第四章 药物定量分析与分析方法验证第一节 定量分析样品的前处理方法第二节 定量分析方法特点第三节 药品质量标准分析方法验证第四节 生物样品分析方法的基本要求返回主目录基本要求练习与思考基本要求一,掌握定量分析方法验证的效能指标 。
二,熟悉定量分析样品的前处理方法 。
三,了解定量分析样品的前处理方法的进展及在药物分中的应用 。
返 回第一节 定量分析样品的前处理方法一、概述
1.为什么要对定量分析的样品进行前处理？
含卤素有机药物 R-X （ F,Cl,Br,I ）
金属有机药物 R-O-Me（ 有机酸或酚的含金属有机药物 金属盐；结合不牢固）
有机金属药物 R-Me （ 结合牢固）
2,常用的处理方法 不经有机破坏的分析方法药物分析中常用的分析方法经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法
（一）直接测定法例如：富马酸亚铁溶于热稀矿酸，采用铈量法,邻二氮菲作指示剂
CH
CH
C
C
O
O
0
Fe
（二）经水解后测定法
1,直接回流后测定法 例如：三氯叔丁醇的含量测定
CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2O
NaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3
AgNO3 + NH4SCN AgSCN + NH4NO3
2,用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2C17H35COOH
H2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2O
△
（三 ） 经氧化还原后测定法
1,碱性还原后 测定 例如：泛影酸的含量测定
2,酸性还原后 测定 例如：碘番酸的含量测定 Zn还原后银量法
C O O H
I
I
I
N H C O C H 3CH 3 C O N H
C O O H
H 2 N NH 2
+ 1 1 N a O H + 3 Z n
+ 3 N a I + 2 C H 3 C O O N a + 3 N a Z n O 2 + 3 H 2 O
N a I + A g N O3 A g I + N a N O3
3,利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量
（ 1）含锑药物 例如：葡萄糖酸锑的含量测定
Sb5+ + 2KI Sb3+ + 2K+ ++ I2
I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6
（ 2） 含铁药物
2Fe3+ + 2KI 2Fe2+ + 2K+ + I2
I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6
H+
三、经有机破坏的分析方法湿法破坏药物分析中常用的有机破坏的方法有 干法破坏
HNO3-HClO4法 氧瓶燃烧法
(一 )湿法破坏 HNO3-H2SO4法
H2SO4-硫酸盐法
HNO3- H2SO4-HClO4法； H2SO4-H2O2； H2SO4-KMnO4
(二 )干法破坏 加 Na2CO3或 MgO以助灰化；温度控制在 420℃
(三 )氧燃瓶燃烧法 (oxygen flask combustion method)
1,仪器装置 500ml,1000ml,2000ml,磨口、硬质玻璃锥形瓶
2,称样 固体样；液体样要求详见 P68
3,燃烧分解操作法
4,吸收液的选择 用于 X,S,Se等的鉴别、检查、含量测定时多数是 H2O或 H2O-NaOH； 少数为 H2O-NaOH-H2O2.
