3 2 1
常见风湿病实验检查
风湿病病因学检查,
RA HLA-DRB10405
0409风险高达 58.2%,
SLE HLA-DQB1(nRNP),
DQa(SSA/SSB),
DQW6(Sm)
DQB1(TCR),
AS HLA-B27,
3 2 2
BS HLA-B51,
PM\DM HLA-B8,DR3,DR1,HLA-DRB1, ancestral
haplotype祖单倍体 8.1。 TNF-?-308A
SSC HLA-DR1,DR5,DRQI； P1A2/FN等位 基因与
肺纤维化,Scl-70的阳性呈正相关。
SS HLA-DR3,DRBI0602,03（与肾小管酸中毒
及 SSB密切相关,DQAI0504,DQBI0202。
RF HLA-DR4,
OA HLA-A1,B8,
3 2 3
HLA研究进展
? HLA抗原基因的多态性，决定了其所表达
的 HLA抗原分子的多态性,也决定了 HLA系统
免疫应答的多样性与复杂性。近年来 HLA 基因
分型迅猛发展，使得 HLA 基因分型更加准确，
简便和实用。 HLA 基因分型目前大致分为,
限制性片段长度多态性方法 PCR- RFLP
(restriction fragment length
polymophism)。 PCR- SSOP 是以核酸杂交
为基础的分型技术。 PCR扩增特定的基因片段，
与 (sequence specific oligonucleotide
probes)序列特异性寡核苷酸探针杂交，进行
分析鉴定。
? 基因芯片或微阵列技术 (gene chip or
DNA microarray),
3 2 4
? 该技术其原理类似于反向斑点杂交。它是
指大规模集成电路控制的机器人在尼龙膜或硅
片等固相支持物的表面有规律地合成代表不同
基因的寡核苷酸探针，或液相合成探针后，通
过点样仪点样于固相支持物的表面。这些探针
与放射性标记物或荧光素标记的样品的 DNA或
cDNA互补核酸序列相结合，通过放射自显影
或荧光检测，对杂交结果进行计算机软件处理
分析，获得杂交信号的强度及分布模式图，反
映样品中基因表达的情况。
? PCR-SSCP(single-strand
conformation polymorphism)可检测 DNA
片段中不同位置的点突变，而不必象 PCR-
RFLP 那样，必须选择合适的限制酶，使其识
别的位点正好位于等位基因的特异性核苷酸序
列处。
3 2 5
? PCR- SSP(SEQUENCE SPECIFIC
PRIMES)是近年唯一针对急诊和尸体器官移植
而设计的。其原理是通过序列特异性引物 SSP,
特异的扩增目的 DNA 片段，再通过凝胶电泳
等手段，判断被扩增序列的存在。
? 作为第 3代遗传标记 SNP单核苷酸多态位点
? (single nucleotide polymorphism)。已
有 MHC-SNP分型试剂盒面市。
? 分子的超型及抗原结合肽超基序的发现，表明
可从功能上对类分子进行分类使得该技术更为
合理，简明和实用，对于疾病相关性的研究和
异体移植有重大意义。
3 2 6
AS的相关遗传因素
? 1,HLA是一必需的致病基因，但其遗传风险为
16~50%。其亚型有 23个之多，从
B2701~2723。与 AS相关的是
2705﹑ 2704﹑ 2701等等。
? 2,CYP2D6﹑ LMP7和 TNF308等 TNF-?的等位
基因； bosak报道 HLA-2﹑ Bw4﹑ Cw1/2﹑ DR1
基因频率均高于健康人群。这提示 HLA-
A﹑ B﹑ C﹑ DR和 DQ区域有与 AS发病的易感基因
存在； HLA-B60增加了 AS依赖 HLA-B27发病的
易感性。
3 2 7
? 链球菌感染的检测
? 1 咽拭子培养
20~25%
? SZ(链球菌酶 )检
? 2ASO>500
50%
? 3DNA酶 -B>210 85%
? 4ASK(抗链球菌激酶 )>8
? 5AH(抗透明质酸酶 )>128
? 6ANDS(抗核苷酸 )<275
? 抗 EBV抗体 RA
? PHS-2(福氏志贺菌 ) Reiter's
? 肺炎克雷伯菌 AS
沙门菌,螺杆菌 ReA
3 2 8
炎性实验室指标
主要针对疾病活动性
ESR,
CRP:2周内 >80%,大于 4周
<25%
OTHER:1.白细胞及中性粒
细胞, 2.糖蛋白及粘蛋白等,
