第九章 生物检测技术
?采用生物体对被检测物质的特有反应而
鉴定被检测物质的质量和功效的方法。
?生物体主要是各种微生物和某些动物。
?检测范围：生物效价和安全性实验
一 生物检测的主要内容
?生物检测常用 标准样品 对照法
?国际标准样品 —— 联合国世界卫生组织
生物检定委员会，丹麦哥本哈根血清所，
伦敦国家医研所
?国家标准（参考标准） —— 本国制备，
用国际标样校合，北京药品与生物制品
研究所
?实验室对照样品 —— 本室制备，要与国
家标样、国际标样校合
1 生物效价测定
? 效价：指某一物质引起生物反应的功效单位，
可用理化方法检测，也可用生物检测方法测定。
? 生物法：各类抗生素，维生素及氨基酸等生长
因子。
? 一个青霉素效价单位：能在 50mL肉汤培养基
中完全抑制金色葡萄球菌发育的最小青霉素剂
量。
? 一个链霉素效价单位：能在 1mL肉汤培养基中
完全抑制大肠杆菌发育的最小链霉素剂量。
? 国际标准单位 IU，对纯的化学物质，可用重量
来表示，如 1mg链霉素能抑制 1000mL培养基中
大肠杆菌的繁殖，则含有 1000IU,1IU=1μ g
2 安全性试验
? （ 1）毒性试验：常用动物进行实验
? LD50
? （ 2）局部刺激性试验
? 将被检药物注射进动物体内，观察在注射部位
是否出现炎症或产生过敏反应等局部刺激现象。
? 阳性 —— 不能临床使用
阴性 —— 可供临床使用
? （ 3）溶血实验
? 检测药物是否引起红血球膜破裂而释放出血红
蛋白
? （ 4）热原试验
? 检测药物中有没有使动物体温升高的致热性物
质存在
? 一般用家兔试验
? （ 5）过敏试验
? 检测药物中有无引起过敏反应的物质存在的一
种方法。
? 过敏反应
? 致敏原
? 一般豚鼠或雄性小白鼠试验
? （ 6）变异原试验
? 检测药物或食物中有没有引起生物产生变异的
物质（变异原）存在。可用动物和微生物检测。
二 抗生素的生物检测
（生长抑制剂生物效价检测）
?有些可以用化学检测或光学检测法进行
检测，广泛采用生物检测法。
?利用抗生素对特定微生物的生长起抑制
作用而进行检测的技术。
?可用于已知抗生素的效价测定，也可用
于检出未知的抗生素。
?方法：稀释法，扩散法
1 稀释法
? 将样品和标准抗生素分别进行不同稀释度的稀
释，加入培养基中，用指定的适当的菌株接种，
培养后比较微生物的生长情况，从而测定样品
的效价。
? 固体平板，接入相同量指示菌，比较生长菌落
数；
? 液体培养基，接入相同量指示菌，比较 OD值。
? 还可测抗生素的最低抑菌浓度和半致死剂量
LD50
2 扩散法
? 利用扩散作用形成连续的浓度梯度，试验菌在
最低抑菌浓度范围内生长受阻，形成抑菌圈，
从抑菌圈直径测定抗生素效价。
? 用标准品作对照，选择在试验菌最适生长条件
下培养。
? （ 1）纸片－平板法（纸碟法）
? （ 2）圆筒－平板法（管碟法、杯碟法）
? 应用最广泛的生物检测法
? 双层平板
? 标准曲线或计算得到样品效价
? （ 3）双层试管法
? 试管含试验菌及指示剂美蓝（最终浓度 1ppm）
琼脂培养基，垂直放置，加入标准液和样品液，
培养后测定蓝色抑菌带高度，利用标准曲线可
得样品效价。
? （ 4）生物生长图谱法
? 样品液进行纸层析，层析后风干平铺在含试验
菌平板上,4℃ 几小时，取去滤纸,37 ℃16 ～
18h，得到生长图谱，可检测样品中的抗生素
或抑菌物质种类，并可得 Rf
? 也可用薄层层析分离后测定
三 生长促进物质的生物检测
?生长促进物质：对生物生长繁殖有促进
作用或不可欠缺的物质，如维生素、氨
基酸、激素等。
?一般以微生物为试验材料
?方法,
? 1 生长抑制物质生物检测方法均可用于
生长促进物质的检测
全合成培养基（不含待测物 ）
结果通过长菌直径或长菌高度而测定
? 2 比浊法
?采用适宜菌株和限量全合成液体培养基
加不同浓度待测样品,37 ℃, 18～ 24h，
测定 OD，与标准曲线对照，查浓度
?3 滴定法
?在以乳酸菌为试验菌的场合，随着菌生
长而生成乳酸，一定范围内生成乳酸的
量与添加的生长促进物质的量成正比。
?培养结束后，用 0.05 mol/L或 0.1 mol/L
NAOH滴定，与标准曲线对照
思考题
?生物检测内容主要有哪些？安全性检测
包括哪些内容？
?如何测定生物生长抑制物质和生长促进
物质的效价？注意测定效价时的注意事
项。
?名词解释
? LD50、效价、过敏反应、变异原、热原、
致敏原、溶血试验、局部刺激性试验