应用示例：碘苯酯的测定
I
CH
CH 3
( C H 2 ) 8 - C O O C 2 H 5 I
2
O 2
( I )
_
I 2 + 2 N a O H N a I O + N a I + H2 O
3 N a I O N a I O3 + 2 N a I
3 B r 2 + I + 3 H 2 O I O 3 + 6 H B r
Br 2 ( g u o ) + H C O O H H B r + C O2
I O 3 + 5 I + 6 H 3 I2 + 3 H 2 O
I 2 + 2 N a 2 S 2 O 3 2 N a I + N a2 S 4 O 6
CH 3 COOH-
+-
-
-
返 回第二节 定量分析方法特点一、容量分析法
（一）容量分析法的 特点操作简单、快速；
比较准确（ RSD＜ 0.2%）；
仪器普通易得。
（二）容量分析法的 计算 问题
1,滴定度 （ T） 的概念 每 1mlmol溶液相当于被测物质的量 (mg)
2,滴定度的计算 aA + bB cC + dD
T = M× b/a× B
3,百分含量的计算
（ 1）直接滴定法 D% = V × F × T/W × 100%
F = 实际标定的浓度 /规定的浓度
（ 2）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）
D% = （ VO – VB) × F × T/W × 100%
二、光谱分析法
（一）紫外 -可见分光光度法（ 200nm～ 760nm)
灵敏度高，可达 10-4g/ml ～ 10-7g/ml
1,特点 准确度高,SRD（ %） 为 2% ～ 5%
仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用范围广。
2,朗伯 -比耳定律 A = ECL E1%1cm = ε × 10/M
3,仪器校正和检定波长校正用汞灯中较强谱线 237.38,253.65,275.28,296.73,
313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与 576.96nm
或用仪器中氘灯的 486.02nm与 656.10nm进行校正。
吸收度的检定：用 K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至 1000ml
波长 (nm) 235(最小 ) 257(最大 ) 313(最小 ) 350(最大 )
E1%1cm 124.5 144.0 48.62 106.6
杂散光检查,试剂 浓度 (g/ml) 测定波长 透光率 (%)
NaI 1.00 220nm ＜ 0.8
NaNO2 5.00 340nm ＜ 0.8
4,对溶剂的要求,
220～ 240nm 241～ 250nm 251～ 300nm 300nm以上溶剂 +吸收池 A ＜ 0.41 ＜ 0.20 ＜ 0.10 ＜ 0.05
5,测定方法要求供试品溶液的 A应在 0.3 ～ 0.7
对照品比较法,Cx=(Ax/Ar)Cr; 含量 %=Cx× D/W× 100 %
常用方法 吸收系数法,含量 %= (E1%1cm )x/(E1%1cm )r × 100 %
计算分光光度法,VA的三点校正法
（二）荧光分光光度法灵敏度高,可达 10-10g/ml ～ 10-12g/ml
在 低浓度 进行测定，防止 F与 C不成正比及自熄灭作用
1,特点 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减灵敏度高，但 干扰因素多 。
制备荧光 衍生物,可提高其灵敏度和选择性。
用样品 量少,操作 简单,方法 快速,应用 范围 较 广 。
2,荧光分析仪 有二个单色光器 —激发单色光器与发射单色光器；且激发光源、样品池和检测器成直角。
3,含量测定 常用的方法对照品比较法,Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) × Cr
Ch.P收载 地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
三、色谱分析法按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱方法分类按分离方法分为,PC； TLC； 柱色谱； GC； HPLC。
（一） HPLC法
1,对 HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数,n = 5.54(tR /Wh/2)2
2,系统性试验 分离度,R = 2（ tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大于 1.5
拖尾因子,T = W0.05h/2d1 应在 0.9 ～ 1.05
内标法加校正因子测定供试品中主成分含量
3,测定方法 标准曲线法外标法测定供试品中主成分含量外标一点法应用示例：
RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法
（二） GC法
1,对 GC仪器一般要求载气为 氮气 ；色谱柱为填充或毛细管柱色谱柱的理论板数,n = 5.54(tR /Wh/2)2
2,系统性试验 分离度,R = 2（ tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大于 1.5
拖尾因子,T = W0.05h/2d1 应在 0.9 ～ 1.05
内标法加校正因子测定供试品中主成分含量
3,测定方法 标准曲线法外标法测定供试品中主成分含量外标一点法应用示例：
Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素 E及其片剂、注射剂、甲酚皂溶液等均采用 GC法中的内标法加校正因子测定含量。
返 回第三节 药品质量标准分析方法验证一、准确度是指用该方法 测定结果与真实值接近的程度,用 回收率 表示