3 2 9
CRP
IL-1
IL-6
TNFa
?TG
PF4 白细胞 粘着游走
CRP
凝血纤溶
系统亢进
ICAM-1
VCAM-1
E-SELECTIN
血小板
凝集亢进
血小板
释放反应
感染
外伤
免疫异常
恶性增生物
3 2 10
CRP与炎症
? CRP是重要的炎性因子,其致炎作用包括,激活补
体、刺激细胞因子分泌、上调内皮细胞黏附分子
表达、抑制一氧化氮合成、增加纤溶酶原激活物
抑制剂 -1的水平与活性、增强巨噬细胞对低密度
脂蛋白的摄取及单核细胞化学趋化性、上调血管
紧张素 Ⅱ -1型受体的表达等,
? CRP与肥胖关系密切,而且脂肪细胞也可分泌 CRP,
? CRP水平随年龄的增高而升高,女性较高,吸烟、
感染和某些药物可使其增高 ;而饮酒和某些药物可
使其降低,
3 2 11
生化检查
? 1.Ca,P,Fe等电解质,
? 2.UA,磷酸钙双水化合物 CPP等,
? 3.肝,肾,血常规等功能检查,
? 4.CPK,LDH同功酶，肌球蛋白，肌凝蛋白重链，
肌钙蛋白 I（ TnI），等肌酶谱检查,
? 5.蛋白及蛋白电泳检查,
? 6.雌激素,泌乳素等激素检查,
? 7.维生素,骨钙素,TRAP,Pyd,Dpyd等,
3 2 12
雌激素和催乳素 PRL
? 大家都知道神经 -内分泌 -免疫调节网络
功能失调，会影响的发生和发展。
? PRL（ prolatin）已被证明具有免疫调节
作用，对细胞和体液免疫都有促进作用，而且
免疫细胞也能产生 PRL样物质，发挥自分泌和
旁分泌作用。大量研究表明在 SLE中 PRL与可
的松 CS比值增高反与病情进展相关。男性患
者 PRL水平升高而雄激素功能低下，认为 PRL
可抑制睾酮的生成，在病因中起作用。但也有
人认为不是通过其抑制雄激素而起作用。另外
用 bromocriptine BRC溴隐停使 PRL降低可
使 SLE病情改善。在 RA已证明 PRL是 AA
（ adjuvant arthritis）形成的必要条件。国
外报道在 RA中 PRL水平上升发生率为 10.8%。
3 2 13
? SS,PA,Reiter等风湿病都有 PRL水平升高。
目前认为 1.可能与可诱导核细胞产生 IgM，
IgA,IgG,ds-DNA和 ANA及 IgM类 RF，
ANA滴度增加并且 PRL水平与 ANA相平行。
IgG类 ds-DNA与抗甲状腺微粒体抗体 TMA合
成增加，同时伴 ESR增快，淋巴细胞减少。
2.PRL基因在第 6号染色体短臂上，与 HLA基
因复合体非常近。生殖危险因子与 RA病因相
互作用可能是其原因。 SLE女性患者 HLA-
DRB10301和 PRL基因之间的连锁不平衡也是
原因之一。 3.降低甾类物产生的允许作用。
PRL水平升高在甾类激素分泌减少的情况下起
重要作用。一方面糖皮质激素能拮抗 PRL的刺
激作用，而性激素对免疫的调节作用随性别而
异。另一方面 PRL可影响甾类激素的产生，也
可拮抗糖皮质激素的抑制作用。
3 2 14
?4.PRL与细胞因子 PRL和 IL-2在免疫方面
起协同作用，从而促进 AID的发生。同时
PRL也可促进滑膜纤维母细胞的增殖，并促
进 IL-6,IL-8的生成。
?而雌激素和雌激素受体在免疫调节和对许
多风湿病发病机制，自身抗体的产生，及
对其病理进程的影响巨大。早已为众人所
熟悉。
3 2 15
滑液正常值
? PH 7.3-7.43 7.38
? WBC(/L) (13~180) 63
? N 0-15 7
? L 0-78 24
? 单核细胞 0-71 48
? 滑膜细胞 0-12 4
? 蛋白质 (g/L) 12-30 18
? P(%) 56-63 60
? A(%) 37-44 40
? 透明质酸盐 (g/L) 3
3 2 16
滑液分析
? 外观 WBC PC 粘蛋白 滑液与血清 微生物
? 试验 Glu差异 (ml/ml) 晶体等
? 正常 清晰，灰黄 0~200 <10% 良好 无差异 _
? I类
? (非炎性积液 )清晰，稍浊 50~4000 <30% 良好 无差异 _
? II类 (非感染 偶有 LE细胞
? 轻度炎性 ) 清晰，稍浊 0~9000 <20% 良好 无差异 补体减少
? III类 (非感染
? 重度炎性 ) 混浊 100~160,000 70% 不 良 10 ~30 补体减少晶体等