?采用生物体对被检测物质的特有反应而
鉴定被检测物质的质量和功效的方法。
?生物体主要是各种微生物和某些动物。
?检测范围：生物效价和安全性实验
一 生物检测的主要内容
?生物检测常用 标准样品 对照法
?国际标准样品 —— 联合国世界卫生组织
生物检定委员会，丹麦哥本哈根血清所，
伦敦国家医研所
?国家标准（参考标准） —— 本国制备，
用国际标样校合，北京药品与生物制品
研究所
?实验室对照样品 —— 本室制备，要与国
家标样、国际标样校合
1 生物效价测定
? 效价：指某一物质引起生物反应的功效单位，
可用理化方法检测，也可用生物检测方法测定。
? 生物法：各类抗生素，维生素及氨基酸等生长
因子。
? 一个青霉素效价单位：能在 50mL肉汤培养基
中完全抑制金色葡萄球菌发育的最小青霉素剂
量。
? 一个链霉素效价单位：能在 1mL肉汤培养基中
完全抑制大肠杆菌发育的最小链霉素剂量。
? 国际标准单位 IU，对纯的化学物质，可用重量
来表示，如 1mg链霉素能抑制 1000mL培养基中
大肠杆菌的繁殖，则含有 1000IU,1IU=1μ g
2 安全性试验
? （ 1）毒性试验：常用动物进行实验
? LD50
? （ 2）局部刺激性试验
? 将被检药物注射进动物体内，观察在注射部位
是否出现炎症或产生过敏反应等局部刺激现象。
? 阳性 —— 不能临床使用
阴性 —— 可供临床使用
? （ 3）溶血实验
? 检测药物是否引起红血球膜破裂而释放出血红
蛋白
? （ 4）热原试验
? 检测药物中有没有使动物体温升高的致热性物
质存在
? 一般用家兔试验
? （ 5）过敏试验
? 检测药物中有无引起过敏反应的物质存在的一
种方法。
? 过敏反应
? 致敏原
? 一般豚鼠或雄性小白鼠试验
? （ 6）变异原试验
? 检测药物或食物中有没有引起生物产生变异的
物质（变异原）存在。可用动物和微生物检测。
二 抗生素的生物检测
（生长抑制剂生物效价检测）
?有些可以用化学检测或光学检测法进行
检测，广泛采用生物检测法。
?利用抗生素对特定微生物的生长起抑制
作用而进行检测的技术。
?可用于已知抗生素的效价测定，也可用
于检出未知的抗生素。
?方法：稀释法，扩散法
1 稀释法
? 将样品和标准抗生素分别进行不同稀释度的稀
释，加入培养基中，用指定的适当的菌株接种，
培养后比较微生物的生长情况，从而测定样品
的效价。
? 固体平板，接入相同量指示菌，比较生长菌落
数；
? 液体培养基，接入相同量指示菌，比较 OD值。
? 还可测抗生素的最低抑菌浓度和半致死剂量
LD50
2 扩散法
? 利用扩散作用形成连续的浓度梯度，试验菌在
最低抑菌浓度范围内生长受阻，形成抑菌圈，
从抑菌圈直径测定抗生素效价。
? 用标准品作对照，选择在试验菌最适生长条件
下培养。
? （ 1）纸片－平板法（纸碟法）
? （ 2）圆筒－平板法（管碟法、杯碟法）
? 应用最广泛的生物检测法
? 双层平板
? 标准曲线或计算得到样品效价
? （ 3）双层试管法
? 试管含试验菌及指示剂美蓝（最终浓度 1ppm）
琼脂培养基，垂直放置，加入标准液和样品液，
培养后测定蓝色抑菌带高度，利用标准曲线可
得样品效价。
? （ 4）生物生长图谱法
? 样品液进行纸层析，层析后风干平铺在含试验
菌平板上,4℃ 几小时，取去滤纸,37 ℃16 ～
18h，得到生长图谱，可检测样品中的抗生素
或抑菌物质种类，并可得 Rf
? 也可用薄层层析分离后测定
三 生长促进物质的生物检测
?生长促进物质：对生物生长繁殖有促进
作用或不可欠缺的物质，如维生素、氨
基酸、激素等。
?一般以微生物为试验材料
?方法,
? 1 生长抑制物质生物检测方法均可用于
生长促进物质的检测
全合成培养基（不含待测物 ）
结果通过长菌直径或长菌高度而测定
? 2 比浊法
?采用适宜菌株和限量全合成液体培养基
加不同浓度待测样品,37 ℃, 18～ 24h，
测定 OD，与标准曲线对照，查浓度
?3 滴定法
?在以乳酸菌为试验菌的场合，随着菌生
长而生成乳酸，一定范围内生成乳酸的
量与添加的生长促进物质的量成正比。
?培养结束后，用 0.05 mol/L或 0.1 mol/L
NAOH滴定，与标准曲线对照
思考题
?生物检测内容主要有哪些？安全性检测
包括哪些内容？
?如何测定生物生长抑制物质和生长促进
物质的效价？注意测定效价时的注意事
项。
?名词解释
? LD50、效价、过敏反应、变异原、热原、
致敏原、溶血试验、局部刺激性试验
