常用免疫学检测与临床应用 简述免疫应答 天然免疫（natural immunity）：有生理屏障结构、血液及组织液中吞噬细胞和嗜酸粒细胞及自然杀伤细胞（NK）、天然存在的抗微生物分子。特点是天然存在，对外源微生物无特异区分，也不因外源微生物侵入而加强。 获得性免疫或特异性免疫（acquired /specific immunity）：由接触外源性物质而诱生，并特异性针对不同大分子。特点是须有外源物质诱生，能对外源物质进行区分并有记忆，且随再次接触某一大分子物质而增强。特异性免疫由抗原（antigen）、淋巴细胞（lymphocyte）、及抗体（antibody）和淋巴因子（cytokine）组成。免疫应答为特异性免疫所特有。 免疫应答过程 记忆T淋巴细胞 T淋巴细胞 致敏T淋巴细胞 淋巴因子 抗原 吞噬细胞 非特异物质 B淋巴细胞 桨细胞 抗体 记忆B淋巴细胞 抗原（antigen Ag）：能刺激机体产生免疫应答，并能与免疫应答产物特异性结合的物质。异物性、分子大小、分子结构决定物质是否有抗原性及抗原性大小。 抗体（antibody Ab）：机体受抗原刺激后，血清和组织液中出现的一类与该抗原发生特异结合的物质。 免疫学检测常用方法 凝集反应 沉淀反应 溶血实验 4．放射免疫 荧光免疫 酶免疫 发光免疫 流式细胞仪 常用免疫学检查与临床意义 一）蛋白检测 免疫球蛋白（Immunoglobulin IG）：IgG、IgA、IgM、IgE、IgD 补体（complement C）：CH50、C3、C4、BF 丙反应蛋白（C-reactive protein CRP） 二）微生物感染的免疫学检查 肥达氏反应（Widal reaction） 抗链球菌溶血素“O”试验（ASLO） 梅毒血清学检查（rapid plasma RPR） 三）自身抗体检测 类风湿因子检测（RF） 抗DNA抗体检测（ss-DNA） 免疫印迹法抗核抗体检测 四）肝炎病毒免疫学检测 甲肝（HAV-IGM）检测 乙肝（HbsAg HbsAb …） 丙肝抗体检测 戊肝抗体检测 五）肿瘤标志物检测 甲胎蛋白检测（AFP） 癌胚抗原检测（CEA） 六）免疫细胞检测 T淋巴细胞检测 :Erythrocyte-Rosette-formation Test试验. T细胞转化试验 B淋巴细胞检测：EA-RFT 一）蛋白检测 （一）免疫球蛋白检测 免疫球蛋白是一种具有抗体活性的蛋白，由浆细胞分泌，存在于机体的血液、体液、外分泌液及某些细胞膜上。可分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类。免疫 球蛋白二条重链和二条轻链经二硫键结合而成，重链可分为(、(、(、(、(五种，轻链分为(、(二种。 1．常用检测方法：沉淀法、浊度法、放射免疫、酶免疫 2．临床意义 免疫球蛋白降低 （1）先天性Ig减低 有全部Ig缺乏或降低和部分缺乏，最常见为IgA缺乏。分泌型IgA是机体肠道粘膜抵抗感染的重要因素，患者常见呼吸道、肠道反复感染。 （2）继发Ig减低 引起原因很多，最常见于大量蛋白流失，如剥脱性皮炎、肾病综合症。另一主要原因为合成障碍，如淋巴网状系统肿瘤及骨髓病变。 Ig缺乏主要临床症状为反复感染。主要有败血症、化浓性脑膜炎、肺炎、气管炎、中耳炎等。 增高 依Ig增高种类可分为单克隆和多克隆增高，临床以单克隆增高多见。依疾病性质可分良性与恶性增高二类。依发病机理可分原发和继发。 3）其它引起Ig增高疾病 非淋巴网状系统肿瘤 单核细胞白血病 慢性肝胆疾病 自身免疫性疾病 良性Ig增高（主要见于老年人） ? 介绍脑脊液和尿液免疫球蛋白检测 M蛋白：是由单克隆B细胞分化而来的浆细胞异常增生，导致血液或尿液中现的大量结构一致的免疫球蛋白或轻链或重链。