? IV类 (感染 炎性 )
? 感染 高度混浊 150~250,000 90% 不 良 90 细菌培养阳性
? 结核 混浊 2500~100,000 60% 不良 70 结核培养阳性
3 2 17
滑液表现
? I II III IV
? OA RA 细菌性 创伤
? 肢端肥大症 AS 结核性 骨折
? 骨坏死 PA 淋球菌 血友病
? Paget病 SS 神经病性患节炎
? SLE PM/DM
? NPA BD
? SSC WG
? Wilson RF
? 淀粉样变 REA
? 结节性红斑 IBD
? 软骨病 白血病
? 激素治疗 一部分细菌性
3 2 18
分子生物技术
? 1.目的 DNA的来源
? 从组织或细胞中提取,
? 通过载体获得 DNA片段,
? 以为 mRNA模板利用逆转录酶合成互补
DNA(cDNA),
? DNA合成,通过 ligation,PCR,probe来完
成,
? 2.重组 DNA技术,分子构建,细胞转移,宿主细
胞鉴定,
? 3.核酸测定和应用
? DNA/RNA印迹,PCR,原位 /斑点杂交,
? DNA序列测定,
3 2 19
ANAs
?ANA是指抗细胞内 DNA,RNA,AHA,no-
AHA,phospholipid…… 蛋白质分子及其复
合物成分的抗体,Miescher于 1957年发现。
?1957年 Ceppelini发现
DNA,ssDNA,dsDNA,
?AHA:H1,H2A,H2B,H3,H4,
?ENA:Sm,Nrnp,rRNP,SSA/SSB,ScL-
70,Jo-1,PM-
1,PCNA,RA33,centromere…,,
3 2 20
DNA研究
? DNA大分子可以存在于循环中或黏附于多
种器官的微血管结构，这些循环或器官原位抗
原型 DNA均可以与循环抗 dsDNA自体抗体发
生反应，形成抗原抗体免疫复合物，激活炎症
系统，如补体途径。在器官引起 免疫复合物介
导的疾病，引起关节炎，血管炎，肾炎等临床
表现。 dsDNA抗体水平于疾病活动性，特别与
LN有密切关系。也可作为临床复发的指标。
? SLE中的抗 DNA抗体是异基因的。血清的
抗体和单克隆抗 DNA抗体可识别不同分子的核
酸表位，如磷脂，蛋白，多糖和细胞结构。这
说明 DNA本身不可能做为免疫原来诱导 DNA
抗体产生。同时这种抗体的多反应性可能与个
体 Ig的不同区域的多结合位点或不同抗原的相
同表位有关。
3 2 21
? 抗 DNA抗体的产生与 NO有关，活性氧可在细胞
分裂中期导致淋巴细胞染色体损害和断裂，使淋
巴细胞功能失常或凋亡，释放大量核抗原产生自
身抗体。 NO在 SLE中参与产生自身抗体,NO抑
制粒细胞活性，诱导其凋亡，抑制吞噬细胞释放
促炎介质，抑制 T细胞增殖和 IL-2释放，阻止 T辅
助细胞分化 Th1细胞，导致细胞免疫功能低下，
大量自身抗体产生。在凋亡期间完整的核抗原的
大量释放可以提供细胞外足够的核抗原来促进免
疫反应，诱导抗体的产生。
3 2 22
DNA免疫
? 哺乳动物具有免疫学特性温和，结构简单的特
点，单纯的 DNA分子不能有效诱导免疫反应，
抗哺乳动物的 DNA抗体产生与抗原的交叉反应
或多克隆 B细胞的活化有关。而细菌 DNA由于
免疫原性强，结构复杂，能有效地诱导机体对
宿主自体细胞以外的 DNA序列区域直接产生免
疫应答。 SLE病人抗 DNA抗体主要是 Ig1和
Ig3而且需要 T细胞参与，且与所有 DNA的保
守序列结合。这与健康人的抗 DNA抗体（ Ig2）
不同,
? 通过基因重组技术，将编码有特定蛋白抗原的
裸露的质粒 DNA注入体内，表达出抗原蛋白，
诱导其抗体的表达及 T细胞依赖的细胞裂解等
一系列特异性免疫应答。 DNA免疫不仅可以诱
导体液免疫还可诱生特异性的以 CTL为代表的
细胞免疫应答。
3 2 23
OTHER ANTIBODY
? RA,
? Sa99%,AKA（抗角质蛋白抗体） 95%-100%,APF（抗核周
因子） 40%-50%,AFA（抗聚角蛋白微丝蛋白抗体）为的共同抗原决
定族。
? RF(IgG,IgM,IgA)80%,RA3389.8%,CCP（抗环瓜氨酸肽抗
体） 46.6%（ 96.6%），其中 IgG型为 53%,IgM型为 58%。 A-
p68A（为糖蛋白成分 GRP，也称免疫球蛋白结合蛋白 Bip binding
