第十一章抗生素类药物的分析进入 返回主目录思考与练习第一节 概 述第二节 β –内酰胺类抗生素第三节 氨基糖苷类抗生素第四节 四环素类抗生素第五节 抗生素类药物中高分子杂质的检查基本要求基本要求一,掌握抗生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系 。
二,掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法 。
三,掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原理,测定方法与计算 。
四,熟悉抗生素类药物杂质检查的方法 。
五,了解抗生素类药物中高分子聚合物检查 。
返 回第一节 概述
1,抗生素药物的特点化学纯度较低活性组分易发生变异稳定性差
2,微生物学法与理化法的比较微生物检定法 理化法以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标衡量抗生素的生物效价根据抗生素结构特点，利用其特有的理化性质测定其含量已知或新发现的抗生素、精致品或粗制品均能测定测定化学结构已知、已提纯的抗生素灵敏度高、样品需用量小、反映抗生素的医疗价值，但操作步骤多、
费时,误差大迅速、准确、专属性高、样品需用量小、操作简单、省时
3.抗生素的活性以效价单位来表示：
每 ml或每 mg中含有某种抗生素的有效成分的多少，用单位（ u）或 μg 表示。
1mg青霉素 G钠盐定为 1667单位
1mg青霉素 G钾盐的单位（ u）
=1667× 356.4/372.5=1595u/mg
分类 （按结构与性质）：
β –内酰胺类、氨基糖苷类、
四环素类、大环内酯类、
氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类林可霉素类、其他抗生素类返 回第二节 β –内酰胺类抗生素青霉素类
N
S CH3
CH3
COOHO
HN 1 2
34
56
7
RCO
母核（ 6-氨基青霉烷酸）
A B
头孢菌素类
7 6
5
4
3
2
1
N
O
N H
S
C H
2
R
1
C O O H
母核（7- 氨基头孢菌烷酸）
R C O
A B
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
青霉素
（青霉素钾、钠）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
氨苄西林
（氨苄青霉素）
阿莫西林
（羟氨苄青霉素）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
H O C H 2
C 2 H 5
2
N C H 2 C H 2 O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2
普鲁卡因青霉素头孢氨苄
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
OC
N H 2
C H 2
头孢拉啶
C H 2
N H 2
C O
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
头孢羟氨苄
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
OC
N H 2
C H 2H O
头孢噻吩钠
S
C H 2 C O
N
O
N H
S
C H 2 O C O C H 3
C O O N a
N
S
O
H N
C O O K
C H 3
C H 3
OCC H 2
酸性结构特点与性质一、
Na
与碱金属 (Na+,K+)成盐
（一）羧基易溶于水与有机碱 (普鲁卡因 )成盐 难溶于水普鲁卡因 青霉素
C 2 H 5
2
N C H 2 C H 2 O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2
N
S
O
1
2
3
4
56
7
（二） 手性 C
8
7 6
5
4
3
2
1
N
O
S
头孢菌素类 C6 C7
青霉素类 C3 C5 C6
旋光性
﹡ ﹡
﹡
﹡ ﹡
（三）共轭体系
N
S
O
头孢菌素类 母核有共轭体系青霉素类 母核无明显 UV
多数有苯环取代基
N
O
S
UV
（四） β–内酰胺环水溶液 不稳定干燥纯净 稳定不稳定性因素四元环张力大酰胺键易水解青霉素类某些氧化剂酸、碱、青霉素酶
（某些金属离子）
（温度）
降解失效例 青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ
青霉素酶青霉酸H2OpH2 100℃
α–青霉噻唑酰基羟胺酸
NH2OH
青霉烯酸pH4
青霉胺
CO2
青霉醛
HgCl2
头孢菌素类 酸、碱、胺类?-内酰胺酶 降解失效
（一）呈色反应
1,羟肟酸铁反应 β-内酰胺类呈色羟肟酸衍生物
Fe3+/3
H+
鉴别试验二、
NaOH
HClNOHH-? 内酰胺类
N
S
O
N
S
CO H
N H O H
H 2 N O H H C l
N
S
C H
N H
O
F e
3 +
3
O
H+Fe3+/3
（红、棕、褐）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
2,茚三酮 反应 α -氨基
-氨基 茚三酮
蓝紫色
3,双缩脲反应
-- CO NH
似肽键
（开环分解）?- 内酰胺类碱性酒石酸铜 紫
4,与重氮苯磺酸反应橙黄色重氮苯磺酸-- OHHC （偶合）
酚羟基头孢哌酮
5,与变色酸 -硫酸反应活泼,-CH2-”
青霉素阿莫西林氨苄西林
H C H OCH SOH--,羰基侧链含,△ （ 分解 ）
变色酸显色
1,K+,Na+的火焰反应
（二）各种盐的反应焰色 →鲜黄色
+ 醋酸氧铀锌 →↓黄Na
+
焰色 →紫色
+ 0.1%四苯硼钠 + Ac→↓白K
+
2,沉淀反应（青霉素盐）
遇酸 →↓
在过量 HCl或有机溶剂中溶解白青霉素青霉素钠青霉素钾 緘 +H
3,重氮化 - 偶合反应青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素 +
+H
重氮化 -偶合反应红?
