临床病原学检查
[目的要求 ]
掌握：感染性疾病的诊断和治疗原则
熟悉：感染性疾病病原学实验诊断及
抗生素治疗的主要实验室监测方法
了解：病原学诊断的重要性，现代感
染的类型和病原微生物的变迁
病原体检查的作用
1.感染性疾病的明确诊断
2.通过药敏试验指导临床合理用药
3.病原体监控和耐药性监控
第一节
标本采集、运送和检查方法
一,标本采集和运送
? 采集标本注意点,
1.标本容器必须无菌或清洁容器
2.选择最佳时间采集标本，在抗菌药物使
用前
3.获取标本时，须严格无菌操作
4.标本采集后，应尽快送实验室
㈠ 血 液
? 发热初期和高峰期采集
? 抗菌药物治疗前
? 成人每次 10-20ml，婴幼儿 1-2ml
? 标本不用抗凝剂
? 24小时内，可在不同部位采血 3次
㈡ 尿 液
? 无菌采集清洁中段尿
? 导尿或膀胱穿刺获得
㈢ 粪 便
? 取含脓、血或粘液粪便置于清洁容
器内
? 排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子
? 对传染性腹泻须三次送检
㈣ 呼吸道标本
1.痰：⑴自然咳痰法
⑵气管镜采集法
2.鼻咽拭标本：同痰标本用清水漱口
后采集
㈤ 脑脊液与其他无菌体液
? 脑脊液标本应立即保温送检
? 胸腹水等体液标本应抽取 2-5ml送检
㈥ 泌尿生殖道标本
? 性传播疾病取尿道口分泌物、阴道
宫颈口分泌物
? 生殖道疱疹常穿刺取疱疹液
㈦ 创伤、组织和脓肿标本
? 开放性脓肿：无菌棉拭采集脓液
? 封闭性脓肿：无菌注射器穿刺抽取
二,病原体检查的基本方法
1.临床标本细菌检验一般程序
一般程序
标本
直接涂片, 染色镜检 分离培养 增菌培养
需氧培养 二氧化碳培养 厌氧培养
观察菌落形态
单个菌落 涂片, 染色镜检
血清学鉴定 生化鉴定 药敏试验
确定致病菌发出报告
2.病原体诊断的基本方法
?直接显微镜检测 （ microscopic examination）
⑴染色标本检查法：革兰染色和抗酸染色
⑵不染色标本检查法：悬滴法和压滴法
2.病原体诊断的基本方法
?病原体分离培养 (isolation and
culture)和鉴定 (identification)
? 培养基选择
? 生长条件：一般大气条件
厌氧条件
微需氧条件
2.病原体诊断的基本方法
?鉴定技术,
? 生化鉴定
? 血清学鉴定
? 数码鉴定
? 自动化鉴定
2.病原体诊断的基本方法
?血清学诊断：查特异性抗体 ——肥达氏
试验
?病原体特异性抗原检测
?病原体核酸检测：查特异基因片段
DNA/RNA——PCR,DNA探针杂交技术
第二节
细菌耐药性检查
一,抗微生物药物敏感性试验（ AST）
1.定义：对敏感性不能预测的临床分
离菌株进行药敏试验，以指导临床
选择治疗药物和了解区域或医院内
常见病原菌耐药性变迁，有助于临
床经验性治疗选药。
一,抗微生物药物敏感性试验（ AST）
2.常用敏感性试验方法
⑴手工试验,① K-B纸片琼脂扩散法
结果表示,S-Susceptible
I-Intermediate
R-Resistant
② 稀释法（ MIC）
③ Etest
④ 联合药敏试验
一,抗微生物药物敏感性试验
（ AST）
⑵ 自动化仪器 Vitek,Microscan
⑶ 分子试验 PCR直接检测 mecA基因
⑷补充试验 Nitrocefin
一,抗微生物药物敏感性试验（ AST）
3.药敏试验结果与临床抗生素剂量关系
敏感 (S)——一般剂量有效，推荐使用该抗生素用于
临床治疗
中介 (I)——大剂量有效，提示药物 MIC接近体液或组
织可达到药物浓度
耐药 (R)——大剂量无效,即常规用药剂量不能达到
MIC
一,抗微生物药物敏感性试验（ AST）
4.K-B纸片扩散试验的影响因素
琼脂厚度 与抑菌圈直径成反比