protein；实际上是一种内质网分子伴侣。） 67.8%;91.3。常见于 RF
阴性患者并出现于 RA早期。
? SLE,
? ds-DNA40-90%,AHA3080%,Sm35%,Nrnp20-35%,
SSA25-40%,
? SSB10-15%,hsp40-50%,APL20-50%.anti-neuronal
antibodies,anti-N（
? 血清中 62.0%。脑脊液中 47.4%）
3 2 24
? 抗细胞膜 DNA自身抗体（ autoantibidies to
membrane associated DNA，抗 mDNA。）
90.0%（ 98.8%）； AuA（以 Ds-DNA和 AHA
为靶抗原）；抗端粒抗体（抗原为真核细胞末端
DNA中高度重复的 TTAGGG/CCCTAA序列）
60%（ 91%）。 C1qAb（ 42,86%；有肾损害
为 8 8,33%）。 CRPAb与 SLE的 SLEDAI﹑ 总
IgG/dsDNA滴度呈正相关 。
? PM/DM,Jo-1 18-20%,pl-7<3,SRP4%,
Mi-28%,
? 56000 85-90%,
?
3 2 25
?SSc,
?Scl-70 5707%,ACA19.4%.,抗
RNA聚合酶 RNAPs I II III,AECA
（抗内皮细胞抗体） IgG型为 40%，抗
原纤维抗体是重症的一个指标，抗丙酮
酸脱氢酶的 Ela亚单位的抗体是发生胆汁
性肝硬化的血清指标。 PM-Scl。
?SS,
? SSA45-68%,SSB20-33.6%,
抗甲状腺细胞抗体 50%,抗唾腺管细
胞抗体 10-70%,抗胰管细胞抗体 6-
33%,抗胃黏膜细胞抗体 5-15%,抗
线粒体抗体 20%,
3 2 26
?MCTD,
? ANA100%,nRNP100%,
?RF,
? PCA87%,IgM/IgG抗多糖抗体
87%,
? ANCA
?ANCA(anti neutrophil cytoplasmic
antibodies) 是 1982年由 Davies等人
发现的。是针对中性粒细胞主要颗粒成
分及单核细胞溶酶体的其主要抗原成分
有蛋白酶 3（ PR3），髓过氧化物酶
（ MPO）组蛋白酶 (CG)，乳铁蛋白 (LF)，
杀菌 /通透性增加蛋白 (BIP)，人白细胞
弹力蛋白酶 (HLE)，溶酶体膜糖蛋白等。
3 2 27
?其检查方法用间接免疫荧光 (IIF)和
抗原特异性酶联免疫吸附 (ELISA)。
分为 C-ANC（ Atypical）即弥漫的
胞浆荧光无中心小叶间增强现象,
C-ANCA典型的颗粒状胞浆荧光伴
中心小叶间增强现象,P-ANCA核周
荧光伴和不伴核延伸，包括粒细胞
特异性抗核抗体 (GSANA)；
AtypicalANCA其他形式的免疫荧光
模式。
?ANA,ACA等抗体常常产生 P-
ANCA样的免疫荧光模式。
3 2 28
? ANCA的致病机制,
? 1.直接激活中性粒细胞
? 2.激活单核细胞
? 3.直接损伤内皮细胞
? 4.激活 T淋巴细胞
? 5.a-AT（ a-胰蛋白酶）是 PR3蛋白酶的抑制剂，
AT基因在小血管炎中成多态性。
? Vasculitides,ANCA
? Churg-Strauss 64-75%
? Microscopic polyangiitis 75%
? WG 90-97%
? GCA (APL) >30%
? Takayasu artertis (抗主动脉抗体 )>1:32
? BD APL ANCA+
3 2 29
血管炎的抗体
?1 ANCA,
?2 AECA（ anti-endothelial cell
antibodies,AECA）,
? BD 40%;
TA37%;MPA36%;PA44%;C-
S33%;GCA50%;OTHER62%,
?3 anti-PR3(蛋白酶 3,)
? anti-MPO(髓过氧化物酶）
3 2 30
?其他：内皮素 ET-1，致炎因子 IL-
1?/β/TNF等；趋化 因子 MIP- 1?,MCP-
1,RANTES等。新喋呤。 sTNF-55，软骨
低聚质蛋白（ COMP）。黏附分子等等。
常见风湿病实验检查
风湿病病因学检查,
RA HLA-DRB10405
0409风险高达 58.2%,
SLE HLA-DQB1(nRNP),
DQa(SSA/SSB),