芳伯氨基
4,与三硝基苯酚反应
三硝基苯酚二苄基乙二胺苄星青霉素
N a O H
△
二苄基乙二胺
mp
三硝基苯酚
H
2
O
H
O H
-
H
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H
3
C H
3
C H
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
O H
N O
2
O
2
N N O
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
光谱法（三）
1,UV法 样品、分解产物
nm339
H A + 苯唑青霉烯酸苯唑青霉素 Cu2+
A,Em in,m ax,,%1 cm1光谱图头孢氨苄 λmax = 262nm
青霉素 V钠
A280nm/A264nm = 1.30～ 1.50
N
O
C O N H
C H 3
N
O
S
C H 3
C H 3
C O O N a
N
O
C H
C H 3
O
C O
CN
H N
C H H C
C H 3
C H 3
S H
C H C O O H
pH3.8
分子重排
2,IR法
3180cm-1
N-H β–内酰胺
C=O
1780cm-1
3470cm-1
O-H 1690cm-1
仲酰胺?C=O
1250cm-1
C-O
以阿莫西林为例色谱法（四）
1,TLC法对照品对照法和斑点颜色比较供试品对照品 相同条件
fR
2,HPLC法
Rt比较供试品对照品 相同条件
三、杂质检查药物 检查项目 检查方法头孢他啶 聚合物 HPLC法头孢曲松钠头孢哌酮钠头孢噻肟钠头孢呋辛酯 有关物质和异构体 HPLC法头孢氨苄 有关物质 反相 TLC法青霉素钾（钠） 吸收度 紫外分光光度法
1.头孢他啶聚合物的测定固定相：葡聚糖凝胶 G-10（ 40~120μm ）
流动相 A,3.5%硫酸铵的 0.01mol/L磷酸盐缓冲液流动相 B,0.01%十二烷基硫酸钠对照品溶液：头孢他啶对照品 100μg/ml
1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用 1mg/ml蓝色葡聚糖 2000、流动相 A测定；重复性用对照品溶液、流动相 B测定。 N不低于
900，拖尾因子 0.75~1.5，峰面积的 RSD应小于
5.0%。
2）测定方法进样供试液，用流动相 A；进样对照液，
用流动相 B。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过 0.3%。
2.头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查固定相,ODS
流动相,0.2mol/L磷酸二氢铵 -甲醇（ 62:38）
1）头孢呋辛酯 Δ 2-异构体的制备：头孢呋辛酯对照品 +流动相 头孢呋辛酯 Δ 2-异构体。
2）系统适用性试验：各异构体之间的 R>1.5，以头孢呋辛酯 A异构体计算 n>1500。
3）异构体,t‘R1
相对保留时间 r12=----- 1----被测物
t’R2 2----标准物异构体 相对保留时间 判断
B异构体 0.85 供试液谱图中 A异构体的峰面积
A异构体 1.0 与 A,B异构体峰面积和之比应为 0.48~0.55。
3.头孢氨苄中有关物质的检查 ---反相 TLC法固定相：活化后的硅胶 G板臵 5%（ V/V）正十四烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干展开剂,0.1mol/L枸橼酸 -0.2mol/L磷酸氢二钠 -丙酮（ 120,80,3）
供试液：本品 50mg/ml
对照液（ 1）：本品 0.5 mg/ml
对照液（ 2）,α -苯甘氨酸 0.5 mg/ml
对照液（ 3）,7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸
0.5 mg/ml
结果判断,供试液如显杂质斑点，与对照液（ 2）（ 3）位臵相同上所的斑点比较，其颜色不得更深；如显其他杂质斑点，与对照液（ 1）所显的主斑点比较，
其颜色不得更深。
4.青霉素钠（钾）的吸收度检查：
供试液 1.80mg/ml，
结果判断,A280不得大于 0.10
-8II
+H
碘量法（ 一 ）
1,原理水解产物
OSNaNa IOSNaI ＋＋
定量过量剩余
ChP
四、含量测定
（ 水解 ）
NaOH
头孢菌素族青霉素族反应分两步进行：
1,水解反应 (按化学计算量进行 )
2,氧化 -还原反应 (无固定的量关系,受温度,PH值和时间等因素影响,应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定 )
N
S
C H 3
C H 3
C O O HO
H NR C O
R C O
H
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
S
N
COON a
I24 + 5 H 2 O + 2 H C l
N a O H
C
C H 3
C H 3 S O
3 H
C H
N H 2
C O O HC H
N H C O R
C O O H 2
+2 N a C l
+
+
8HI
第一步第二步
V样空
V样对照液 +缓冲液 +碘液 +回滴+碱 +酸 +缓冲液 +碘液 +回滴
V对空
V对
2,方法供试液 +缓冲液 +碘液 +回滴
+碱 +酸 +缓冲液 +碘液 +回滴
空白试验
A,消除样品已降解产物的干扰
B,消除样品中其他消耗碘的杂质的干扰
C,消除碘挥发造成的误差以未经水解的样品作空白测定空白 样品
I2
Na2S2O3
I-
I2
采用标准品平行对照测定
A,可消除温度,pH、操作、环境等条件的影响
B,使本法测定结果与微生物检定法一致
3,条件
（ 1） 弱酸性 pH4.5
碱 ↑ I2 → IO3- + I-
酸 ↑ 普鲁卡因与碘在酸性条件下会产生复盐沉淀
（ 2） 温度 24～ 26℃
温度 ＞ 38 ℃
未水解的供试品亦消耗碘
（ 3） 水解时间以水解 20分钟后的 耗碘量最大
（ 4） 反应时间反应 20分钟后,耗碘量随时间的变化较小，可减小含量测定的误差。
4,特点
（ 1） 灵敏度高样品,碘 = 1,8
（ 2） 反应条件、实验操作要求高
V对,V对空
V样,V样空
1份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同
4I2→8I-
5,计算原料
%
W
W
VV
VV
对照品
）（
）（
含量％＝
样对对对空样样空
-
-
相 当 于 标 示 量 % =
S 0 - S
R 0 - R × × × ×
C × U
W × U 0 D 平 均 装 量 1 0 0 %
制剂电位配位滴定法（汞量法）（ 二 ）
1,原理
SHROH -
-
青霉素族 （ 水解 ）
HgRS?）（
青霉素族ChP
+?Hg.pH
2,方法
总样V
NOHgH N ON a O H醋酸盐缓冲液
pH4.6
滴定水解
(降 )空醋酸盐缓冲液 V(NO3)2Hg
pH4.6 滴定样品以未经水解的样品作空白测定
3,讨论
（ 1） 水解必须完全
（ 2） 汞盐滴定液用 EDTA标定
（ 3） 空白试验 消除已降解产物干扰
（ 4） 优点 不需标准品
%
W
FTV
%
W
FTV
%
-
空空样样含量
4,计算
%FT
W
V
W
V
%-? ）（含量空空样样可见 -紫外分光光度法（ 三 ）
1,酸水解 --铜盐法稳定剂
nm
CupH A
+?
青霉烯酸青霉素族 （水解）
C H 2 C
O
C
O
N
H
H
C
C H 3
C H 3
C C O O H
CCN
H
S H
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
pH
ACu
+?
