第七章 芳香胺类药物的分析第一节 芳胺类药物的分析第二节 苯乙胺类药物分析第三节 芳氧丙醇胺药物分析返回主目录基本要求练习与思考基本要求一,掌握芳胺类,苯乙胺类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法 。
二,熟悉芳氧丙醇胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法 。
三、了解氨基醚衍生物类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。
返 回第一节 芳 胺类药物的分析芳胺类药物分为两类芳伯氨基未被取代芳伯氨基被酰化一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质
(一)基本结构与典型药物
C
O
O R 2NR 1
H
C O O C 2 H 5H 2 N
苯佐卡因
H 2 N C O O C H 2 C H 2 N C 2 H 5 2,H C l
盐酸普鲁卡因
C O O C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2C H 3 ( C H 2 ) 3 N H H C l
盐酸丁卡因
C O N H C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2H 2 N H C l
盐酸普鲁卡因胺
1.芳伯氨基特性,重氮化-偶合反应;芳醛缩合成 Schiff碱;易氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。
(二 ) 主要理化性质
2,水解特性,分子结构中的酯键或酰胺键易水解,除盐酸丁卡因外水产物为对丁基苯甲酸外,上述均为对氨基苯甲酸。
3,弱碱性,除苯佐卡因外,其余均含有叔胺氮的侧链,故具有弱碱性。
4,其它特性,因结构中有 芳伯氨基或同时具有脂烃胺侧链,其游离碱多为碱型油状液体或低熔点固体,难溶于水,可溶于有机溶剂。其盐酸盐则易溶于水。
二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质
( 一)基本结构与典型药物
N H C R 2
O
R 1
R 3
R 4
H O N H C O C H 3
对乙酰氨基酚(扑热息痛)
S
O
O
N H C O C H 3C H 3 C O N H
醋氨苯砜
N H C O
N
C 4 H 9C H
3
C H 3
H C l
盐酸布比卡因
N H C O C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
C H 3 C H 3
H C l
盐酸利多卡因
1.水解后显芳伯氨基特性,分子结构中含有芳酰氨基,酸水解后显芳伯氨基的特性反应。
注意空间位阻的影响。
2.水解产物易酯化,对乙酰基酚和醋氨苯砜,酸水解生成醋酸,在硫酸中与乙醇反应,发出醋酸乙酯香味。
(二)主要化学性质
3.酚羟基特性,对乙酰基酚有游离酚羟基;醋氨苯砜酸水解有酚羟基,可与 FeCl3发生显色反应,
可相互区别。
4.弱碱性,利多卡因和布比卡因烃胺侧链有叔胺氮,显碱性,可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应,可相互区别。
5.与金属离子发生沉淀反应,利多卡因和布比卡因酰氨基上氮可与 Cu2+,Co2+生成有色配位化合物沉淀。
三、鉴别试验
(一)重氮化 -偶合反应分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物,均可发生此反应。
Ar-NH2 HClNaNO
2
重氮盐 OH-?-萘酚 橙黄 ~猩红色直接反应,苯佐卡因、盐酸普鲁卡因,盐酸普鲁卡因胺间接反应,对乙酰氨基酚、醋氨苯砜利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。
丁卡因虽无芳伯氨基,但可与 NaNO2反应生成 N- 亚硝基化合物的乳白色沉淀。
N H 2
C O O C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
O H
N H C O C H 3
[H2O]
Ar-NH2
NaNO 2+HCl
A r-N 2 + C l -
O H
OH-
O H
A r - N = N
猩 红 或 红 色
N H C 4 H 9
C O O C H 2 C H 2 ( C 2 H 5 ) 2
+ H N O 2
C 4 H 9 N - N O
C O O C H 2 C H 2 ( C 2 H 5 ) 2
+ H 2 O
乳 白 色
(二)与三氯化铁反应对乙酰氨基酚 + FeCl3 蓝紫色化合物
N H C O C H 3
O -
N H C O C H 3
O H
3 + F e C l
3
3
F e + 3 H C l
1,与铜和钴离子反应:
利多卡因与硫酸铜生成 蓝紫色 配位化合物;
与氯化钴生成 亮绿色 沉淀。
( 三)与金属离子反应