临床症状依增殖情况不同而不同。 多发性骨髓瘤（MM multiple myeloma）: 是 B淋巴系恶性肿瘤，肿瘤细胞合成无免疫 活性的单克隆免疫球蛋白或轻链或重链。 临床表现主要为：溶骨性破坏、贫血、反复感染、肾功能损害及高钙血症。 检测方法常用电泳法 IgG IgA(血清) IgM IgD IgE  参考值 7.6-16.6g/L 0.71-3.35g/L 0.48-2.12g/L 0.6-2.0mg/L 0.1-0.9mg/L  占血液Ig的% 70-80 10-15 5-10 0.02-1 0.002  常见增高原因 多发性骨髓瘤。 SLE.RF等自身免疫性疾病。 慢性肝病。 慢性感染。 淋巴瘤。 肺结核。 慢粒。 多发性骨髓瘤。 SLE.RF。 肝硬化。 IgA型肾病。 巨球蛋白血症。 SLE.RF。 肝硬化。 病毒性肝炎早期。 多发性骨髓瘤。 单核细胞白血病。 甲状腺炎。 多发性骨髓瘤。 过敏性疾病。 慢性肝病。  常见降低原因 先天缺陷。 应用免疫抑制剂。 肾病综合症。 蛋白流失。 先天缺陷。 反复呼吸道感染。 非IGA型MM 轻/重链病。 先天缺陷。 应用免疫抑制剂。 IGG型重链病。IGA型MM。淋巴系统肿瘤。 先天缺陷 先天缺陷。 应用免疫抑制剂。 恶性肿瘤。 免疫失调性毛细血管扩张症   （二）补体检测（complement） 补体是主要有巨噬细胞分泌存在于新鲜血液中具有酶样活性的球蛋白，补体不耐热易降解，故补体检测须用新鲜血清。补体有C1、C2。。。C9及AF、BF、DF、PF组成。临床常作总补体活性（CH50）和单一因子C3、C4、BF及C1q检测 1．检测方法 CH50溶血法 单因子检测同免疫球蛋白 2．参考正常值 CH50：50 – 100 u/ml C3: 0.87 – 1.41 g/l C4: 0.44 –0.66 g/l BF: 0.5 –0.75 g/l 3．临床意义 降低 补体消耗引起如自身免疫性疾病的SLE、肾病。 合成障碍引起如严重肝病变 先天性缺乏 增高 急性感染、恶性肿瘤和凤湿病早期，补体增高常与其它血浆蛋白改变相伴随。 （三）丙反应蛋白检测（CRP） CRP是一种急性时相蛋白，由肝脏合成，能激活补体促进细胞吞噬等免疫功能。近年来CRP检测被广泛应用。 检测方法 同免疫球蛋白 参考正常值 CRP：< 10 mg/l 临床意义 CRP增高特点为：急性期增高明显，预后降低迅速，且受其它因素影响很小，非特异性 急性细菌性感染时急剧增高 病毒感染CRP增高不如细菌感染明显恶性肿瘤 恶性肿瘤CRP增高而良性肿瘤一般正常 风湿病活动期较稳定期增高明显， 烧伤、肝炎、心肌梗塞、移植反应可增高 二）微生物感染免疫检测 （一）肥达氏试验 伤寒是由伤寒杆菌引起的急性肠道传染病。伤寒杆菌有二种抗原，即菌体抗原“O”抗原和鞭毛抗原“H”。肥达氏反应就是检测由上述二种抗原刺激机体产生的抗体。 副伤寒分甲（A）、乙（B）、丙（C）三型，它们也有各自的菌体和鞭毛抗原，产生相应抗体。鞭毛抗原产生相应抗体多为IGG型。菌体产生抗体多为IGM型。 菌体 鞭毛 检测方法 凝集试验（混合抗体） 酶免疫（IGM型） 参考正常值 TO : <1:80 TH : <1:160 副伤寒TH：〈1：80 肥达氏反应用于辅助诊断伤寒和付伤寒感染，由于抗体产生需要一定时间，故第一周阳性率10%，第二周达60%-70%，第四周达90%。临床常以二次标本（早期和中期或恢复期）的凝集效价变化来判断是否感染。伤寒病人的“O”抗体较“H”出现早，存在时间短，“H”相反。预防接种可引起“H”增高，“O”正常。 抗链球菌溶血素“O”检测（anti-streptolysin O ASLO） 风湿热是一种变态结缔组织疾病，常见有风湿性心脏病、风湿性关节炎等。