2,硫醇汞盐法
（ 1） 原理青霉烯酸硫醇汞盐青霉素族 HgCl2（ 咪唑 ）
nmm a x ～
H g C l
C H 3
C H 3
C O O N a
S
N H
C
O
N
C H 2
N H
C O C H 3
N
S
O
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H
C O C H 3
H g C l
咪唑
nmm a x ～
（ 2） 方法 对照品法
%
W
W
A
A
% 对照品样标标样
计算标样咪唑硼酸缓冲液标准液供试液
A
AH g C l
- 2pH 9
（ 3） 注意侧链有 -NH2时，需加醋酐先将其乙酰化后才能发生上述反应
N
S
O
H N
C O O
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2 N a
N
S
O
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H
C O C H 3
OCHCHpH9
3,羟肟酸比色法
Fe3+/3H+
红色
NaOH
HClNOH·H2-? 内酰胺类羟肟酸衍生物
HPLC法（ 四 ） ChP
内标法＋校正因子外标法特点快速、高效、灵敏专属性强、重现性好一法多用（鉴别、检查、含测）
返 回第三节 氨基糖苷类抗生素苷苷元糖 缩合+
氨基糖苷苷元氨基糖 缩合+
链霉素 双氢链霉素新霉素 卡那霉素庆大霉素 巴龙霉素链霉素链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基 -L-葡萄糖胺苷元 糖链霉双糖胺
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
链霉胍 链霉糖 N-甲基 -L-
葡萄糖胺
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
链霉胍 链霉糖 N-甲基 -L-
葡萄糖胺巴龙霉素
D-葡萄糖胺 +脱氧链霉胺 +D-核糖 +巴龙霉糖巴龙胺苷元巴龙二糖胺糖
D-葡萄糖胺脱氧链霉胺
D-核糖巴龙霉糖
O
O
O
OH O
C H
2
O H
H O
N H
2
H O
O
O H
N H
2
N H
2
O
H O O H
R
2
N H
2
C H
2
O H
*
*
*
*
R
1
庆大霉素糖 苷元绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 + 加洛糖胺糖
R
O
C R 1R 2 HN
N H
2
O
O H
H
2
N
N H
2
O
O
O H N H C H
3
O H
C H
3
绛红糖胺紫素胺
2-脱氧链霉胺 加洛糖胺
N-甲基 -3-
去氧 -4-甲基戊糖胺
R
O
C R 1R 2 HN
N H
2
O
O H
H
2
N
N H
2
O
O
O H N H C H
3
O H
C H
3
绛红糖胺紫素胺
2-脱氧链霉胺 加洛糖胺
N-甲基 -3-
去氧 -4-甲基戊糖胺庆大霉素 C复合物庆大霉素 C1 R=H R1,R2=CH3
庆大霉素 C2 R=R2=H R1=CH3
庆大霉素 C1a R,R1,R2=H
庆大霉素 C2a R=CH3 R1= R2=H
庆大霉素 C2b R=R1=H R2=CH3
一,结构与性质多与硫酸成盐链霉素 3个庆大霉素 5个碱性中心碱性（一）
水溶性溶解性（二）
链霉素 pH5～ 7.5
庆大霉素 pH2～ 12 稳定稳定性（ 四 ）
UV（ 三 ）
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
坂口反应 N-甲基葡萄糖胺反应麦芽酚反应二,鉴别茚三酮反应（ 一 ）
蓝紫色庆大霉素链霉素 茚三酮
△
羟基胺结构
Molisch 试验（ 二 ）
氨基糖苷类 H+ 糠醛羟甲基糠醛
-萘酚蒽酮呈色
O
H O H 2 C C H O
O
H O H
2
C C H
O H
O H
O H
红紫色
N-甲基葡萄糖胺反应（ 三 ）
甲基葡萄糖胺巴龙霉素链霉素 水解
-N
乙酰丙酮 OH-
吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛 H+
红色
（ Elson-Morgan反应 ）
庆大霉素
N H
C H 3
N H
N H
N H C N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O H
N
C H 3
C O C H 3
H
H O C H 2 C H O H 3
(缩合 ) 323 COCHCOCHCH -OH
H
H
H
3
C
H 3 C
C HN
N
C O C H
3
C H 3
C O C H
3
C H
3
N
红色对二甲氨基苯甲醛H+
N
C H 3
C O C H 3
H
H O C H 2 C H O H 3
麦芽酚反应（ 四 ） 链霉素特征反应链霉糖链霉素
-OH
麦芽酚紫红色
+3FeH+
分子重排
N H C N H
2
H O
O H
O HN HCH
2
N
O
O
C H
3
O H
C H O
O
O
C H
2
O H
O H
O H
N H
N H
N H
C H
3
H
2
O N a O H
O
O
O H
C H
3
O
O
C H
3
F e
3 +
H
+
O
F e 3
3 +
/
紫红麦芽酚链霉胍特有反应橙红羟基喹啉链霉胍链霉素 次溴酸钠
-
-
8
OH
（ 或 α-萘酚 ）
N
O H
8-羟基喹啉坂口反应（ 五 ）
α -萘酚
O H
O
N
B r
R N H C O N H
（ 六 ） -24SO 反应白
-?
+?
B a S OSO BaH+
UV法（ 七 ）
庆大霉素无 UV吸收
nmmax链霉素
（八）色谱法
（ 1） TLC法：硫酸庆大霉素的鉴别点样：供试液：展开、凉干、碘蒸气中显色对照液判断：供试液与对照液所显斑点的颜色与位臵应一致。
点样：供试液对照液①：硫酸链霉素标准品对照液②：硫酸链霉素标准品 + 硫酸新霉素标准品 + 硫酸卡那霉素标准品判定法：供试液中主斑点的位臵、颜色、大小应与对照液① 相同，
对照液②应显示分离清晰的 3个斑点否则试验无效。
（ 2） HPLC法：硫酸庆大霉素的鉴别比较供试液与对照液各组分的保留时间。
三,特殊杂质检查链霉素杂质（一）
链霉素 B（甘露糖链霉素）
2,方法 TLC中的对照品法（ BP）
1,来源 反应中间体对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同工艺差别
C组分比例不一致规定控制各组分的相对百分含量
ChP
USP
BP
JP
庆大霉素 C组分的测定（ 二 ）
++
.pH吲哚衍生物巯基醋酸邻苯二醛氨基
λmax = 330nm
衍生化原理1.