DQW6(Sm)
DQB1(TCR),
AS HLA-B27,
3 2 2
BS HLA-B51,
PM\DM HLA-B8,DR3,DR1,HLA-DRB1, ancestral
haplotype祖单倍体 8.1。 TNF-?-308A
SSC HLA-DR1,DR5,DRQI； P1A2/FN等位 基因与
肺纤维化,Scl-70的阳性呈正相关。
SS HLA-DR3,DRBI0602,03（与肾小管酸中毒
及 SSB密切相关,DQAI0504,DQBI0202。
RF HLA-DR4,
OA HLA-A1,B8,
3 2 3
HLA研究进展
? HLA抗原基因的多态性，决定了其所表达
的 HLA抗原分子的多态性,也决定了 HLA系统
免疫应答的多样性与复杂性。近年来 HLA 基因
分型迅猛发展，使得 HLA 基因分型更加准确，
简便和实用。 HLA 基因分型目前大致分为,
限制性片段长度多态性方法 PCR- RFLP
(restriction fragment length
polymophism)。 PCR- SSOP 是以核酸杂交
为基础的分型技术。 PCR扩增特定的基因片段，
与 (sequence specific oligonucleotide
probes)序列特异性寡核苷酸探针杂交，进行
分析鉴定。
? 基因芯片或微阵列技术 (gene chip or
DNA microarray),
3 2 4
? 该技术其原理类似于反向斑点杂交。它是
指大规模集成电路控制的机器人在尼龙膜或硅
片等固相支持物的表面有规律地合成代表不同
基因的寡核苷酸探针，或液相合成探针后，通
过点样仪点样于固相支持物的表面。这些探针
与放射性标记物或荧光素标记的样品的 DNA或
cDNA互补核酸序列相结合，通过放射自显影
或荧光检测，对杂交结果进行计算机软件处理
分析，获得杂交信号的强度及分布模式图，反
映样品中基因表达的情况。
? PCR-SSCP(single-strand
conformation polymorphism)可检测 DNA
片段中不同位置的点突变，而不必象 PCR-
RFLP 那样，必须选择合适的限制酶，使其识
别的位点正好位于等位基因的特异性核苷酸序
列处。
3 2 5
? PCR- SSP(SEQUENCE SPECIFIC
PRIMES)是近年唯一针对急诊和尸体器官移植
而设计的。其原理是通过序列特异性引物 SSP,
特异的扩增目的 DNA 片段，再通过凝胶电泳
等手段，判断被扩增序列的存在。
? 作为第 3代遗传标记 SNP单核苷酸多态位点
? (single nucleotide polymorphism)。已
有 MHC-SNP分型试剂盒面市。
? 分子的超型及抗原结合肽超基序的发现，表明
可从功能上对类分子进行分类使得该技术更为
合理，简明和实用，对于疾病相关性的研究和
异体移植有重大意义。
3 2 6
AS的相关遗传因素
? 1,HLA是一必需的致病基因，但其遗传风险为
16~50%。其亚型有 23个之多，从
B2701~2723。与 AS相关的是
2705﹑ 2704﹑ 2701等等。
? 2,CYP2D6﹑ LMP7和 TNF308等 TNF-?的等位
基因； bosak报道 HLA-2﹑ Bw4﹑ Cw1/2﹑ DR1
基因频率均高于健康人群。这提示 HLA-
A﹑ B﹑ C﹑ DR和 DQ区域有与 AS发病的易感基因
存在； HLA-B60增加了 AS依赖 HLA-B27发病的
易感性。
3 2 7
? 链球菌感染的检测
? 1 咽拭子培养
20~25%
? SZ(链球菌酶 )检
? 2ASO>500
50%
? 3DNA酶 -B>210 85%
? 4ASK(抗链球菌激酶 )>8
? 5AH(抗透明质酸酶 )>128
? 6ANDS(抗核苷酸 )<275
? 抗 EBV抗体 RA
? PHS-2(福氏志贺菌 ) Reiter's
? 肺炎克雷伯菌 AS
沙门菌,螺杆菌 ReA
3 2 8
炎性实验室指标
主要针对疾病活动性
ESR,
CRP:2周内 >80%,大于 4周
<25%
OTHER:1.白细胞及中性粒
细胞, 2.糖蛋白及粘蛋白等,
3 2 9
CRP
IL-1
IL-6
TNFa
?TG
PF4 白细胞 粘着游走
CRP
凝血纤溶
系统亢进
ICAM-1
VCAM-1
E-SELECTIN
血小板
凝集亢进