C H 3
C H 3
N H C O C H 2 N ( C 2 H 5 ) 22
+ Cu2+
C H 3
C H 3
N C O C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
C H 3
C H 3
( C 2 H 5 ) 2 N C H 2 C O N
C u
蓝 紫 色
+Co2+
C H 3
C H 3
N C O C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
C H 3
C H 3
( C 2 H 5 ) 2 N C H 2 C O N
C o
亮 绿 色
2,羟肟酸铁盐反应 基于普鲁卡因胺分子中的芳酰胺结构。N H 2
C O N H C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
N H 2
C O N ( O H ) C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
N H 2
C O N ( O H ) C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
3
F e
H 2 O 2 F e C l
3
紫 红,暗 棕 色,棕 黑 色
3,与汞离子反应盐酸利多卡因 + H2NO3 + Hg(NO3)2 黄色对氨基苯甲酸酯 + H2NO3 + Hg(NO3)2
红色 或 橙黄色
1,盐酸普鲁卡因的鉴别
(四 ) 水解产物反应盐酸普鲁卡因 + NaOH 普鲁卡因
油状物? 对氨基苯甲酸钠 + 二乙氨基乙醇
(使湿润的红色石蕊试纸变兰色)
对氨基苯甲酸钠 + HCl 对氨基苯甲酸(白色)
N H
2
C O O C H
2
C H
2
N ( C
2
H
5
)
2
,H C l
N H
2
C O N ( O H ) C H
2
C H
2
N ( C
2
H
5
)
2
N H
2
C O O N a
N a O H N a O H
+ H O C H
2
C H
2
N ( C
2
H
5
)
2
N H
2
C O O N a
N H
2
C O O H
N H
2
C O O H
H C l
H C l H C l
.
2,苯佐卡因的鉴别苯佐卡因 + NaOH? 乙醇乙醇 + I2 + NaOH CHI3( 碘仿臭气,黄色沉淀)
(五 ) 制备衍生物测熔点
1,三硝基苯酚衍生物的制备,利多卡因和布比卡因
N H C O C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
C H 3H 3 C
N O 2
N O 2
O 2 N
O H
.
熔 点 为 2 2 8 ℃ ~ 2 3 2 ℃
C H 3
N H C O
C H 3
N
C 4 H 9
N O 2
N O 2
O 2 N
O H
.
熔 点 为 1 9 4 ℃
2,硫氰酸盐衍生物的制备,盐酸丁卡因
C O O C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2,H C l
N H C 4 H 9
C O O C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2 H S C N.
N H 4 S C N
N H C 4 H 9
熔 点 为 1 3 1 ℃
(六 ) 紫外特征吸收光谱法
1,在 λmax 处测定供试液的百分吸收系数。
例如:对乙酰基酚在 0.4%NaOH中于 λmax =240nm;E1%1cm = 715
在 HCl(0.1nol/L)-甲醇于 λmax =249nm; E1%1cm = 880
2,在规定的浓度测定 λmax
例如:醋氨苯砜 5μg/ml; λmax =256nm; 284nm
再例如:盐酸普鲁卡因胺 5μg/ml; λmax = 280nm
(七 )红外吸收光谱法
(一)对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查
1.乙醇溶液的澄清度与颜色,因其生产工艺用铁粉作还原剂,可能带入,致使乙醇溶液产生混浊,中间体对氨基酚易氧化产生有色化物,在乙醇溶液中显橙红色或棕色。
四、特殊杂质检查检查方法,配制 0.1g/ml本品乙醇溶液,溶液应澄清,无色;
如显混浊,与 1号浊度标 准液比较,不得更浓;
如显色,与棕红色 2号或橙红色 2号 标准液比较,
不得更深。
2,有关物质检查,Ch.P是以对氯苯乙酰胺为对照品,
采用 TLC法 中的杂质对照品法。
3,对氨基酚检查,利用对氨基酚在碱性条件下可与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物,采用比色法。
(二 )盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查为什么要检查?
H 2 N H 2 NC O O H - C O 2 O = = O
[ O ]
黄 色怎样检查?