风湿热常由A 组溶血性链球菌引起，此菌可产生一种“O”溶血素，ASLO就是检测机体产生的抗溶血素“O”抗体。 检测方法 胶乳凝集试验（定性） 比浊法（定量） 参考正常值 定性：阴性 定量：<200IU/ml 临床意义 链球菌感染后抗“O”的产生一般在一周左右，4-6周达高峰。可见于风湿性心脏病、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎、呼吸道感染等。ASLO动态检测对病程及疗效观察意义较大，结合CRP和ESR、WBC检测临床意义更大。 （三）梅毒血请学 当机体感染梅毒螺旋体后，会产生二种抗体，一种为抗类脂抗体，另一种为抗螺旋体抗原抗体，后者较前者特异性强。由于目前螺旋体体外培养较难，故血清学检测是目前临床常用检查方法。常用方法有快速血浆素反应（RPR）和梅毒螺旋体血凝试验（TPPA），后者特异性高一般用于确定试验，RPR一般作过筛试验。 （四）艾滋病血清血检查 艾滋病又称获得性免疫缺陷综合症（acquired immunodeficiency syndrome ADIS）机体感染艾滋病病毒后血清中产生抗体，实验室一般首先用过筛试验进行检测，发现阳性再作确诊试验。过筛试验常用酶免疫法，要求敏感性高，不能有假阴性，允许少量假阳性。确定试验一般用蛋白印迹法，要求敏感性高、特异性高。遇到可疑标本，一般病人三月后复查。 三）自身免疫病血清学检测检测 人类具有完善的免疫系统，正常情况下，免疫系统具有识别自我与异己的功能，因而能够防御异物入侵，而对自身组织不产生或产生极微弱的免疫应答反应，称自身耐受。一旦机体外部或内部因素发生改变时，可使免疫耐受受到影响，导致免疫系统对自身组织产生明显的免疫应答反应。如是低限度和非持久性，一般影响不大，高限度和持久存在则引起自身免疫性疾病。自身免疫性疾病血清学检测方法很多，特异性较差，动态检测可帮助临床对预后及疗效观察。常用方法及临床意义见表： 名称 临床意义  抗ds-DND抗体 SLE的较特异性抗体  抗ss-DNA抗体 特异性差，见于多种免疫性疾病  抗Smith抗体 SLE特异性抗体  抗Scl-70抗体 系统性硬化症  抗PM-1抗体 多发性皮肌炎及肌炎  抗SS-A和SS-B抗体 干燥综合症、SLE、RA等免疫性疾病  抗组蛋白抗体 药物性狼疮及其它免疫性疾病  抗核糖核蛋白抗体（RNP） 混合结缔组织病、SLE等  类风湿因子（RF） 类风湿性关节炎及其它免疫性疾病   四）肝炎标志物检测 　　　　　　　　乙肝病毒球型颗粒 HBsAg HBcAg HBcAg 肝炎分型 检测项目 临床意义  甲肝HAV HAV-IgG 流行病调查（既往感染）、恢复期、预防接种   HAV-IgM 急性感染期或恢复期  乙肝HBV HbsAg 急性或慢性期、单独不具传染性   HbsAb 恢复后出现，保护性抗体   HbcAb HBV感染标志、保护性抗体   HBc-IgM 乙肝急性期或活动期，传染性强   HbeAg 急性或慢性期，传染性较强   HbeAb 恢复期后多数阳性，传染性低   HBV-DNA 病毒复制、传染性强  丙肝HCV HCVAb 急性或慢性期，具传染性、可终生携带   HCV-RNA 病毒复制、传染性强  丁肝HDV HDVAb 与乙肝重叠感染病情较  戊肝HEV HEV-IgG 恢复期后   HEV-IgM 急性期或恢复期、具传染性   五）肿瘤标志物检测 肿瘤标志物检测目前项目很多，临床应用也相当普遍，但由于灵敏度和特异性所限，一般不可作为确定试验。一般可用于肿瘤辅助诊断、疗效及预后判断和肿瘤普查。 