（一）含量测定方法的准确度
1,原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确度的另一方法测定的结果进行比较。
2,制剂 要考察 辅料对回收率的影响 。采用在空白辅料中加入原料对照品的方法作回收率试验，然后计算 RSD。
具体做法：测定高、中、低三个浓度,n=3,共 9个数据来评价回收率的 RSD＜ 2%； 用 UV和 HPLC发时，一般回收率可达 98%～ 102%；容量法可达 99.7%～ 100.3%
（二）数据要求回收率 % = （测定平均值 —空白值） /加入量× 100%
要求制备 高,中,低 三浓度的样品，各测定 3次 。应报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。
二、精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果之间的 接近程度 。
（一）精密度表示方法
1,偏差 (deviation,d) d = 测得值 -平均值 =Xi-X
2,标准偏差 （ standard deviation,SD或 S）
S =[(∑Xi – X)2/(n-1)]1/2
3,相对标准差 (relative standard deviation,RSD)也称变异系数
(coefficient of variation,CV)
RSD=标准偏差 /平均值× 100%=S/X × 100%
（二）重复性、中间精密度及重现性
1,重复性 在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度,
2,中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。
3,重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。
（三）数据要求应报告 S或 SD,RSD和可信限。用统计学的可信性分析 (t或 f）。
三、专属性是指在其他成分 (如杂质、降解产物、辅料等 )可能存在下，
采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。
（一）鉴别反应应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分的样品均应呈现负反应。
（二）含量测定和杂质测定色谱法和其他分离法,应附代表性的图谱,以说明专属性 。
图中应注明各组分的位置,色谱法中分离度应符合要求 。 在能获得杂质的情况下,可加到试样中,考察对结果的干扰 。 在杂质和降解物不能获得的情况下,可用以验证方法和药典方法进行对照；也可用对试样加速破坏的方法,比较两种方法 。
四、检测限（ limit of detection,LOD)
是指试样中被测物能被检测出的 最低浓度或量,是限度检验指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。
（一） 常用的方法
1.非仪器分析目视法 用已知浓度被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。
2.仪器分析方法 UV法,LOD = f.3S空 = C样 /A样 × 3S空
Flu法,LOD = f.3S空 = C样 /(F样 -F空 )× 3S空
GC和 HPLC法,LOD = S/N = 2或 3
（二）数据要求应附测试图，说明测试过程和检测限结果。
五、定量限（ limit of quantitation,LOQ)
是指样品中 被测物能被 定量测定 的最低量,其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求
LOQ.常用信噪比法确定定量限，一般以 S/N=10时相应的浓度进行测定。
六、线性是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈 正比 关系的 程度 。
UV法：首先制备一个标准系列，浓度点 n =5; A = 0.3～,0.7
建立回归方程 C = aA + b ;r ＞ 0.9999。
HPLC法：制备一个标准系列，浓度点 n =5 ～ 7; 以 C对 h或 A或与内标物的峰面积之比，建立回归方程 r ＞ 0.9999。
七、范围是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或量的区间 。
原料药和制剂含量测定,范围应为测试浓度的 80%-～ 120%。
制剂含量均匀度检查,范围应为测试浓度的 70%-～ 130%。
溶出度或释放度中的溶出量测定,范围应为限度的 ± 20%。
八、耐用性是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响的 承受程度 。典型的变动因素有：被溶液的稳定性、样品提取次数、时间等。
HPLC法变动因素有：流动相组成与 pH,色谱柱，柱温，流速等。
GC法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检测器温度等。
分析方法效能指标的具体应用,
1,用于鉴别试验的方法：只要求专属性、耐用性，其余不要求。
2,用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法：
①用于定量：除了检测限不要求外，其余七项指标均要求。
②限度检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其余不要求。
3,原料、制剂及溶出度测定：不要求检测和定量限，其余均要求。
返 回第四节 生物样品分析方法的基本要求一,常用样品的种类,采集和贮张二,生物样品分析前处理技术三,定量分析方法验证返 回练习与思考
[A型题 ]
1,药品的鉴别是证明
A,未知药物的真伪 B,已知药物的真伪
C,已知药物的疗效 D,药物的纯度