采用 TLC法中的 杂质对照品法进行检查。
(一)亚硝酸钠滴定法
Ar-NH2; Ar-NHCOR; Ar-NO2均可采用此法
Ch.P中的苯佐卡因;盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因胺及其制剂可直接采用本法;醋氨苯砜及注射液水解后用本法。
五、含量测定
N H C O R + H 2 O N H 2 + R C O O HH
+
△
N O 2 + 6 [ H ] N H 2 + 2 H 2 O
1,原理,
Ar-NHCOR + H2O Ar-NH2 + RCOOHH
+
Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl Ar-N2+Cl- + NaCl + 2H2O
2,测定主要条件:
(1) 加 KBr增加反应速度重氮化的反应历程为:
NaNO2 + HCl HNO2 + NaCl
HNO2 + HCl NOCl + H2O KHCl
N N
+
C l
-
快
N N O H
快
N N O
H
慢
N O
+
C l
-
N H
2
KBr + HCl HBr + KCl
HNO2 + HCl NOBr + H2O KKBr
∵ KHBr 比 KHCl大 300倍
∴ 生成 NOBr量大得多
∴ 加快反应速度
(2) 加过量 HCl加速反应:
① 重氮化速度加快;
② 重氮盐在酸性介质中稳定;
③ 防止生成氨基偶氮化合物。
Ar-N2+Cl- + H2N-Ar Ar-N=N-NH-Ar + HCl
一般摩尔比为 Ar-NH2,HCl = 1,2.5~6 。
(3) 室温条件下滴定,
温度高反应速度快;每升高 10℃ 加快 2.5倍太高,可使 Ar-N2+Cl- + H2O Ar-OH + N2 + HCl
(4) 滴定管尖端插入液面下滴定
3,指示终点的方法
(1) 用停滴定法 溶液 检流计终点前,无过量 无电流
HNO2
终点时,有过量 有电流(使指针偏离零
HNO2 永停在某一位置)
(2) 外指示剂法用 KI-淀粉指示剂指示终点的原理:
2NaO2 + 2KI + 4HCl 2NO + I2 + 2KCl + 2NaCl + 2H2O
GVV
R1 R2
+
(二)非水溶液滴定法基于盐酸丁卡因,盐酸利多卡因和盐酸布比卡因侧链叔胺氮在滴定盐酸丁卡因时,因其在冰醋酸中碱性弱,加醋酐可增加其碱性 。 因醋酐合乙酰氧离子比醋酸和质子的酸性强,可增加碱性 。
2(CH3CO)2O (CH3CO)3O+ + CH3COO-
相当于 [ B]HCl + Hg(Ac)2 [B]HAc + HgCl2
[B]HAc + HClO4 [B]HClO4 + HAc
1,对乙酰基酚原料的含量测定 在 0.4%NaOH介质中; 257nm
D%=[ E1%1cm]样 / [ E1%1cm]标 × 100% ; E1%1cm= 715
2,对乙酰基酚片溶出度测定 (测定条件同上)
1片+稀 HCl 24ml + H2O 1000ml 精密量 取 5ml
+ 0.4%NaOH10ml + H2O 100ml λ257nm测定 A。
W× 1/ 1000× 5/ 100× 100= C ( g/100ml)
W(g) = 200 × C; C = A/715
∴ 溶出度= W/ 标示量 × 100%> 80% 为合格
(三)分光光度法中性条件下的重氮化反应
(四)比色法盐酸普鲁卡因 +1,2-蒽醌 -4-磺酸钠 pH4-9
棕红色化合物,?max482nm处测定 A
(五)盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定
λex400nm( 激发波长),λem485nm( 发射波长)处测定荧光强度,标准曲线法定量。
盐酸普鲁卡因胺 + 荧胺 pH7.5 荧光物此法主要用于盐酸普鲁卡因注射液的测定。因该注射液中常含有降解产物对氨基苯甲酸;可以苯甲酸为内标同时测定两者的含量,该法简单准确。
色谱条件,色谱柱为 μBondapakC18 300mm× 4mm
流动相为甲醇- 1% HAc(40:60); UV检测器 250nm.