血小板
释放反应
感染
外伤
免疫异常
恶性增生物
3 2 10
CRP与炎症
? CRP是重要的炎性因子,其致炎作用包括,激活补
体、刺激细胞因子分泌、上调内皮细胞黏附分子
表达、抑制一氧化氮合成、增加纤溶酶原激活物
抑制剂 -1的水平与活性、增强巨噬细胞对低密度
脂蛋白的摄取及单核细胞化学趋化性、上调血管
紧张素 Ⅱ -1型受体的表达等,
? CRP与肥胖关系密切,而且脂肪细胞也可分泌 CRP,
? CRP水平随年龄的增高而升高,女性较高,吸烟、
感染和某些药物可使其增高 ;而饮酒和某些药物可
使其降低,
3 2 11
生化检查
? 1.Ca,P,Fe等电解质,
? 2.UA,磷酸钙双水化合物 CPP等,
? 3.肝,肾,血常规等功能检查,
? 4.CPK,LDH同功酶，肌球蛋白，肌凝蛋白重链，
肌钙蛋白 I（ TnI），等肌酶谱检查,
? 5.蛋白及蛋白电泳检查,
? 6.雌激素,泌乳素等激素检查,
? 7.维生素,骨钙素,TRAP,Pyd,Dpyd等,
3 2 12
雌激素和催乳素 PRL
? 大家都知道神经 -内分泌 -免疫调节网络
功能失调，会影响的发生和发展。
? PRL（ prolatin）已被证明具有免疫调节
作用，对细胞和体液免疫都有促进作用，而且
免疫细胞也能产生 PRL样物质，发挥自分泌和
旁分泌作用。大量研究表明在 SLE中 PRL与可
的松 CS比值增高反与病情进展相关。男性患
者 PRL水平升高而雄激素功能低下，认为 PRL
可抑制睾酮的生成，在病因中起作用。但也有
人认为不是通过其抑制雄激素而起作用。另外
用 bromocriptine BRC溴隐停使 PRL降低可
使 SLE病情改善。在 RA已证明 PRL是 AA
（ adjuvant arthritis）形成的必要条件。国
外报道在 RA中 PRL水平上升发生率为 10.8%。
3 2 13
? SS,PA,Reiter等风湿病都有 PRL水平升高。
目前认为 1.可能与可诱导核细胞产生 IgM，
IgA,IgG,ds-DNA和 ANA及 IgM类 RF，
ANA滴度增加并且 PRL水平与 ANA相平行。
IgG类 ds-DNA与抗甲状腺微粒体抗体 TMA合
成增加，同时伴 ESR增快，淋巴细胞减少。
2.PRL基因在第 6号染色体短臂上，与 HLA基
因复合体非常近。生殖危险因子与 RA病因相
互作用可能是其原因。 SLE女性患者 HLA-
DRB10301和 PRL基因之间的连锁不平衡也是
原因之一。 3.降低甾类物产生的允许作用。
PRL水平升高在甾类激素分泌减少的情况下起
重要作用。一方面糖皮质激素能拮抗 PRL的刺
激作用，而性激素对免疫的调节作用随性别而
异。另一方面 PRL可影响甾类激素的产生，也
可拮抗糖皮质激素的抑制作用。
3 2 14
?4.PRL与细胞因子 PRL和 IL-2在免疫方面
起协同作用，从而促进 AID的发生。同时
PRL也可促进滑膜纤维母细胞的增殖，并促
进 IL-6,IL-8的生成。
?而雌激素和雌激素受体在免疫调节和对许
多风湿病发病机制，自身抗体的产生，及
对其病理进程的影响巨大。早已为众人所
熟悉。
3 2 15
滑液正常值
? PH 7.3-7.43 7.38
? WBC(/L) (13~180) 63
? N 0-15 7
? L 0-78 24
? 单核细胞 0-71 48
? 滑膜细胞 0-12 4
? 蛋白质 (g/L) 12-30 18
? P(%) 56-63 60
? A(%) 37-44 40
? 透明质酸盐 (g/L) 3
3 2 16
滑液分析
? 外观 WBC PC 粘蛋白 滑液与血清 微生物
? 试验 Glu差异 (ml/ml) 晶体等
? 正常 清晰，灰黄 0~200 <10% 良好 无差异 _
? I类
? (非炎性积液 )清晰，稍浊 50~4000 <30% 良好 无差异 _
? II类 (非感染 偶有 LE细胞
? 轻度炎性 ) 清晰，稍浊 0~9000 <20% 良好 无差异 补体减少
? III类 (非感染
? 重度炎性 ) 混浊 100~160,000 70% 不 良 10 ~30 补体减少晶体等
? IV类 (感染 炎性 )
? 感染 高度混浊 150~250,000 90% 不 良 90 细菌培养阳性
? 结核 混浊 2500~100,000 60% 不良 70 结核培养阳性
3 2 17