菌液浓度 与抑菌圈直径成反比
药敏试纸 含量 –与抑菌圈直径成反比
保存温度 –20℃,使用前室温平衡
30min后开启
湿度 -密封容器，硅胶防潮
NCCLS标准 培养种类 (MH),厚度 (4mm)
接种量 (0.5MF)
选药标准,判读标准,质控标准
质控参考菌
金黄色葡萄球菌 ATCC 25923
大肠埃希菌 ATCC 25922
铜绿假单胞菌 ATCC 26853
二,耐药机制及耐药性监测试验
1.耐药菌株,
耐甲氧西林葡萄球菌（ MRS）
耐青霉素肺炎链球菌（ PRSP）
耐万古霉素肠球菌（ VRE）
质粒介导的超广谱 ?-内酰胺酶（ ESBL）
多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单
胞菌和不动杆菌
二,耐药机制及耐药性监测试验
2.耐药机制,
⑴药物渗入细菌减少
⑵产生灭火酶和钝化酶 (?-内酰胺酶 )
⑶ 细菌抗生素结合蛋白发生改变（ PBP）
⑷代谢拮抗剂产生
二,耐药机制及耐药性监测试验
3.耐药性监测的特殊试验
⑴ ?-内酰胺酶检测
方法,头孢哨噻吩滤纸片法 (nitrocefin)
意义, ?-内酰胺酶检测阳性,即对青霉素、
氨卞西林等抗生素耐药
二,耐药机制及耐药性监测试验
⑵ 超广谱 ?-内酰胺酶检测（ ESBL）
定义：是水解青霉素，一代、二代和三代
头孢菌及单酰胺类药物的酶，产生 ESBL
的细菌对上述抗生素耐药。
ESBL主要存在于大肠杆菌和肺炎克雷伯
菌等革兰阴性菌中。
二,耐药机制及耐药性监测试验
⑵ 超广谱 ?-内酰胺酶检测（ ESBL）
方法：纸片扩散法和稀释法
意义,ESBL阳性预示对头孢泊肟、头孢他
啶、头孢噻肟、头孢曲松和氨曲南等抗
菌药物无效。
二,耐药机制及耐药性监测试验
⑶ 琼脂筛选试验（ agar screen test）
是以单一药物单一浓度检测细菌耐药性，
如耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠
球菌检测。
二,耐药机制及耐药性监测试验
⑷ 耐药基因检测
如 MRSA中 mecA基因检测
耐药性统计和分析
WHONET
建立本院、本地区和本国的细菌耐药
性监测数据库和网络
0
20
40
60
80
100
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?÷2?
±±2?
第三节
医院感染检查 （ Nosocomial
Infection）
医院感染检查
1.定义,病人入院时不存在,也不处于潜伏
期，而在医院内发生的感染，包括医院
内获得而在出院后发病的感染。
医院感染检查
2.医院感染常见病原体（细菌）：革
兰阴性杆菌、革兰阳性球菌
（ MRSA）、厌氧菌和深部真菌等
医院感染检查
3.感染源, 外源或内源性病原体
外源性：其他住院患者、医务人员、探望
者（多为条件致病菌）
内源性：患者自身皮肤、口腔、咽部和胃
肠道固有的正常菌群等（免疫力低下患
者）
医院感染检查
4.常见临床类型
下呼吸道感染
尿路感染
手术切口感染
胃肠道感染
血液感染
皮肤和组织感染
医院感染检查
5.感染途径,
? 接触传播
? 空气、飞沫传播
? 经注射或输液、输血传播
? 经口传播
医院感染检查
6.易感因素,
? 年龄：老年和婴幼儿
? 慢性疾病患者
? 基础疾病或医源性
? 烧伤或创伤产生坏死性组织
? 大量使用抗生素
? 接受侵袭性治疗操作
医院感染检查
7.医院感染常见病原菌监测
? 尿液标本
病原菌 ——大肠埃希菌，变形杆菌，
肺炎克雷伯氏菌，肠球菌，金黄色
葡萄球菌，铜绿色假单胞菌
菌落计数 >104/ml以上 ——尿路感染
医院感染检查
7,医院感染常见病原菌监测
? 痰（咽拭子）培养
病原菌 ——肺炎链球菌，肺炎克雷
伯氏菌，大肠埃希菌，肠球菌，金