(六) HPLC法返 回第二节 苯乙胺类药物的分析一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质
(一)基本结构与典型药物
R 1 C H C H N H R 2
O H R 3
*
常见的苯乙胺类药物 H O
H O
C
O H
H
C H 2 N H C H 3
肾上腺素
H O
H O
C
O H
H
C H 2 N H 2
重酒石酸去甲肾上腺素
C
C
C O O H
C O O H
O HH
HH O
H O
C
H
O H
C H 2 N H C H 3 H C l
盐酸去氧肾上腺素
H O
C
H
O H
C H 2 N H C H ( C H 3 ) 2 H C lH O
盐酸异丙肾上腺素
(二) 主要化学性质
1.弱碱性 本类药物结构中有烃氨基侧链,为仲胺氮显弱碱性 。
2.酚羟基特性 本类药物结构中有酚羟基,可与
FeCl3;发生氧化 。
3.光学活性 多数药物结构中有手性碳原子,具有旋光性 。
二、鉴别试验
(一 )与三氯化铁反应
Ar-OH+ FeCl3 络合显色 + 碱液紫红色
。
(二)甲醛-硫酸反应在此试剂中形成醌式结构而显色。
药 物 三氯化铁 甲醛-硫酸肾上腺素 0.1mol/LHCl显绿色,甲氨试液显红-紫红 红色重酒石酸去甲肾上腺素 绿色,加 NaCO3试液显紫色-红色 淡红色盐酸去氧肾上腺素 紫色 玫瑰红橙红棕红盐酸异丙肾上腺素 深绿色,加 5% NaCO3试液显蓝紫色-红色 棕色暗紫色
(三)氧化反应本类药物具有 Ar-OH,易被氧化剂 I2,H2O2,
K3Fe(CN)6氧化而显色,
例如:肾上腺素在中性或酸性条件下,被 I2,H2O2
氧化后,生成肾上腺素红;
盐酸异丙肾上腺素在酸性条件下,被 I2氧化,
生成异丙肾上腺素红。
(四)紫外特征吸收与红外吸收光谱例如:
盐酸异丙肾上腺素 0.05mg/ml λmax = 280nm A =0.50
这一类药物均可采用红外吸收光谱进行鉴别
(五)与亚硝基铁氰化钠 (Rimini试验)
是鉴别脂肪伯氨基的特殊反应;可用于重酒石酸间羟胺鉴别。
D + 亚硝基铁氰化钠 + 丙酮 + Na2CO3
红紫色
(六 ) 双缩脲反应是鉴别芳环氨基醇的特殊反应;可用于盐酸麻黄碱,盐酸伪麻黄碱鉴别:
D + CuSO4 + NaOH 显 蓝紫色
+乙醚,醚层 (紫红色 )水层 (蓝色 )
(一 ) 酮体检查本类药物在生产过程中多采用酮体氢化制得,若氢化不完全,易引入酮体杂质。
采用 UV法检查:
利用酮体在 310nm有吸收,本类药物无吸收。
例如:肾上腺素本项检查 配 2.0mg/ml λ=310nm A < 0.05
盐酸去氧肾上腺素 配 2.0mg/ml λ=310nm A < 0.02
盐酸异丙肾上腺素 配 2.0mg/ml λ=310nm A < 0.15
三、特殊杂质检查
(二 ) 有关物质的检查采用 TLC法中的高低浓度对比法进行检查。
(三 ) 盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查采用 PC法中的杂质对照法进行检查。
(一 ) 非水溶液滴定法本类药物的原料药多采用此法。本法重点将在第八章讨论。
1,重酒石酸去甲肾上腺素的测定相当于[ B] 的有机酸盐可直接滴定。
2.盐酸克仑特罗的测定相当于[ B] 的 HX酸盐不能直接滴定,需加 Hg(Ac)2处理后滴定 。
3.硫酸沙丁醇的测定相当于[ B] 的 H2SO4盐可直接滴定,也可处理后滴定。
四、含量测定
(二 ) 溴量法本类药物重酒石酸间羟胺,盐酸去氧肾上腺素及其注射液用此法 。
基本原理:
H O O H
C H - C H 2 N H C H 3 + B r 2
H O O H
C H - C H 2 N H C H 3 + 3 H B rB r
B r
B r
B r 2 + 2 K I 2 K B r + I 2
I 2 + 2 N a 2 S 2 O 3 2 N a I + N a 2 S 4 O 6
(三 ) 比色法利用药物分子结构中的 Ar-OH与 Fe3+ 络合显色,进行比色测定;