滑液表现
? I II III IV
? OA RA 细菌性 创伤
? 肢端肥大症 AS 结核性 骨折
? 骨坏死 PA 淋球菌 血友病
? Paget病 SS 神经病性患节炎
? SLE PM/DM
? NPA BD
? SSC WG
? Wilson RF
? 淀粉样变 REA
? 结节性红斑 IBD
? 软骨病 白血病
? 激素治疗 一部分细菌性
3 2 18
分子生物技术
? 1.目的 DNA的来源
? 从组织或细胞中提取,
? 通过载体获得 DNA片段,
? 以为 mRNA模板利用逆转录酶合成互补
DNA(cDNA),
? DNA合成,通过 ligation,PCR,probe来完
成,
? 2.重组 DNA技术,分子构建,细胞转移,宿主细
胞鉴定,
? 3.核酸测定和应用
? DNA/RNA印迹,PCR,原位 /斑点杂交,
? DNA序列测定,
3 2 19
ANAs
?ANA是指抗细胞内 DNA,RNA,AHA,no-
AHA,phospholipid…… 蛋白质分子及其复
合物成分的抗体,Miescher于 1957年发现。
?1957年 Ceppelini发现
DNA,ssDNA,dsDNA,
?AHA:H1,H2A,H2B,H3,H4,
?ENA:Sm,Nrnp,rRNP,SSA/SSB,ScL-
70,Jo-1,PM-
1,PCNA,RA33,centromere…,,
3 2 20
DNA研究
? DNA大分子可以存在于循环中或黏附于多
种器官的微血管结构，这些循环或器官原位抗
原型 DNA均可以与循环抗 dsDNA自体抗体发
生反应，形成抗原抗体免疫复合物，激活炎症
系统，如补体途径。在器官引起 免疫复合物介
导的疾病，引起关节炎，血管炎，肾炎等临床
表现。 dsDNA抗体水平于疾病活动性，特别与
LN有密切关系。也可作为临床复发的指标。
? SLE中的抗 DNA抗体是异基因的。血清的
抗体和单克隆抗 DNA抗体可识别不同分子的核
酸表位，如磷脂，蛋白，多糖和细胞结构。这
说明 DNA本身不可能做为免疫原来诱导 DNA
抗体产生。同时这种抗体的多反应性可能与个
体 Ig的不同区域的多结合位点或不同抗原的相
同表位有关。
3 2 21
? 抗 DNA抗体的产生与 NO有关，活性氧可在细胞
分裂中期导致淋巴细胞染色体损害和断裂，使淋
巴细胞功能失常或凋亡，释放大量核抗原产生自
身抗体。 NO在 SLE中参与产生自身抗体,NO抑
制粒细胞活性，诱导其凋亡，抑制吞噬细胞释放
促炎介质，抑制 T细胞增殖和 IL-2释放，阻止 T辅
助细胞分化 Th1细胞，导致细胞免疫功能低下，
大量自身抗体产生。在凋亡期间完整的核抗原的
大量释放可以提供细胞外足够的核抗原来促进免
疫反应，诱导抗体的产生。
3 2 22
DNA免疫
? 哺乳动物具有免疫学特性温和，结构简单的特
点，单纯的 DNA分子不能有效诱导免疫反应，
抗哺乳动物的 DNA抗体产生与抗原的交叉反应
或多克隆 B细胞的活化有关。而细菌 DNA由于
免疫原性强，结构复杂，能有效地诱导机体对
宿主自体细胞以外的 DNA序列区域直接产生免
疫应答。 SLE病人抗 DNA抗体主要是 Ig1和
Ig3而且需要 T细胞参与，且与所有 DNA的保
守序列结合。这与健康人的抗 DNA抗体（ Ig2）
不同,
? 通过基因重组技术，将编码有特定蛋白抗原的
裸露的质粒 DNA注入体内，表达出抗原蛋白，
诱导其抗体的表达及 T细胞依赖的细胞裂解等
一系列特异性免疫应答。 DNA免疫不仅可以诱
导体液免疫还可诱生特异性的以 CTL为代表的
细胞免疫应答。
3 2 23
OTHER ANTIBODY
? RA,
? Sa99%,AKA（抗角质蛋白抗体） 95%-100%,APF（抗核周
因子） 40%-50%,AFA（抗聚角蛋白微丝蛋白抗体）为的共同抗原决
定族。
? RF(IgG,IgM,IgA)80%,RA3389.8%,CCP（抗环瓜氨酸肽抗
体） 46.6%（ 96.6%），其中 IgG型为 53%,IgM型为 58%。 A-
p68A（为糖蛋白成分 GRP，也称免疫球蛋白结合蛋白 Bip binding
protein；实际上是一种内质网分子伴侣。） 67.8%;91.3。常见于 RF
阴性患者并出现于 RA早期。
? SLE,
? ds-DNA40-90%,AHA3080%,Sm35%,Nrnp20-35%,