黄色葡萄球菌，铜绿色假单胞菌等
半定量 3+~4+为致病菌,1+~2+怀疑
为污染菌
医院感染检查
7,医院感染常见病原菌监测
? 痰（咽拭子）培养
甲型溶血性链球菌是亚急性细菌性心
内膜炎的主要致病菌
医院感染检查
7,医院感染常见病原菌监测
?粪培养
病原菌 ——金黄色葡萄球菌，伤寒
及其他沙门氏菌，志贺氏菌属，致
病性大肠埃希菌，霍乱弧菌，副溶
血性弧菌，弯曲菌，念珠菌等
医院感染检查
7.医院感染常见病原菌监测
?血培养,
病原菌：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄
球菌等
单次血培养不易区分污染菌或感染菌。
两次培养均为同种皮肤正常菌群可认
为感染菌。
医院感染检查
8.医院环境监测和消毒灭菌监测
?空气培养：沉降法采样
?物体表面监测：压印法
?医务人员手部细菌监测
?消毒灭菌效果监测
小 结
复习思考题,
名词解释：微生物直接检测、微生物
非培养检测、医院感染、药敏试验、
耐药性、联合用药
问答题,
1.简述病原学诊断的基本原则
2.医院感染的定义、感染源、感染途径及
易感因素
3.抗生素敏感试验的结果解释以及它们与
临床抗生素剂量的关系
4,各种临床标本中的主要致病菌及临床
意义
5.什么是药敏试验及基本检验方法
? 参考书,
, 现代病原学检验与临床实践,
上海科学技术文献出版社
倪语星 主编
[目的要求 ]
掌握：感染性疾病的诊断和治疗原则
熟悉：感染性疾病病原学实验诊断及
抗生素治疗的主要实验室监测方法
了解：病原学诊断的重要性，现代感
染的类型和病原微生物的变迁
病原体检查的作用
1.感染性疾病的明确诊断
2.通过药敏试验指导临床合理用药
3.病原体监控和耐药性监控
第一节
标本采集、运送和检查方法
一,标本采集和运送
? 采集标本注意点,
1.标本容器必须无菌或清洁容器
2.选择最佳时间采集标本，在抗菌药物使
用前
3.获取标本时，须严格无菌操作
4.标本采集后，应尽快送实验室
㈠ 血 液
? 发热初期和高峰期采集
? 抗菌药物治疗前
? 成人每次 10-20ml，婴幼儿 1-2ml
? 标本不用抗凝剂
? 24小时内，可在不同部位采血 3次
㈡ 尿 液
? 无菌采集清洁中段尿
? 导尿或膀胱穿刺获得
㈢ 粪 便
? 取含脓、血或粘液粪便置于清洁容
器内
? 排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子
? 对传染性腹泻须三次送检
㈣ 呼吸道标本
1.痰：⑴自然咳痰法
⑵气管镜采集法
2.鼻咽拭标本：同痰标本用清水漱口
后采集
㈤ 脑脊液与其他无菌体液
? 脑脊液标本应立即保温送检
? 胸腹水等体液标本应抽取 2-5ml送检
㈥ 泌尿生殖道标本
? 性传播疾病取尿道口分泌物、阴道
宫颈口分泌物
? 生殖道疱疹常穿刺取疱疹液
㈦ 创伤、组织和脓肿标本
? 开放性脓肿：无菌棉拭采集脓液
? 封闭性脓肿：无菌注射器穿刺抽取
二,病原体检查的基本方法
1.临床标本细菌检验一般程序
一般程序
标本
直接涂片, 染色镜检 分离培养 增菌培养
需氧培养 二氧化碳培养 厌氧培养
观察菌落形态
单个菌落 涂片, 染色镜检
血清学鉴定 生化鉴定 药敏试验
确定致病菌发出报告
2.病原体诊断的基本方法
?直接显微镜检测 （ microscopic examination）
⑴染色标本检查法：革兰染色和抗酸染色
⑵不染色标本检查法：悬滴法和压滴法
2.病原体诊断的基本方法
?病原体分离培养 (isolation and
culture)和鉴定 (identification)
? 培养基选择
? 生长条件：一般大气条件
厌氧条件
微需氧条件
2.病原体诊断的基本方法
?鉴定技术,
? 生化鉴定
? 血清学鉴定
? 数码鉴定
? 自动化鉴定