E,药物的稳定性
2,相对标准差表示的应是
A,准确度 B,回收率 C,精密度
D,纯净度 E,限度
3,用移液管量取的 25ml溶液,应记成
A,25ml B,25.0ml C,25.00ml
D,25.000ml E,25± 1ml
4,以下三个数字 0.5362,0.0014,0.25之和应为
A,0.79 B,0.788 C,0.787
D,0.7876 E,0.8
5,表示两变量指标 A与 C之间线性相关程度常用
A,相关规律 B,比例常数 C,相关常数
D,相关系数 E,精密度
6,减小偶然误差的方法是
A,做空白试验 B,做对照实验
C,做回收试验 D,增加平行测定次数
E,选用多种测定方法
[B型题 ]
1～ 4
A,1.23 B,1.22 C,2.54
D,2.53 E,2.51
1,1.2252
2,2.5351
3,2.5348
4,2.5068
A
C
D
E
5～ 8
A,空白试验 B,对照试验 C,回收试验
D,鉴别试验 E,检测试验
5,以同量的溶剂替代供试品同法进行测定试验
6,在供试液中加入已知量的标准物或已知量的被测物后,同法进行测定试验
7,用已知量的纯物质作为试样,同法进行测定试验
8,取少许水杨酸,加水溶解,加三氯化铁试液,显紫堇色
A
C
D
B
[X型题 ]
1,药物分析方法的效能指标有
A,检测限 B,耐用性 C,准确度
D,专属性 E,代表性
2,对药物中杂质进行检查时,要求所用的检查方法应具有
A,耐用性 B,专属性 C,检测限
D,准确度 E,线性与范围
3．用碘量法测定维生素 C原料药时，要求碘量法应具备
A,专属性 B,定量限 C,精密度
D,粗放度 E,线性
4．系统误差来源于
A,分析方法 B,所用试剂
C,操作者 D,所用仪器
E,工作环境
5,消除系统误差的方法为
A,校正所用的仪器 B,作对照实验
C,做空白试验 D,做预试验
E,做回收试验
6,以下所列仪器哪些使用前需进行校正
A,滴定管 B,量瓶 C,量杯
D,移液管 E,碘量瓶
7,中国药典 （ 2000年版 ） 在正文部分的检查项下应包括
A,药物的真伪 B,有效性 C,均一性
D,纯度要求 E,安全性
8,进行药品检验时,要从大量样品中取出少量样品应考虑取样的
A,多样性 B,真实性 C,代表性
D,科学性 E,可靠性
9．用信噪比表示检测限时，信噪比一般应为
A,1∶1 B,2∶1 C,3∶1
D,4∶1 E,5∶1
10,检验报告应有以下内容
A,供试品名称 B,外观性状
C,检验结果、结论 D,送检人盖章
E,报告的日期返 回
二,熟悉定量分析样品的前处理方法 。
三,了解定量分析样品的前处理方法的进展及在药物分中的应用 。
返 回第一节 定量分析样品的前处理方法一、概述
1.为什么要对定量分析的样品进行前处理？
含卤素有机药物 R-X （ F,Cl,Br,I ）
金属有机药物 R-O-Me（ 有机酸或酚的含金属有机药物 金属盐；结合不牢固）
有机金属药物 R-Me （ 结合牢固）
2,常用的处理方法 不经有机破坏的分析方法药物分析中常用的分析方法经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法
（一）直接测定法例如：富马酸亚铁溶于热稀矿酸，采用铈量法,邻二氮菲作指示剂
CH
CH
C
C
O
O
0
Fe
（二）经水解后测定法
1,直接回流后测定法 例如：三氯叔丁醇的含量测定
CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2O
NaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3
AgNO3 + NH4SCN AgSCN + NH4NO3
2,用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2C17H35COOH
H2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2O
△
（三 ） 经氧化还原后测定法
1,碱性还原后 测定 例如：泛影酸的含量测定
2,酸性还原后 测定 例如：碘番酸的含量测定 Zn还原后银量法
C O O H
I
I
I
N H C O C H 3CH 3 C O N H
C O O H
H 2 N NH 2
+ 1 1 N a O H + 3 Z n
+ 3 N a I + 2 C H 3 C O O N a + 3 N a Z n O 2 + 3 H 2 O
N a I + A g N O3 A g I + N a N O3
3,利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量
（ 1）含锑药物 例如：葡萄糖酸锑的含量测定
Sb5+ + 2KI Sb3+ + 2K+ ++ I2
I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6
（ 2） 含铁药物
2Fe3+ + 2KI 2Fe2+ + 2K+ + I2
I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6
H+
三、经有机破坏的分析方法湿法破坏药物分析中常用的有机破坏的方法有 干法破坏
HNO3-HClO4法 氧瓶燃烧法
(一 )湿法破坏 HNO3-H2SO4法
H2SO4-硫酸盐法
HNO3- H2SO4-HClO4法； H2SO4-H2O2； H2SO4-KMnO4
(二 )干法破坏 加 Na2CO3或 MgO以助灰化；温度控制在 420℃
(三 )氧燃瓶燃烧法 (oxygen flask combustion method)
1,仪器装置 500ml,1000ml,2000ml,磨口、硬质玻璃锥形瓶
2,称样 固体样；液体样要求详见 P68
3,燃烧分解操作法
4,吸收液的选择 用于 X,S,Se等的鉴别、检查、含量测定时多数是 H2O或 H2O-NaOH； 少数为 H2O-NaOH-H2O2.