项目 临床意义  甲胎蛋白AFP 肝癌、睾丸肿瘤和卵巢内胚窦瘤，肝炎也可增高  癌胚抗原CEA 结、直肠、乳腺癌肺癌等  CA-125 卵巢癌、子宫癌  CA-199 胰腺癌  CA-50 结、直肠、肝癌、胰腺癌   六）T、B淋巴细胞检测 免疫细胞指一群参与免疫应答的细胞。第一类指在免疫应答过程中起核心作用的淋巴样细胞，如T、B淋巴细胞。第二类为抗原提呈促进淋巴细胞作用的单核-巨噬细胞系统。第三类为以其它方式参与免疫应答的有关细胞。 族分化抗原（Cluster of differentiation）: 细胞在发育分化过程中，表面抗原发生变化，CD抗原即指细胞变化过程中产生的抗原。目前临床CD4（TH）与CD8（TS）检测应用广泛。 T细胞检测（Thymus dependent lymphcyte 胸腺依赖临巴细胞） 1）E玫瑰花试验（Erythrocyte rosette formation test） E玫瑰花试验只反映TC的数量，而不能体现其功能，又由于检测要求高，目前临床很少应用。 T淋巴细胞转化试验 抗原或非抗原刺激 （PHA TC 、脂多糖BC） 转化率 = 细胞生物学功能的体外试验，应用于免疫缺陷、增强、移植等。实验要求相当高，一般实验室很少作检测。 B淋巴细胞检测 EA玫瑰花试验 复习思考题 填充题 人体血清中免疫球蛋白含量最高的为（ ）免疫球蛋白。 过敏性疾病常发现（ ）免疫球蛋白增高。 M蛋白是由（ ）细胞分化而来的浆细胞异常增生，导致血液或尿液中现的大量结构一致的免疫球蛋白或轻链或重链。 白细胞分化抗原CD4代表（ ）淋巴细胞。 丙型肝炎病毒（HCV）是一种（ ）核酸类型的病毒，乙型肝炎病毒（HBV）是一种（ ）核酸类型的病毒。 伤寒杆菌检测“肥达氏反应”参考值为TO〈 （ ），TH〈 （ ）。 肾小球肾炎、自身免疫性疾病等通常会引起总补体检测（CH50）活性（ ）。 原发性肝细胞性患者血清AFP检测呈增高，临床诊断阈值为超过（ ）ug/L。 免疫球蛋白A（IGA），分为血清型与（ ）。 10 临床检测梅毒感染有非特异定性试验和特异性试验如（ ）试验。 二、多选题 巨球蛋白血症时下列何种免疫球蛋白增高明显 ①IgG ②IgA ③IgD ④IgM 2、参与补体经典激活途径和旁路激活途径的补体成分为下列那一种？ ①C2 ②C3 ③C4 ④BF 3、红细胞-抗体-玫瑰花结形成试验（EA-RFC）用于下列何种细胞活性检测？ ①NK细胞 ②T淋巴细胞 ③B淋巴细胞 ④巨噬细胞 5、乙型肝炎抗体中，下列何种抗体被认为是具有保护作用的抗体？ ①HBC-Ab ②HBC-IgM ③HBE-Ab ④HBS-Ab 6、风湿热、风湿性关节炎常作下列那项免疫学检测？ ①抗链球菌溶血素“O”检测（ASO） ②类风湿因子（RF）检测 ③肥达氏反应 ④病毒抗体检测 7、下列那种检测常作为细菌性与非细菌性感染，器官性与功能性疾病鉴别试验？ ①抗链球菌溶血素“O”检测（ASO） ②C-反应蛋白（CRP） ③快速血浆反应素试验（RPR） ④肥达氏试验 8、乙型肝炎患者作肝炎标志物检测，出现下列那项阳性时最具传染性？ ①乙肝表面抗原（HBSAG） ②乙肝核心抗体（HBC-Ab） ③乙肝病毒核酸（HBV-DNA） ④乙肝E抗体（HBE-Ab） 9、白细胞分化抗原（CD）目前临床用那种较为先进方法检测？ 荧光标记法 ②比浊法 ③酶标记法 ④流式细胞仪技术 抗原刺激机体产生抗体，下列那一类型抗体最早可检测到？ ①IgA ②IgE ③IgD ④IgM 三、问答题 ①丙反应蛋白（CRP）检测临床意义。 ②抗核抗体主要检测项目与主要临床意义。 参考书: 1)《当代免疫学技术与应用》 巴德年 主编 北京医科大学中国协和医科大学联合出版社 2)《实用免疫学》 杨廷彬 尹学念 主编 长春出版社