也可利用药物分子结构中的 Ar-NH2重氮化偶合显色,进行比色。
C l
[ N 2 ]
+
C l
-
C H ( O H ) C H 2 N H C ( C H 3 ) 3
C l C l
C H ( O H ) C H 2 N H C ( C H 3 ) 3
C lN H C H 2 C H 2 N H 2
+
N = N N H C H 2 C H 2 N H 2
N - ( 1 - 萘 基 ) - 乙 二 胺 5 0 0 n m 比 色 测 定例如:盐酸克伦特罗栓的含量测定上述偶合剂可与 HNO2显色,干扰比色测定,可先加氨基磺酸铵分解过量的 HNO2。
HNO2 + 2H2NSO3NH4 2N2 + (NH4)2SO4 + H2SO4 +H2O
(四 ) 提取酸碱滴定法硫酸苯丙胺的含量测定:
[ B] H2SO4 + NaOH + NaCl 乙醚 提取[ B]
+ H2SO4 蒸去乙醚
NaOH标准液滴定终点
(五 ) 荧光分光光度法肾上腺素测定,
λex410nm,λem520nm处测定荧光强度,
对照法定量。
肾上腺素 +I2 肾上腺红 一定条件下
N-甲基 -3,5,6-三羟基吲哚
(六 ) HPLC法例一,重酒石酸去甲肾上腺素注射液的测定采用 RPIP-HPLC-UV法;用外标一点法进行定量测定。
例二,血浆中儿茶酚胺类(肾上腺素类)药物的测定采用 RPIP-HPLC-EChD 法;用标准曲线法进行定量测定。
(七 ) 衍生化 GC法 ( GC-FID 以盐酸美西律作内标物 )
应用示例,盐酸芬氟拉明片的含量测定盐酸芬氟拉明+三氟乙酰肝 衍生物返 回第三节 芳氧丙醇类药物的分析一、药物结构与主要理化学性质
O
O N
H
C H
3
C H
3
C H
3
C H
2
氧 烯 洛 尔
( O x p r e n o l o l )
N H
O
O N
C H
3
C H
3H 3 C
H
.
H C l
O H
盐 酸 卡 替 洛 尔
( C a r t e o l o l h y d r o c h l o r i d e )
氧烯洛尔 化学名为 1-邻烯丙氧基苯氧基 -3-异丙氨基 -2-丙醇,本品为白色结晶粉末,乙醇、丙酮中易溶;异密、氯仿中略溶;
水中微溶。
盐酸卡替洛尔 化学名为 5-[3-[1,1-二甲基乙基 )氨基 -2-羟丙氧基]
-3,4-二氢 -2(1H)-喹诺酮盐酸盐。本 品为白色结晶粉末,水中溶解,甲醇中略溶,乙醇中极微溶解,乙醚中几乎不溶;在冰醋酸中极微极微溶解
(一 ) 化学鉴别反应
1.沉淀反应 利用 其碱性与生物碱沉淀剂生成沉淀盐酸卡替洛尔+硫氰酸铬铵试液 淡红色
2.氧化反应 利用侧链的不饱和双键可被高锰酸钾氧化氧烯洛尔 + KMnO4 MnO2(棕色沉淀 )
(二 ) 紫外分光谱鉴别法盐酸卡替洛尔,8μg/ml,λmax = 215nm; 252nm
氧烯洛尔,40μg/ml,λmax = 275nm
二、鉴别试验三、盐酸卡替洛尔中有关物质检查本品采用 TLC法中的 高低浓度对照法四、含量测定
(一)非水溶液定法盐酸卡替洛尔,氧烯洛尔原料可采用此法盐酸卡替洛尔[ B]HCl + HClO4 [B]HClO4 + HCl
用电位法指示终点,HCl不干扰,无需加醋酸汞处理。
(二)紫外分光光度法本法主要用于制剂分析。例如盐酸卡替洛尔注射液采用本法。
采用对照品比较法:
CX = AX/AR × CR
标示量%= CX × D/V取 ml× 规格 ml/标示量 × 100%
(三 ) HPLC法应用示例,人血浆中样烯络尔及其异构体的测定色谱条件,预柱为十八烷基硅胶柱;
分析柱为手性 OD- R柱 (C18固定相上涂渍 3,5-二甲本氨基甲酸酯纤维素,作为手性剂 );
流动相为 NaClO4(0.4mol/L)-乙腈 (70:30)的磷酸缓冲液;检测器,237nm
样品预处理,血浆样品用醋酸纤维素膜透析,预柱纯化和富集,然后通过 RP- 手性 HPLC法分析。
回收率,可达 80%以上;线性范围,0.05μg/ml ~ 2.50μg/ml
日内和日间精密度的 RSD≤14%.