应用示例：碘苯酯的测定
I
CH
CH 3
( C H 2 ) 8 - C O O C 2 H 5 I
2
O 2
( I )
_
I 2 + 2 N a O H N a I O + N a I + H2 O
3 N a I O N a I O3 + 2 N a I
3 B r 2 + I + 3 H 2 O I O 3 + 6 H B r
Br 2 ( g u o ) + H C O O H H B r + C O2
I O 3 + 5 I + 6 H 3 I2 + 3 H 2 O
I 2 + 2 N a 2 S 2 O 3 2 N a I + N a2 S 4 O 6
CH 3 COOH-
+-
-
-
返 回第二节 定量分析方法特点一、容量分析法
（一）容量分析法的 特点操作简单、快速；
比较准确（ RSD＜ 0.2%）；
仪器普通易得。
（二）容量分析法的 计算 问题
1,滴定度 （ T） 的概念 每 1mlmol溶液相当于被测物质的量 (mg)
2,滴定度的计算 aA + bB cC + dD
T = M× b/a× B
3,百分含量的计算
（ 1）直接滴定法 D% = V × F × T/W × 100%
F = 实际标定的浓度 /规定的浓度
（ 2）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）
D% = （ VO – VB) × F × T/W × 100%
二、光谱分析法
（一）紫外 -可见分光光度法（ 200nm～ 760nm)
灵敏度高，可达 10-4g/ml ～ 10-7g/ml
1,特点 准确度高,SRD（ %） 为 2% ～ 5%
仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用范围广。
2,朗伯 -比耳定律 A = ECL E1%1cm = ε × 10/M
3,仪器校正和检定波长校正用汞灯中较强谱线 237.38,253.65,275.28,296.73,
313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与 576.96nm
或用仪器中氘灯的 486.02nm与 656.10nm进行校正。
吸收度的检定：用 K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至 1000ml
波长 (nm) 235(最小 ) 257(最大 ) 313(最小 ) 350(最大 )
E1%1cm 124.5 144.0 48.62 106.6
杂散光检查,试剂 浓度 (g/ml) 测定波长 透光率 (%)
NaI 1.00 220nm ＜ 0.8
NaNO2 5.00 340nm ＜ 0.8
4,对溶剂的要求,
220～ 240nm 241～ 250nm 251～ 300nm 300nm以上溶剂 +吸收池 A ＜ 0.41 ＜ 0.20 ＜ 0.10 ＜ 0.05
5,测定方法要求供试品溶液的 A应在 0.3 ～ 0.7
对照品比较法,Cx=(Ax/Ar)Cr; 含量 %=Cx× D/W× 100 %
常用方法 吸收系数法,含量 %= (E1%1cm )x/(E1%1cm )r × 100 %
计算分光光度法,VA的三点校正法
（二）荧光分光光度法灵敏度高,可达 10-10g/ml ～ 10-12g/ml
在 低浓度 进行测定，防止 F与 C不成正比及自熄灭作用
1,特点 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减灵敏度高，但 干扰因素多 。
制备荧光 衍生物,可提高其灵敏度和选择性。
用样品 量少,操作 简单,方法 快速,应用 范围 较 广 。
2,荧光分析仪 有二个单色光器 —激发单色光器与发射单色光器；且激发光源、样品池和检测器成直角。
3,含量测定 常用的方法对照品比较法,Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) × Cr
Ch.P收载 地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
三、色谱分析法按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱方法分类按分离方法分为,PC； TLC； 柱色谱； GC； HPLC。
（一） HPLC法
1,对 HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数,n = 5.54(tR /Wh/2)2
2,系统性试验 分离度,R = 2（ tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大于 1.5
拖尾因子,T = W0.05h/2d1 应在 0.9 ～ 1.05
