小袋：供试药抢救措施
封面：甲院43
大袋：放对照药
中袋：41，46小袋：对照药抢救措施
封面：甲院44
大袋：放供试药
中袋：42，45小袋：供试药抢救措施
大袋：内装供试药或对照药；中袋：内装与大袋药相同的2-3个递补号，例如41、43、46为甲院A药的递补号，42、44、45为甲院B药递补号。以便在受试者中途剔除时，可以补用指定的药袋，而不破盲；小袋：写有该袋实际放入的药名及抢救措施的字条，以便发生严重不良反应时，可以及时抢救而不会致全面破盲。
四、盲法设计的注意问题
1、安慰剂（placebo）：应与所模拟的药品在剂型，外形等方面完全一致，并不含有任何有效成份。
2、胶囊技术：将试验药与对照药装入外形相同的胶囊中以达到双盲目的的技术。因改变剂型可能会改变药代动力学或药效学的特性，因此，需有相应的技术资料支持。
3、药品编盲与盲底保存：由不参与临床试验的人员根据已产生的随机数对试验用药进行分配编码的过程称为药品编盲。随机数、产生随机数的参数及试验用药编码统称为双盲临床试验的盲底。盲底应一式二份密封，交主要研究单位的国家药品临床研究基地和申办者保存。
4、应急信件与紧急揭盲
应急信件（emergency envelope），内容为该编号的受试者所分入的组别及用药情况。在发生紧急情况，由研究人员按试验方案规定的程序拆阅。一旦被拆阅，该编号病例将中止试验，研究者应将中止原因记录在病例报告表中。
5、揭盲规定
试验方案中，当试验组（treatment group）与对照组（control group）的例数相等时，一般采用两次揭盲（unblinding）法。两次揭盲都由保存盲底的有关人员执行。
五、讨论
1、我国规定Ⅲ期临床试验可按平行随机设计进行。供试药组例数不少于300例。对照药另定，一般不宜少于供试药的50%，因此两者例数可以不等，某药平行随机双盲试验病例数安排见表5。如何以病种分层、以每5-6例为一段，采取分层分段均衡随机进行一级设盲和二级设盲？药袋的封面及内容如何安排？
表5 平行随机双盲试验病例数安排
医院
供试药组
对照组
呼吸系统
泌尿系统
呼吸系统
泌尿系统
甲 院
80
40
40
40
乙 院
60
40
30
30
丙 院
60
40
30
30
合 计
200
120
100
100
2、双盲、双模拟试验应注意哪些问题？
3、在应急情况下如何揭盲？