1-烷基硫代 -2-烷基异吲哚衍生物
R N H
2
+
+ H S C H
2
C O O H
O H
-
C H O
C H O
N R
S C H
2
C O O H
RP－ HPLC方法2.
规定 C1 25~50%
C1a 15~40%
C2a +C2 20~50%
计算3.
%
AAAA
A
%A
CCCC
i
i
aa
+++
峰面积归一化法四,含量测定微生物检定法 各国药典主要采用
HPLC法 常用于体内药分返 回
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
第四节 四环素类抗生素
ABCD
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
1 2
3456
78
9 10 11 12
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
四环素 （ TC） tetracycline
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
C l
金霉素 (CTC) chlortetracycline
氯四环素
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
O H
土霉素 (OTC) oxytetracycline
氧四环素
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
O H
多西环素 (DOXC) doxycycline
脱氧土霉素美他环素 （ METC） metacycline
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
N C H 3 2
O HC H
2
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
一,结构与性质两性（一）
1,与酸、碱均能成盐
2,强酸或强碱中溶解度 ↑
酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性二甲胺基 弱碱性与金属离子生成有色配位化合物
Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+
UV和荧光性质（ 三 ）
与金属离子络合（ 四 ）
pH3 ~ 7.5 荧光
（二） 旋光性
H O
H O
C a
O
O
O
O H
O H
O
O
不稳定性（五）
1,差向异构化差向金霉素差向四环素金霉素四环素 ～
-?
-2pH
淡黄 →黑蓝色荧光
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H
C H 3
2 N
H O
差向四环素
2C H 3N
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
H O
（ 土霉素、多西环素不易差向异构化 ）
2,降解反应
（ 1） 酸性下降解 λmax = 445nm
λmax = 435nm橙黄色脱水金霉素脱水四环素金霉素四环素 ＜?pH
2C H 3N
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
N C H 3 2
H
O H
C O N H 2
O
O H
OO H
C H 3
O H
脱水四环素
2C H 3NH
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
p H 2 6
～
p H 2 6
～
TC
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H
C H 3 2 N
H O
ETC
N C H 3 2
H
O H
C O N H 2
O
O H
OO H
C H 3
O H
ATC
N2C H 3
O H
C O N H 2
O
O H
O
H
O H O
C H 3
H
EATC
p H 2
＜
p H 2
＜
（ 2） 碱性下降解异四环素四环素
-OH
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
O
N C H 3 2
二,鉴别试验浓 H2SO4反应（ 一 ）
黄色朱红色绿蓝深紫色盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸四环素
SOH
盐酸美他环素 橙红色
FeCl3反应（ 二 ）
褐色橙褐色深褐色红棕色盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸四环素
FeCl
TLC法（ 三 ） 盐酸土霉素的鉴别
HPLC法（ 五 ）
EDTA 克服痕量金属造成的拖尾现象比较保留时间三,特殊杂质检查
· 4-差向四环素（ ETC）
· 脱水四环素 （ ATC）
· 差向脱水四环素 （ EATC）
· 盐酸金霉素 （ CTC）
有关物质（ 一 ）
HPLC法（ 2000版）
盐酸四环素四环素有关物质 TLC图
I,供试液 ( 5 mg/ml)
II,ETC
( 0.2 mg/ml)
III,ATC
( 0.025 mg/ml)
IV,EATC
( 0.025 mg/ml)
V,CTC
( 0.1 mg/ml)
VI,混合液
4％
0.5％
0.5％
2％
吸收度（二）
nm
max
8
、
盐酸四环素杂质吸收度取供试品配成每毫升 10mg/ml的溶液至 4cm的吸收池中,在 530nm处测定,其吸收度不得超过 0.12。
应严格控制温度和时间四,含量测定 HPLC法盐酸四环素的测定系统适用性试验：盐酸四环素、有关物质及 ATC峰间的分离度 均应符合要求。
定量方法：外标法以峰面积计 。
返 回第五节 抗生素类药物中高分子杂质的检查
1.高分子杂质分子量大于药物本身的杂质总称。
蛋白、多肽、多糖或抗生素与蛋白、多肽、多糖的结合物。主要来自于发酵工艺，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。
药物的自身聚合物，来自于生产、贮存过程。可引发过敏。
外源性杂质内源性杂质
3.高分子杂质的质控方法
（ 1）凝胶色谱法测定高分子杂质：使高分子杂质与药物分离。
（ 2）高分子杂质的控制方法 ---自身对照外标法原理,测定在 Kav=0处 药物缔合物的峰响应指标样品中高分子杂质的响应指标按外标法计算，得样品中高分子杂质相当于药物本身的相对含量。