内标法加校正因子测定供试品中主成分含量
3,测定方法 标准曲线法外标法测定供试品中主成分含量外标一点法应用示例：
RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法
（二） GC法
1,对 GC仪器一般要求载气为 氮气 ；色谱柱为填充或毛细管柱色谱柱的理论板数,n = 5.54(tR /Wh/2)2
2,系统性试验 分离度,R = 2（ tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大于 1.5
拖尾因子,T = W0.05h/2d1 应在 0.9 ～ 1.05
内标法加校正因子测定供试品中主成分含量
3,测定方法 标准曲线法外标法测定供试品中主成分含量外标一点法应用示例：
Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素 E及其片剂、注射剂、甲酚皂溶液等均采用 GC法中的内标法加校正因子测定含量。
返 回第三节 药品质量标准分析方法验证一、准确度是指用该方法 测定结果与真实值接近的程度,用 回收率 表示
（一）含量测定方法的准确度
1,原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确度的另一方法测定的结果进行比较。
2,制剂 要考察 辅料对回收率的影响 。采用在空白辅料中加入原料对照品的方法作回收率试验，然后计算 RSD。
具体做法：测定高、中、低三个浓度,n=3,共 9个数据来评价回收率的 RSD＜ 2%； 用 UV和 HPLC发时，一般回收率可达 98%～ 102%；容量法可达 99.7%～ 100.3%
（二）数据要求回收率 % = （测定平均值 —空白值） /加入量× 100%
要求制备 高,中,低 三浓度的样品，各测定 3次 。应报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。
二、精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果之间的 接近程度 。
（一）精密度表示方法
1,偏差 (deviation,d) d = 测得值 -平均值 =Xi-X
2,标准偏差 （ standard deviation,SD或 S）
S =[(∑Xi – X)2/(n-1)]1/2
3,相对标准差 (relative standard deviation,RSD)也称变异系数
(coefficient of variation,CV)
RSD=标准偏差 /平均值× 100%=S/X × 100%
（二）重复性、中间精密度及重现性
1,重复性 在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度,
2,中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。
3,重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。
（三）数据要求应报告 S或 SD,RSD和可信限。用统计学的可信性分析 (t或 f）。
三、专属性是指在其他成分 (如杂质、降解产物、辅料等 )可能存在下，
采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。
（一）鉴别反应应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分的样品均应呈现负反应。
（二）含量测定和杂质测定色谱法和其他分离法,应附代表性的图谱,以说明专属性 。
图中应注明各组分的位置,色谱法中分离度应符合要求 。 在能获得杂质的情况下,可加到试样中,考察对结果的干扰 。 在杂质和降解物不能获得的情况下,可用以验证方法和药典方法进行对照；也可用对试样加速破坏的方法,比较两种方法 。
四、检测限（ limit of detection,LOD)
是指试样中被测物能被检测出的 最低浓度或量,是限度检验指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。
（一） 常用的方法
1.非仪器分析目视法 用已知浓度被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。
2.仪器分析方法 UV法,LOD = f.3S空 = C样 /A样 × 3S空
Flu法,LOD = f.3S空 = C样 /(F样 -F空 )× 3S空
GC和 HPLC法,LOD = S/N = 2或 3
（二）数据要求应附测试图，说明测试过程和检测限结果。
五、定量限（ limit of quantitation,LOQ)