2.病原体诊断的基本方法
?血清学诊断：查特异性抗体 ——肥达氏
试验
?病原体特异性抗原检测
?病原体核酸检测：查特异基因片段
DNA/RNA——PCR,DNA探针杂交技术
第二节
细菌耐药性检查
一,抗微生物药物敏感性试验（ AST）
1.定义：对敏感性不能预测的临床分
离菌株进行药敏试验，以指导临床
选择治疗药物和了解区域或医院内
常见病原菌耐药性变迁，有助于临
床经验性治疗选药。
一,抗微生物药物敏感性试验（ AST）
2.常用敏感性试验方法
⑴手工试验,① K-B纸片琼脂扩散法
结果表示,S-Susceptible
I-Intermediate
R-Resistant
② 稀释法（ MIC）
③ Etest
④ 联合药敏试验
一,抗微生物药物敏感性试验
（ AST）
⑵ 自动化仪器 Vitek,Microscan
⑶ 分子试验 PCR直接检测 mecA基因
⑷补充试验 Nitrocefin
一,抗微生物药物敏感性试验（ AST）
3.药敏试验结果与临床抗生素剂量关系
敏感 (S)——一般剂量有效，推荐使用该抗生素用于
临床治疗
中介 (I)——大剂量有效，提示药物 MIC接近体液或组
织可达到药物浓度
耐药 (R)——大剂量无效,即常规用药剂量不能达到
MIC
一,抗微生物药物敏感性试验（ AST）
4.K-B纸片扩散试验的影响因素
琼脂厚度 与抑菌圈直径成反比
菌液浓度 与抑菌圈直径成反比
药敏试纸 含量 –与抑菌圈直径成反比
保存温度 –20℃,使用前室温平衡
30min后开启
湿度 -密封容器，硅胶防潮
NCCLS标准 培养种类 (MH),厚度 (4mm)
接种量 (0.5MF)
选药标准,判读标准,质控标准
质控参考菌
金黄色葡萄球菌 ATCC 25923
大肠埃希菌 ATCC 25922
铜绿假单胞菌 ATCC 26853
二,耐药机制及耐药性监测试验
1.耐药菌株,
耐甲氧西林葡萄球菌（ MRS）
耐青霉素肺炎链球菌（ PRSP）
耐万古霉素肠球菌（ VRE）
质粒介导的超广谱 ?-内酰胺酶（ ESBL）
多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单
胞菌和不动杆菌
二,耐药机制及耐药性监测试验
2.耐药机制,
⑴药物渗入细菌减少
⑵产生灭火酶和钝化酶 (?-内酰胺酶 )
⑶ 细菌抗生素结合蛋白发生改变（ PBP）
⑷代谢拮抗剂产生
二,耐药机制及耐药性监测试验
3.耐药性监测的特殊试验
⑴ ?-内酰胺酶检测
方法,头孢哨噻吩滤纸片法 (nitrocefin)
意义, ?-内酰胺酶检测阳性,即对青霉素、
氨卞西林等抗生素耐药
二,耐药机制及耐药性监测试验
⑵ 超广谱 ?-内酰胺酶检测（ ESBL）
定义：是水解青霉素，一代、二代和三代
头孢菌及单酰胺类药物的酶，产生 ESBL
的细菌对上述抗生素耐药。
ESBL主要存在于大肠杆菌和肺炎克雷伯
菌等革兰阴性菌中。
二,耐药机制及耐药性监测试验
⑵ 超广谱 ?-内酰胺酶检测（ ESBL）
方法：纸片扩散法和稀释法
意义,ESBL阳性预示对头孢泊肟、头孢他
啶、头孢噻肟、头孢曲松和氨曲南等抗
菌药物无效。
二,耐药机制及耐药性监测试验
⑶ 琼脂筛选试验（ agar screen test）
是以单一药物单一浓度检测细菌耐药性，
如耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠
球菌检测。
二,耐药机制及耐药性监测试验
⑷ 耐药基因检测
如 MRSA中 mecA基因检测
耐药性统计和分析
WHONET
建立本院、本地区和本国的细菌耐药
性监测数据库和网络
0
20
40
60
80
100
μú ò? ?? ?è μú ?t ?? ?è μú èy ?? ?è μú ?? ?? ?è
?? 2?