（ 3）高分子杂质的分析方法简单测定系统：葡聚糖凝胶 G-10（ 40～
120μm ）柱,
HPLC系统,葡聚糖凝胶 G-10柱,
返 回练习与思考
[A型题 ]
1,硫酸链霉素,硫酸青大霉素的鉴别方法是
A.三氯化铁反应 B,硫色素反应
C,茚三酮反应
D.与碱性酒石酸铜试液反应
E,双缩脲反应
2,青霉素钠,中国药典,规定的含量测定方法为
A.非水溶液滴定法
B.旋光法
C.HPLC法
D.紫外分光法
E.汞量法
[B型题 ]
A。 焰色反应
B,硫色素反应
C.硝酸反应
D,三氯化锑反应
E,麦芽酚和坂口反应反应
1.青霉素钠
2,硫酸链霉素
3,维生素 B1
4,维生素 A
A
E
B
D
[X型题 ]
1,用汞量法测定的药物有
A。 青霉素钠
B,青霉素 V钾
C,维生素 C
D,青霉素 V钾片
E,维生素 C注射液
2,可用微生物法测定含量的药物有
A,硫酸链霉素
B,硫酸青大霉素
C,罗红霉素
D,青霉素钠
E,青霉素 V钾返 回
二,掌握抗生素类药物的鉴别原理与方法 。
三,掌握抗生素类药物法定含量测定方法的原理,测定方法与计算 。
四,熟悉抗生素类药物杂质检查的方法 。
五,了解抗生素类药物中高分子聚合物检查 。
返 回第一节 概述
1,抗生素药物的特点化学纯度较低活性组分易发生变异稳定性差
2,微生物学法与理化法的比较微生物检定法 理化法以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标衡量抗生素的生物效价根据抗生素结构特点，利用其特有的理化性质测定其含量已知或新发现的抗生素、精致品或粗制品均能测定测定化学结构已知、已提纯的抗生素灵敏度高、样品需用量小、反映抗生素的医疗价值，但操作步骤多、
费时,误差大迅速、准确、专属性高、样品需用量小、操作简单、省时
3.抗生素的活性以效价单位来表示：
每 ml或每 mg中含有某种抗生素的有效成分的多少，用单位（ u）或 μg 表示。
1mg青霉素 G钠盐定为 1667单位
1mg青霉素 G钾盐的单位（ u）
=1667× 356.4/372.5=1595u/mg
分类 （按结构与性质）：
β –内酰胺类、氨基糖苷类、
四环素类、大环内酯类、
氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类林可霉素类、其他抗生素类返 回第二节 β –内酰胺类抗生素青霉素类
N
S CH3
CH3
COOHO
HN 1 2
34
56
7
RCO
母核（ 6-氨基青霉烷酸）
A B
头孢菌素类
7 6
5
4
3
2
1
N
O
N H
S
C H
2
R
1
C O O H
母核（7- 氨基头孢菌烷酸）
R C O
A B
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
青霉素
（青霉素钾、钠）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
氨苄西林
（氨苄青霉素）
阿莫西林
（羟氨苄青霉素）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
H O C H 2
C 2 H 5
2
N C H 2 C H 2 O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2
普鲁卡因青霉素头孢氨苄
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
OC
N H 2
C H 2
头孢拉啶
C H 2
N H 2
C O
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
头孢羟氨苄
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
OC
N H 2
C H 2H O
头孢噻吩钠
S
C H 2 C O
N
O
N H
S
C H 2 O C O C H 3
C O O N a
N
S
O
H N
C O O K
C H 3
C H 3
OCC H 2
酸性结构特点与性质一、
Na
与碱金属 (Na+,K+)成盐
（一）羧基易溶于水与有机碱 (普鲁卡因 )成盐 难溶于水普鲁卡因 青霉素
C 2 H 5
2
N C H 2 C H 2 O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2
N
S
O
1
2
3
4
56
7
（二） 手性 C
8
7 6
5
4
3
2
1
N
O
S
头孢菌素类 C6 C7
青霉素类 C3 C5 C6
旋光性
﹡ ﹡
﹡
﹡ ﹡
（三）共轭体系
N
S
O
头孢菌素类 母核有共轭体系青霉素类 母核无明显 UV
多数有苯环取代基
N
O
S
UV
（四） β–内酰胺环水溶液 不稳定干燥纯净 稳定不稳定性因素四元环张力大酰胺键易水解青霉素类某些氧化剂酸、碱、青霉素酶
（某些金属离子）
（温度）
降解失效例 青霉素的降解反应青霉素青霉噻唑酸H2O/OHˉ
青霉素酶青霉酸H2OpH2 100℃
α–青霉噻唑酰基羟胺酸
NH2OH
青霉烯酸pH4
青霉胺
CO2
青霉醛
HgCl2
头孢菌素类 酸、碱、胺类?-内酰胺酶 降解失效
（一）呈色反应
1,羟肟酸铁反应 β-内酰胺类呈色羟肟酸衍生物
Fe3+/3
H+
鉴别试验二、
NaOH
HClNOHH-? 内酰胺类
N
S
O
N
S
CO H
N H O H
H 2 N O H H C l
N
S
C H
N H
O
F e
3 +
3
O
H+Fe3+/3
（红、棕、褐）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
2,茚三酮 反应 α -氨基
-氨基 茚三酮
蓝紫色
3,双缩脲反应
-- CO NH
似肽键
（开环分解）?- 内酰胺类碱性酒石酸铜 紫
4,与重氮苯磺酸反应橙黄色重氮苯磺酸-- OHHC （偶合）
酚羟基头孢哌酮
5,与变色酸 -硫酸反应活泼,-CH2-”
青霉素阿莫西林氨苄西林
H C H OCH SOH--,羰基侧链含,△ （ 分解 ）
变色酸显色
1,K+,Na+的火焰反应
（二）各种盐的反应焰色 →鲜黄色
+ 醋酸氧铀锌 →↓黄Na
+
焰色 →紫色
+ 0.1%四苯硼钠 + Ac→↓白K
+
2,沉淀反应（青霉素盐）
遇酸 →↓
在过量 HCl或有机溶剂中溶解白青霉素青霉素钠青霉素钾 緘 +H
3,重氮化 - 偶合反应青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素 +
+H
重氮化 -偶合反应红?