SSA25-40%,
? SSB10-15%,hsp40-50%,APL20-50%.anti-neuronal
antibodies,anti-N（
? 血清中 62.0%。脑脊液中 47.4%）
3 2 24
? 抗细胞膜 DNA自身抗体（ autoantibidies to
membrane associated DNA，抗 mDNA。）
90.0%（ 98.8%）； AuA（以 Ds-DNA和 AHA
为靶抗原）；抗端粒抗体（抗原为真核细胞末端
DNA中高度重复的 TTAGGG/CCCTAA序列）
60%（ 91%）。 C1qAb（ 42,86%；有肾损害
为 8 8,33%）。 CRPAb与 SLE的 SLEDAI﹑ 总
IgG/dsDNA滴度呈正相关 。
? PM/DM,Jo-1 18-20%,pl-7<3,SRP4%,
Mi-28%,
? 56000 85-90%,
?
3 2 25
?SSc,
?Scl-70 5707%,ACA19.4%.,抗
RNA聚合酶 RNAPs I II III,AECA
（抗内皮细胞抗体） IgG型为 40%，抗
原纤维抗体是重症的一个指标，抗丙酮
酸脱氢酶的 Ela亚单位的抗体是发生胆汁
性肝硬化的血清指标。 PM-Scl。
?SS,
? SSA45-68%,SSB20-33.6%,
抗甲状腺细胞抗体 50%,抗唾腺管细
胞抗体 10-70%,抗胰管细胞抗体 6-
33%,抗胃黏膜细胞抗体 5-15%,抗
线粒体抗体 20%,
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?MCTD,
? ANA100%,nRNP100%,
?RF,
? PCA87%,IgM/IgG抗多糖抗体
87%,
? ANCA
?ANCA(anti neutrophil cytoplasmic
antibodies) 是 1982年由 Davies等人
发现的。是针对中性粒细胞主要颗粒成
分及单核细胞溶酶体的其主要抗原成分
有蛋白酶 3（ PR3），髓过氧化物酶
（ MPO）组蛋白酶 (CG)，乳铁蛋白 (LF)，
杀菌 /通透性增加蛋白 (BIP)，人白细胞
弹力蛋白酶 (HLE)，溶酶体膜糖蛋白等。
3 2 27
?其检查方法用间接免疫荧光 (IIF)和
抗原特异性酶联免疫吸附 (ELISA)。
分为 C-ANC（ Atypical）即弥漫的
胞浆荧光无中心小叶间增强现象,
C-ANCA典型的颗粒状胞浆荧光伴
中心小叶间增强现象,P-ANCA核周
荧光伴和不伴核延伸，包括粒细胞
特异性抗核抗体 (GSANA)；
AtypicalANCA其他形式的免疫荧光
模式。
?ANA,ACA等抗体常常产生 P-
ANCA样的免疫荧光模式。
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? ANCA的致病机制,
? 1.直接激活中性粒细胞
? 2.激活单核细胞
? 3.直接损伤内皮细胞
? 4.激活 T淋巴细胞
? 5.a-AT（ a-胰蛋白酶）是 PR3蛋白酶的抑制剂，
AT基因在小血管炎中成多态性。
? Vasculitides,ANCA
? Churg-Strauss 64-75%
? Microscopic polyangiitis 75%
? WG 90-97%
? GCA (APL) >30%
? Takayasu artertis (抗主动脉抗体 )>1:32
? BD APL ANCA+
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血管炎的抗体
?1 ANCA,
?2 AECA（ anti-endothelial cell
antibodies,AECA）,
? BD 40%;
TA37%;MPA36%;PA44%;C-
S33%;GCA50%;OTHER62%,
?3 anti-PR3(蛋白酶 3,)
? anti-MPO(髓过氧化物酶）
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?其他：内皮素 ET-1，致炎因子 IL-
1?/β/TNF等；趋化 因子 MIP- 1?,MCP-
1,RANTES等。新喋呤。 sTNF-55，软骨
低聚质蛋白（ COMP）。黏附分子等等。