是指样品中 被测物能被 定量测定 的最低量,其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求
LOQ.常用信噪比法确定定量限，一般以 S/N=10时相应的浓度进行测定。
六、线性是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈 正比 关系的 程度 。
UV法：首先制备一个标准系列，浓度点 n =5; A = 0.3～,0.7
建立回归方程 C = aA + b ;r ＞ 0.9999。
HPLC法：制备一个标准系列，浓度点 n =5 ～ 7; 以 C对 h或 A或与内标物的峰面积之比，建立回归方程 r ＞ 0.9999。
七、范围是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或量的区间 。
原料药和制剂含量测定,范围应为测试浓度的 80%-～ 120%。
制剂含量均匀度检查,范围应为测试浓度的 70%-～ 130%。
溶出度或释放度中的溶出量测定,范围应为限度的 ± 20%。
八、耐用性是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响的 承受程度 。典型的变动因素有：被溶液的稳定性、样品提取次数、时间等。
HPLC法变动因素有：流动相组成与 pH,色谱柱，柱温，流速等。
GC法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检测器温度等。
分析方法效能指标的具体应用,
1,用于鉴别试验的方法：只要求专属性、耐用性，其余不要求。
2,用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法：
①用于定量：除了检测限不要求外，其余七项指标均要求。
②限度检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其余不要求。
3,原料、制剂及溶出度测定：不要求检测和定量限，其余均要求。
返 回第四节 生物样品分析方法的基本要求一,常用样品的种类,采集和贮张二,生物样品分析前处理技术三,定量分析方法验证返 回练习与思考
[A型题 ]
1,药品的鉴别是证明
A,未知药物的真伪 B,已知药物的真伪
C,已知药物的疗效 D,药物的纯度
E,药物的稳定性
2,相对标准差表示的应是
A,准确度 B,回收率 C,精密度
D,纯净度 E,限度
3,用移液管量取的 25ml溶液,应记成
A,25ml B,25.0ml C,25.00ml
D,25.000ml E,25± 1ml
4,以下三个数字 0.5362,0.0014,0.25之和应为
A,0.79 B,0.788 C,0.787
D,0.7876 E,0.8
5,表示两变量指标 A与 C之间线性相关程度常用
A,相关规律 B,比例常数 C,相关常数
D,相关系数 E,精密度
6,减小偶然误差的方法是
A,做空白试验 B,做对照实验
C,做回收试验 D,增加平行测定次数
E,选用多种测定方法
[B型题 ]
1～ 4
A,1.23 B,1.22 C,2.54
D,2.53 E,2.51
1,1.2252
2,2.5351
3,2.5348
4,2.5068
A
C
D
E
5～ 8
A,空白试验 B,对照试验 C,回收试验
D,鉴别试验 E,检测试验
5,以同量的溶剂替代供试品同法进行测定试验
6,在供试液中加入已知量的标准物或已知量的被测物后,同法进行测定试验
7,用已知量的纯物质作为试样,同法进行测定试验
8,取少许水杨酸,加水溶解,加三氯化铁试液,显紫堇色
A
C
D
B
[X型题 ]
1,药物分析方法的效能指标有
A,检测限 B,耐用性 C,准确度
D,专属性 E,代表性
2,对药物中杂质进行检查时,要求所用的检查方法应具有
A,耐用性 B,专属性 C,检测限
D,准确度 E,线性与范围
3．用碘量法测定维生素 C原料药时，要求碘量法应具备
A,专属性 B,定量限 C,精密度
D,粗放度 E,线性
4．系统误差来源于
A,分析方法 B,所用试剂
C,操作者 D,所用仪器
E,工作环境
5,消除系统误差的方法为
A,校正所用的仪器 B,作对照实验
C,做空白试验 D,做预试验
E,做回收试验
6,以下所列仪器哪些使用前需进行校正
A,滴定管 B,量瓶 C,量杯
D,移液管 E,碘量瓶
7,中国药典 （ 2000年版 ） 在正文部分的检查项下应包括
A,药物的真伪 B,有效性 C,均一性
D,纯度要求 E,安全性
8,进行药品检验时,要从大量样品中取出少量样品应考虑取样的
A,多样性 B,真实性 C,代表性
D,科学性 E,可靠性
9．用信噪比表示检测限时，信噪比一般应为
A,1∶1 B,2∶1 C,3∶1
D,4∶1 E,5∶1
10,检验报告应有以下内容
A,供试品名称 B,外观性状
C,检验结果、结论 D,送检人盖章
E,报告的日期返 回