?÷2?
±±2?
第三节
医院感染检查 （ Nosocomial
Infection）
医院感染检查
1.定义,病人入院时不存在,也不处于潜伏
期，而在医院内发生的感染，包括医院
内获得而在出院后发病的感染。
医院感染检查
2.医院感染常见病原体（细菌）：革
兰阴性杆菌、革兰阳性球菌
（ MRSA）、厌氧菌和深部真菌等
医院感染检查
3.感染源, 外源或内源性病原体
外源性：其他住院患者、医务人员、探望
者（多为条件致病菌）
内源性：患者自身皮肤、口腔、咽部和胃
肠道固有的正常菌群等（免疫力低下患
者）
医院感染检查
4.常见临床类型
下呼吸道感染
尿路感染
手术切口感染
胃肠道感染
血液感染
皮肤和组织感染
医院感染检查
5.感染途径,
? 接触传播
? 空气、飞沫传播
? 经注射或输液、输血传播
? 经口传播
医院感染检查
6.易感因素,
? 年龄：老年和婴幼儿
? 慢性疾病患者
? 基础疾病或医源性
? 烧伤或创伤产生坏死性组织
? 大量使用抗生素
? 接受侵袭性治疗操作
医院感染检查
7.医院感染常见病原菌监测
? 尿液标本
病原菌 ——大肠埃希菌，变形杆菌，
肺炎克雷伯氏菌，肠球菌，金黄色
葡萄球菌，铜绿色假单胞菌
菌落计数 >104/ml以上 ——尿路感染
医院感染检查
7,医院感染常见病原菌监测
? 痰（咽拭子）培养
病原菌 ——肺炎链球菌，肺炎克雷
伯氏菌，大肠埃希菌，肠球菌，金
黄色葡萄球菌，铜绿色假单胞菌等
半定量 3+~4+为致病菌,1+~2+怀疑
为污染菌
医院感染检查
7,医院感染常见病原菌监测
? 痰（咽拭子）培养
甲型溶血性链球菌是亚急性细菌性心
内膜炎的主要致病菌
医院感染检查
7,医院感染常见病原菌监测
?粪培养
病原菌 ——金黄色葡萄球菌，伤寒
及其他沙门氏菌，志贺氏菌属，致
病性大肠埃希菌，霍乱弧菌，副溶
血性弧菌，弯曲菌，念珠菌等
医院感染检查
7.医院感染常见病原菌监测
?血培养,
病原菌：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄
球菌等
单次血培养不易区分污染菌或感染菌。
两次培养均为同种皮肤正常菌群可认
为感染菌。
医院感染检查
8.医院环境监测和消毒灭菌监测
?空气培养：沉降法采样
?物体表面监测：压印法
?医务人员手部细菌监测
?消毒灭菌效果监测
小 结
复习思考题,
名词解释：微生物直接检测、微生物
非培养检测、医院感染、药敏试验、
耐药性、联合用药
问答题,
1.简述病原学诊断的基本原则
2.医院感染的定义、感染源、感染途径及
易感因素
3.抗生素敏感试验的结果解释以及它们与
临床抗生素剂量的关系
4,各种临床标本中的主要致病菌及临床
意义
5.什么是药敏试验及基本检验方法
? 参考书,
, 现代病原学检验与临床实践,
上海科学技术文献出版社
倪语星 主编
