第十一章 高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
11.1 基本概念和术语以液体为流动相的色谱法称为液相色谱 。 高效能固体细微粒为固定相,高压溶剂为流动相,配备高灵敏度检测器的液相色谱为高效液相色谱 。
术语,
A,被分离组份,被分离物质,溶质
B,流动相,溶剂,洗脱剂
C,固定相包括,载体 （ 担体 ）,涂层
D,流出液,洗出液
11.2 分类和特点分类,
分配色谱,经典液液分配色谱化学键合相色谱（分配 +吸附）
极性键合相色谱非极性键合相色谱
（反相化学键合相、离子对色谱）
* 聚合物基底的反相色谱
11.2 分类和特点分类,
吸附色谱
离子交换色谱阳离子交换色谱阴离子交换色谱离子色谱
分子排阻色谱凝胶过滤色谱凝胶渗透色谱特点,
与经典 LC比,快速,高效,高灵敏度
与 GC比,慢速,但可分离难气化物质
A,高压,150-300 Kg/cm2
B,高速,1-10 mL/min
C,高效,?5000 塔板 /m
D,采用高灵敏度检测器
11.3 反相色谱
11.3.1 保留和分离机理以非极性键合或聚合物基底固定相为固定相,以极性溶剂为流动相,利用被分离组份在两相中的分配差异和在固定相上吸附的差异,使之彼此分离 。
11.3.2 固定相以硅胶为基底的硅氧烷,C18,ODS,octadecylsilane
以聚合物为基底,PSDVB
11.3.3 流动相乙腈,甲醇,乙醇,水 （ 缓冲液 ）
11.3.4 流出次序极性大的先流出，基团小的先流出
O ( C H 2 ) 17 CH 3
O C H 3
S i
O C H 3
CH 2 CH CH
2
C H CHCH 2 CH 2 CH CH
2
SO 3 H
- +
CH 2 CH CH 2
CH 2 CH CH 2
CH 2 N ( C H 3 ) 3
+
Cl
-
11.4 离子交换色谱
11.4.1 保留和分离机理以离子交换剂为固定相，借助于试样中电离组份对固定在交换剂基体上带相反电荷的离解部位亲合力的不同，使其彼此分离。
11.4.2 固定相交联聚苯乙烯为基体的离子交换树脂硅胶为基体的键合离子交换剂强酸型,弱酸型,强碱型,弱碱型
11.4.3 流动相电解质溶液缓冲液参见经典离子交换色谱
11.4.4 流出次序与溶质有效电荷、原子序、二次平衡有关
M2+ + 4Cl- MCl42-
Cu2+ + 4Cl- MCu42-
11.5 HPLC仪器结构示意图贮液器输液泵梯度装置进样装置 分离柱控温装置检测器
11.5.1 贮液器
11.5.2 输液泵
A,恒压泵：气体压活塞,气体直接压液面
B,恒流泵：螺旋注射泵,往复式柱塞泵
11.5.3 梯度淋洗装置低压梯度装置：混合后进高压泵高压梯度装置：进高压泵后再混合
11.5.4 进样装置进样阀六通阀进样示意图流动相
A B
C
DE
F
取样色谱柱样品 排空
A
B
CD
E
F
流动相 色谱柱进样
11.5.5 色谱柱柱管材料,耐腐蚀耐压内径,2.0,3.0,4.1,4.6mm
长度,5,10,15,25cm等固定相,颗粒细,圆,均一,刚性强
11.5.6 控温系统
11.5.7 检测器要求：高灵敏,快响应,宽线性,低噪音,小体积类型,
A,通用检测器,紫外 -可见 （ UV-VIS）,示差折光,电导
B,选择性检测器,荧光,电化学 （ 安培,库仑 ）
C,特效检测器,火焰原子吸收,等离子体发射光谱,质谱
11.5.8 数据采集和处理系统
11.6 实验技术
11.6.1 除气,真空脱气,吹氦脱气,超声波脱气
11.6.2 装柱,干法装柱,湿法装柱
11.6.3 衍生技术,柱前衍生,柱后衍生
11.6.4 接口
11.6.5 条件选择
A,流动相流速
B,流动相组成
C,固定相
D,分析温度
11.6.6 梯度洗涤技术仅用弱溶剂 仅用强溶剂梯度洗提