芳伯氨基
4,与三硝基苯酚反应
三硝基苯酚二苄基乙二胺苄星青霉素
N a O H
△
二苄基乙二胺
mp
三硝基苯酚
H
2
O
H
O H
-
H
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H
3
C H
3
C H
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
O H
N O
2
O
2
N N O
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
光谱法（三）
1,UV法 样品、分解产物
nm339
H A + 苯唑青霉烯酸苯唑青霉素 Cu2+
A,Em in,m ax,,%1 cm1光谱图头孢氨苄 λmax = 262nm
青霉素 V钠
A280nm/A264nm = 1.30～ 1.50
N
O
C O N H
C H 3
N
O
S
C H 3
C H 3
C O O N a
N
O
C H
C H 3
O
C O
CN
H N
C H H C
C H 3
C H 3
S H
C H C O O H
pH3.8
分子重排
2,IR法
3180cm-1
N-H β–内酰胺
C=O
1780cm-1
3470cm-1
O-H 1690cm-1
仲酰胺?C=O
1250cm-1
C-O
以阿莫西林为例色谱法（四）
1,TLC法对照品对照法和斑点颜色比较供试品对照品 相同条件
fR
2,HPLC法
Rt比较供试品对照品 相同条件
三、杂质检查药物 检查项目 检查方法头孢他啶 聚合物 HPLC法头孢曲松钠头孢哌酮钠头孢噻肟钠头孢呋辛酯 有关物质和异构体 HPLC法头孢氨苄 有关物质 反相 TLC法青霉素钾（钠） 吸收度 紫外分光光度法
1.头孢他啶聚合物的测定固定相：葡聚糖凝胶 G-10（ 40~120μm ）
流动相 A,3.5%硫酸铵的 0.01mol/L磷酸盐缓冲液流动相 B,0.01%十二烷基硫酸钠对照品溶液：头孢他啶对照品 100μg/ml
1）系统适用性试验：理论塔板数和拖尾因子用 1mg/ml蓝色葡聚糖 2000、流动相 A测定；重复性用对照品溶液、流动相 B测定。 N不低于
900，拖尾因子 0.75~1.5，峰面积的 RSD应小于
5.0%。
2）测定方法进样供试液，用流动相 A；进样对照液，
用流动相 B。以外标法计算，含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得超过 0.3%。
2.头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查固定相,ODS
流动相,0.2mol/L磷酸二氢铵 -甲醇（ 62:38）
1）头孢呋辛酯 Δ 2-异构体的制备：头孢呋辛酯对照品 +流动相 头孢呋辛酯 Δ 2-异构体。
2）系统适用性试验：各异构体之间的 R>1.5，以头孢呋辛酯 A异构体计算 n>1500。
3）异构体,t‘R1
相对保留时间 r12=----- 1----被测物
t’R2 2----标准物异构体 相对保留时间 判断
B异构体 0.85 供试液谱图中 A异构体的峰面积
A异构体 1.0 与 A,B异构体峰面积和之比应为 0.48~0.55。
3.头孢氨苄中有关物质的检查 ---反相 TLC法固定相：活化后的硅胶 G板臵 5%（ V/V）正十四烷的正己烷溶液中，展至顶部，凉干展开剂,0.1mol/L枸橼酸 -0.2mol/L磷酸氢二钠 -丙酮（ 120,80,3）
供试液：本品 50mg/ml
对照液（ 1）：本品 0.5 mg/ml
对照液（ 2）,α -苯甘氨酸 0.5 mg/ml
对照液（ 3）,7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸
0.5 mg/ml
结果判断,供试液如显杂质斑点，与对照液（ 2）（ 3）位臵相同上所的斑点比较，其颜色不得更深；如显其他杂质斑点，与对照液（ 1）所显的主斑点比较，
其颜色不得更深。
4.青霉素钠（钾）的吸收度检查：
供试液 1.80mg/ml，
结果判断,A280不得大于 0.10
-8II
+H
碘量法（ 一 ）
1,原理水解产物
OSNaNa IOSNaI ＋＋
定量过量剩余
ChP
四、含量测定
（ 水解 ）
NaOH
头孢菌素族青霉素族反应分两步进行：
1,水解反应 (按化学计算量进行 )
2,氧化 -还原反应 (无固定的量关系,受温度,PH值和时间等因素影响,应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定 )
N
S
C H 3
C H 3
C O O HO
H NR C O
R C O
H
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
S
N
COON a
I24 + 5 H 2 O + 2 H C l
N a O H
C
C H 3
C H 3 S O
3 H
C H
N H 2
C O O HC H
N H C O R
C O O H 2
+2 N a C l
+
+
8HI
第一步第二步
V样空
V样对照液 +缓冲液 +碘液 +回滴+碱 +酸 +缓冲液 +碘液 +回滴
V对空
V对
2,方法供试液 +缓冲液 +碘液 +回滴
+碱 +酸 +缓冲液 +碘液 +回滴
空白试验
A,消除样品已降解产物的干扰
B,消除样品中其他消耗碘的杂质的干扰
C,消除碘挥发造成的误差以未经水解的样品作空白测定空白 样品
I2
Na2S2O3
I-
I2
采用标准品平行对照测定
A,可消除温度,pH、操作、环境等条件的影响
B,使本法测定结果与微生物检定法一致
3,条件
（ 1） 弱酸性 pH4.5
碱 ↑ I2 → IO3- + I-
酸 ↑ 普鲁卡因与碘在酸性条件下会产生复盐沉淀
（ 2） 温度 24～ 26℃
温度 ＞ 38 ℃
未水解的供试品亦消耗碘
（ 3） 水解时间以水解 20分钟后的 耗碘量最大
（ 4） 反应时间反应 20分钟后,耗碘量随时间的变化较小，可减小含量测定的误差。
4,特点
（ 1） 灵敏度高样品,碘 = 1,8
（ 2） 反应条件、实验操作要求高
V对,V对空
V样,V样空
1份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同
4I2→8I-
5,计算原料
%
W
W
VV
VV
对照品
）（
）（
含量％＝
样对对对空样样空
-
-
相 当 于 标 示 量 % =
S 0 - S
R 0 - R × × × ×
C × U
W × U 0 D 平 均 装 量 1 0 0 %
制剂电位配位滴定法（汞量法）（ 二 ）
1,原理
SHROH -
-
青霉素族 （ 水解 ）
HgRS?）（
青霉素族ChP
+?Hg.pH
2,方法
总样V
NOHgH N ON a O H醋酸盐缓冲液
pH4.6
滴定水解
(降 )空醋酸盐缓冲液 V(NO3)2Hg
pH4.6 滴定样品以未经水解的样品作空白测定
3,讨论
（ 1） 水解必须完全
（ 2） 汞盐滴定液用 EDTA标定
（ 3） 空白试验 消除已降解产物干扰
（ 4） 优点 不需标准品
%
W
FTV
%
W
FTV
%
-
空空样样含量
4,计算
%FT
W
V
W
V
%-? ）（含量空空样样可见 -紫外分光光度法（ 三 ）
1,酸水解 --铜盐法稳定剂
nm
CupH A
+?
青霉烯酸青霉素族 （水解）
C H 2 C
O
C
O
N
H
H
C
C H 3
C H 3
C C O O H
CCN
H
S H
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
pH
ACu
+?