High Performance Liquid Chromatography
11.1 基本概念和术语以液体为流动相的色谱法称为液相色谱 。 高效能固体细微粒为固定相,高压溶剂为流动相,配备高灵敏度检测器的液相色谱为高效液相色谱 。
术语,
A,被分离组份,被分离物质,溶质
B,流动相,溶剂,洗脱剂
C,固定相包括,载体 （ 担体 ）,涂层
D,流出液,洗出液
11.2 分类和特点分类,
分配色谱,经典液液分配色谱化学键合相色谱（分配 +吸附）
极性键合相色谱非极性键合相色谱
（反相化学键合相、离子对色谱）
* 聚合物基底的反相色谱
11.2 分类和特点分类,
吸附色谱
离子交换色谱阳离子交换色谱阴离子交换色谱离子色谱
分子排阻色谱凝胶过滤色谱凝胶渗透色谱特点,
与经典 LC比,快速,高效,高灵敏度
与 GC比,慢速,但可分离难气化物质
A,高压,150-300 Kg/cm2
B,高速,1-10 mL/min
C,高效,?5000 塔板 /m
D,采用高灵敏度检测器
11.3 反相色谱
11.3.1 保留和分离机理以非极性键合或聚合物基底固定相为固定相,以极性溶剂为流动相,利用被分离组份在两相中的分配差异和在固定相上吸附的差异,使之彼此分离 。
11.3.2 固定相以硅胶为基底的硅氧烷,C18,ODS,octadecylsilane
以聚合物为基底,PSDVB
11.3.3 流动相乙腈,甲醇,乙醇,水 （ 缓冲液 ）
11.3.4 流出次序极性大的先流出，基团小的先流出
O ( C H 2 ) 17 CH 3
O C H 3
S i
O C H 3
CH 2 CH CH
2
C H CHCH 2 CH 2 CH CH
2
SO 3 H
- +
CH 2 CH CH 2
CH 2 CH CH 2
CH 2 N ( C H 3 ) 3
+
Cl
-
11.4 离子交换色谱
11.4.1 保留和分离机理以离子交换剂为固定相，借助于试样中电离组份对固定在交换剂基体上带相反电荷的离解部位亲合力的不同，使其彼此分离。
11.4.2 固定相交联聚苯乙烯为基体的离子交换树脂硅胶为基体的键合离子交换剂强酸型,弱酸型,强碱型,弱碱型
11.4.3 流动相电解质溶液缓冲液参见经典离子交换色谱
11.4.4 流出次序与溶质有效电荷、原子序、二次平衡有关
M2+ + 4Cl- MCl42-
Cu2+ + 4Cl- MCu42-
11.5 HPLC仪器结构示意图贮液器输液泵梯度装置进样装置 分离柱控温装置检测器
11.5.1 贮液器
11.5.2 输液泵
A,恒压泵：气体压活塞,气体直接压液面
B,恒流泵：螺旋注射泵,往复式柱塞泵
11.5.3 梯度淋洗装置低压梯度装置：混合后进高压泵高压梯度装置：进高压泵后再混合
11.5.4 进样装置进样阀六通阀进样示意图流动相
A B
C
DE
F
取样色谱柱样品 排空
A
B
CD
E
F
流动相 色谱柱进样
11.5.5 色谱柱柱管材料,耐腐蚀耐压内径,2.0,3.0,4.1,4.6mm
长度,5,10,15,25cm等固定相,颗粒细,圆,均一,刚性强
11.5.6 控温系统
11.5.7 检测器要求：高灵敏,快响应,宽线性,低噪音,小体积类型,
A,通用检测器,紫外 -可见 （ UV-VIS）,示差折光,电导
B,选择性检测器,荧光,电化学 （ 安培,库仑 ）
C,特效检测器,火焰原子吸收,等离子体发射光谱,质谱
11.5.8 数据采集和处理系统
11.6 实验技术
11.6.1 除气,真空脱气,吹氦脱气,超声波脱气
11.6.2 装柱,干法装柱,湿法装柱
11.6.3 衍生技术,柱前衍生,柱后衍生
11.6.4 接口
11.6.5 条件选择
A,流动相流速
B,流动相组成
C,固定相
D,分析温度
11.6.6 梯度洗涤技术仅用弱溶剂 仅用强溶剂梯度洗提