2,硫醇汞盐法
（ 1） 原理青霉烯酸硫醇汞盐青霉素族 HgCl2（ 咪唑 ）
nmm a x ～
H g C l
C H 3
C H 3
C O O N a
S
N H
C
O
N
C H 2
N H
C O C H 3
N
S
O
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H
C O C H 3
H g C l
咪唑
nmm a x ～
（ 2） 方法 对照品法
%
W
W
A
A
% 对照品样标标样
计算标样咪唑硼酸缓冲液标准液供试液
A
AH g C l
- 2pH 9
（ 3） 注意侧链有 -NH2时，需加醋酐先将其乙酰化后才能发生上述反应
N
S
O
H N
C O O
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2 N a
N
S
O
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H
C O C H 3
OCHCHpH9
3,羟肟酸比色法
Fe3+/3H+
红色
NaOH
HClNOH·H2-? 内酰胺类羟肟酸衍生物
HPLC法（ 四 ） ChP
内标法＋校正因子外标法特点快速、高效、灵敏专属性强、重现性好一法多用（鉴别、检查、含测）
返 回第三节 氨基糖苷类抗生素苷苷元糖 缩合+
氨基糖苷苷元氨基糖 缩合+
链霉素 双氢链霉素新霉素 卡那霉素庆大霉素 巴龙霉素链霉素链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基 -L-葡萄糖胺苷元 糖链霉双糖胺
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
链霉胍 链霉糖 N-甲基 -L-
葡萄糖胺
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
链霉胍 链霉糖 N-甲基 -L-
葡萄糖胺巴龙霉素
D-葡萄糖胺 +脱氧链霉胺 +D-核糖 +巴龙霉糖巴龙胺苷元巴龙二糖胺糖
D-葡萄糖胺脱氧链霉胺
D-核糖巴龙霉糖
O
O
O
OH O
C H
2
O H
H O
N H
2
H O
O
O H
N H
2
N H
2
O
H O O H
R
2
N H
2
C H
2
O H
*
*
*
*
R
1
庆大霉素糖 苷元绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 + 加洛糖胺糖
R
O
C R 1R 2 HN
N H
2
O
O H
H
2
N
N H
2
O
O
O H N H C H
3
O H
C H
3
绛红糖胺紫素胺
2-脱氧链霉胺 加洛糖胺
N-甲基 -3-
去氧 -4-甲基戊糖胺
R
O
C R 1R 2 HN
N H
2
O
O H
H
2
N
N H
2
O
O
O H N H C H
3
O H
C H
3
绛红糖胺紫素胺
2-脱氧链霉胺 加洛糖胺
N-甲基 -3-
去氧 -4-甲基戊糖胺庆大霉素 C复合物庆大霉素 C1 R=H R1,R2=CH3
庆大霉素 C2 R=R2=H R1=CH3
庆大霉素 C1a R,R1,R2=H
庆大霉素 C2a R=CH3 R1= R2=H
庆大霉素 C2b R=R1=H R2=CH3
一,结构与性质多与硫酸成盐链霉素 3个庆大霉素 5个碱性中心碱性（一）
水溶性溶解性（二）
链霉素 pH5～ 7.5
庆大霉素 pH2～ 12 稳定稳定性（ 四 ）
UV（ 三 ）
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
坂口反应 N-甲基葡萄糖胺反应麦芽酚反应二,鉴别茚三酮反应（ 一 ）
蓝紫色庆大霉素链霉素 茚三酮
△
羟基胺结构
Molisch 试验（ 二 ）
氨基糖苷类 H+ 糠醛羟甲基糠醛
-萘酚蒽酮呈色
O
H O H 2 C C H O
O
H O H
2
C C H
O H
O H
O H
红紫色
N-甲基葡萄糖胺反应（ 三 ）
甲基葡萄糖胺巴龙霉素链霉素 水解
-N
乙酰丙酮 OH-
吡咯衍生物对二甲氨基苯甲醛 H+
红色
（ Elson-Morgan反应 ）
庆大霉素
N H
C H 3
N H
N H
N H C N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O H
N
C H 3
C O C H 3
H
H O C H 2 C H O H 3
(缩合 ) 323 COCHCOCHCH -OH
H
H
H
3
C
H 3 C
C HN
N
C O C H
3
C H 3
C O C H
3
C H
3
N
红色对二甲氨基苯甲醛H+
N
C H 3
C O C H 3
H
H O C H 2 C H O H 3
麦芽酚反应（ 四 ） 链霉素特征反应链霉糖链霉素
-OH
麦芽酚紫红色
+3FeH+
分子重排
N H C N H
2
H O
O H
O HN HCH
2
N
O
O
C H
3
O H
C H O
O
O
C H
2
O H
O H
O H
N H
N H
N H
C H
3
H
2
O N a O H
O
O
O H
C H
3
O
O
C H
3
F e
3 +
H
+
O
F e 3
3 +
/
紫红麦芽酚链霉胍特有反应橙红羟基喹啉链霉胍链霉素 次溴酸钠
-
-
8
OH
（ 或 α-萘酚 ）
N
O H
8-羟基喹啉坂口反应（ 五 ）
α -萘酚
O H
O
N
B r
R N H C O N H
（ 六 ） -24SO 反应白
-?
+?
B a S OSO BaH+
UV法（ 七 ）
庆大霉素无 UV吸收
nmmax链霉素
（八）色谱法
（ 1） TLC法：硫酸庆大霉素的鉴别点样：供试液：展开、凉干、碘蒸气中显色对照液判断：供试液与对照液所显斑点的颜色与位臵应一致。
点样：供试液对照液①：硫酸链霉素标准品对照液②：硫酸链霉素标准品 + 硫酸新霉素标准品 + 硫酸卡那霉素标准品判定法：供试液中主斑点的位臵、颜色、大小应与对照液① 相同，
对照液②应显示分离清晰的 3个斑点否则试验无效。
（ 2） HPLC法：硫酸庆大霉素的鉴别比较供试液与对照液各组分的保留时间。
三,特殊杂质检查链霉素杂质（一）
链霉素 B（甘露糖链霉素）
2,方法 TLC中的对照品法（ BP）
1,来源 反应中间体对微生物的活性无明显差异毒副作用和耐药性不同发酵菌种不同工艺差别
C组分比例不一致规定控制各组分的相对百分含量
ChP
USP
BP
JP
庆大霉素 C组分的测定（ 二 ）
++
.pH吲哚衍生物巯基醋酸邻苯二醛氨基
λmax = 330nm
衍生化原理1.
1-烷基硫代 -2-烷基异吲哚衍生物
R N H
2
+
+ H S C H
2
C O O H
O H
-
C H O
C H O
N R
S C H
2
C O O H
RP－ HPLC方法2.
规定 C1 25~50%
C1a 15~40%
C2a +C2 20~50%
计算3.
%
AAAA
A
%A
CCCC
i
i
aa
+++
峰面积归一化法四,含量测定微生物检定法 各国药典主要采用
HPLC法 常用于体内药分返 回
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
第四节 四环素类抗生素
ABCD
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
1 2
3456
78
9 10 11 12
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
四环素 （ TC） tetracycline
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
C l
金霉素 (CTC) chlortetracycline
氯四环素
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
O H
土霉素 (OTC) oxytetracycline
氧四环素
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
O H
多西环素 (DOXC) doxycycline
脱氧土霉素美他环素 （ METC） metacycline
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
N C H 3 2
O HC H
2
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
一,结构与性质两性（一）
1,与酸、碱均能成盐
2,强酸或强碱中溶解度 ↑
酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性二甲胺基 弱碱性与金属离子生成有色配位化合物
Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+
UV和荧光性质（ 三 ）
与金属离子络合（ 四 ）
pH3 ~ 7.5 荧光
（二） 旋光性
H O
H O
C a
O
O
O
O H
O H
O
O
不稳定性（五）
1,差向异构化差向金霉素差向四环素金霉素四环素 ～
-?
-2pH
淡黄 →黑蓝色荧光
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H
C H 3
2 N
H O
差向四环素
2C H 3N
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
H O
（ 土霉素、多西环素不易差向异构化 ）
2,降解反应
（ 1） 酸性下降解 λmax = 445nm
λmax = 435nm橙黄色脱水金霉素脱水四环素金霉素四环素 ＜?pH
2C H 3N
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
N C H 3 2
H
O H
C O N H 2
O
O H
OO H
C H 3
O H
脱水四环素
2C H 3NH
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
p H 2 6
～
p H 2 6
～
TC
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H
C H 3 2 N
H O
ETC
N C H 3 2
H
O H
C O N H 2
O
O H
OO H
C H 3
O H
ATC
N2C H 3
O H
C O N H 2
O
O H
O
H
O H O
C H 3
H
EATC
p H 2
＜
p H 2
＜
（ 2） 碱性下降解异四环素四环素
-OH
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
O
N C H 3 2
二,鉴别试验浓 H2SO4反应（ 一 ）
黄色朱红色绿蓝深紫色盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸四环素
SOH
盐酸美他环素 橙红色
FeCl3反应（ 二 ）
褐色橙褐色深褐色红棕色盐酸多西环素盐酸土霉素盐酸金霉素盐酸四环素
FeCl
TLC法（ 三 ） 盐酸土霉素的鉴别
HPLC法（ 五 ）
EDTA 克服痕量金属造成的拖尾现象比较保留时间三,特殊杂质检查
· 4-差向四环素（ ETC）
· 脱水四环素 （ ATC）
· 差向脱水四环素 （ EATC）
· 盐酸金霉素 （ CTC）
有关物质（ 一 ）
HPLC法（ 2000版）
盐酸四环素四环素有关物质 TLC图
I,供试液 ( 5 mg/ml)
II,ETC
( 0.2 mg/ml)
III,ATC
( 0.025 mg/ml)
IV,EATC
( 0.025 mg/ml)
V,CTC
( 0.1 mg/ml)
VI,混合液
4％
0.5％
0.5％
2％
吸收度（二）
nm
max
8
、
盐酸四环素杂质吸收度取供试品配成每毫升 10mg/ml的溶液至 4cm的吸收池中,在 530nm处测定,其吸收度不得超过 0.12。
应严格控制温度和时间四,含量测定 HPLC法盐酸四环素的测定系统适用性试验：盐酸四环素、有关物质及 ATC峰间的分离度 均应符合要求。
定量方法：外标法以峰面积计 。
返 回第五节 抗生素类药物中高分子杂质的检查
1.高分子杂质分子量大于药物本身的杂质总称。
蛋白、多肽、多糖或抗生素与蛋白、多肽、多糖的结合物。主要来自于发酵工艺，致敏，如青霉噻唑蛋白、青霉噻唑多肽。
药物的自身聚合物，来自于生产、贮存过程。可引发过敏。
外源性杂质内源性杂质
3.高分子杂质的质控方法
（ 1）凝胶色谱法测定高分子杂质：使高分子杂质与药物分离。
（ 2）高分子杂质的控制方法 ---自身对照外标法原理,测定在 Kav=0处 药物缔合物的峰响应指标样品中高分子杂质的响应指标按外标法计算，得样品中高分子杂质相当于药物本身的相对含量。
（ 3）高分子杂质的分析方法简单测定系统：葡聚糖凝胶 G-10（ 40～
120μm ）柱,
HPLC系统,葡聚糖凝胶 G-10柱,
返 回练习与思考
[A型题 ]
1,硫酸链霉素,硫酸青大霉素的鉴别方法是
A.三氯化铁反应 B,硫色素反应
C,茚三酮反应
D.与碱性酒石酸铜试液反应
E,双缩脲反应
2,青霉素钠,中国药典,规定的含量测定方法为
A.非水溶液滴定法
B.旋光法
C.HPLC法
D.紫外分光法
E.汞量法
[B型题 ]
A。 焰色反应
B,硫色素反应
C.硝酸反应
D,三氯化锑反应
E,麦芽酚和坂口反应反应
1.青霉素钠
2,硫酸链霉素
3,维生素 B1
4,维生素 A
A
E
B
D
[X型题 ]
1,用汞量法测定的药物有
A。 青霉素钠
B,青霉素 V钾
C,维生素 C
D,青霉素 V钾片
E,维生素 C注射液
2,可用微生物法测定含量的药物有
A,硫酸链霉素
B,硫酸青大霉素
C,罗红霉素
D,青霉素钠
E,青霉素 V钾返 回