返 回练习与思考
[A型题 ]
1,盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是
A.水杨醛 B,间氨基酚 C.水杨酸
D.对氨基苯甲酸 E,氨基酚
2,对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是
A.水杨醛 B,间氨基酚 C,对氨基酚
D.苯甲酸 E.苯酚
3,肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是
A.水杨醛 B,间氨基酚 C,对氨基酚
D.酮体 E,苯甲酸
[B型题 ]
A。 硫酸铜反应 B.氧化反应
C,还原反应
D.水解后重氮化 -偶合反应
E,重氮化 -偶合反应
1,盐酸利多卡因
2,肾上腺素
3,盐酸普鲁卡因
4.对乙酰氨基酚
A
B
E
D
A。 溴量法 B,紫外分光光度法
C,亚硝酸钠滴定法 D,RP-HPLC法
E,非水滴定法
5,盐酸去氧肾上腺素
6,肾上腺素注射液
7,盐酸普鲁卡因
8.对乙酰氨基酚
A
D
C
B
[X型题 ]
1,直接能与 FeCl3产生颜色反应的药物有
A。 盐酸普鲁卡因 B,盐酸去氧肾上腺素
C,对乙酰氨基酚 D,盐酸利多卡因
E,盐酸丁卡因
2,直接和水解后能发生重氮化 -偶合反应的药物有
A。 盐酸丁卡因 B,盐酸普鲁卡因
C,对乙酰氨基酚 D,对氨基酚
E,盐酸肾上腺素返 回
二,熟悉芳氧丙醇胺类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法 。
三、了解氨基醚衍生物类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。
返 回第一节 芳 胺类药物的分析芳胺类药物分为两类芳伯氨基未被取代芳伯氨基被酰化一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质
(一)基本结构与典型药物
C
O
O R 2NR 1
H
C O O C 2 H 5H 2 N
苯佐卡因
H 2 N C O O C H 2 C H 2 N C 2 H 5 2,H C l
盐酸普鲁卡因
C O O C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2C H 3 ( C H 2 ) 3 N H H C l
盐酸丁卡因
C O N H C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2H 2 N H C l
盐酸普鲁卡因胺
1.芳伯氨基特性,重氮化-偶合反应;芳醛缩合成 Schiff碱;易氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。
(二 ) 主要理化性质
2,水解特性,分子结构中的酯键或酰胺键易水解,除盐酸丁卡因外水产物为对丁基苯甲酸外,上述均为对氨基苯甲酸。
3,弱碱性,除苯佐卡因外,其余均含有叔胺氮的侧链,故具有弱碱性。
4,其它特性,因结构中有 芳伯氨基或同时具有脂烃胺侧链,其游离碱多为碱型油状液体或低熔点固体,难溶于水,可溶于有机溶剂。其盐酸盐则易溶于水。
二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质
( 一)基本结构与典型药物
N H C R 2
O
R 1
R 3
R 4
H O N H C O C H 3
对乙酰氨基酚(扑热息痛)
S
O
O
N H C O C H 3C H 3 C O N H
醋氨苯砜
N H C O
N
C 4 H 9C H
3
C H 3
H C l
盐酸布比卡因
N H C O C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
C H 3 C H 3
H C l
盐酸利多卡因
1.水解后显芳伯氨基特性,分子结构中含有芳酰氨基,酸水解后显芳伯氨基的特性反应。
注意空间位阻的影响。
2.水解产物易酯化,对乙酰基酚和醋氨苯砜,酸水解生成醋酸,在硫酸中与乙醇反应,发出醋酸乙酯香味。
(二)主要化学性质
3.酚羟基特性,对乙酰基酚有游离酚羟基;醋氨苯砜酸水解有酚羟基,可与 FeCl3发生显色反应,
可相互区别。
4.弱碱性,利多卡因和布比卡因烃胺侧链有叔胺氮,显碱性,可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应,可相互区别。
5.与金属离子发生沉淀反应,利多卡因和布比卡因酰氨基上氮可与 Cu2+,Co2+生成有色配位化合物沉淀。
三、鉴别试验
(一)重氮化 -偶合反应分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物,均可发生此反应。
Ar-NH2 HClNaNO
2
重氮盐 OH-?-萘酚 橙黄 ~猩红色直接反应,苯佐卡因、盐酸普鲁卡因,盐酸普鲁卡因胺间接反应,对乙酰氨基酚、醋氨苯砜利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。
丁卡因虽无芳伯氨基,但可与 NaNO2反应生成 N- 亚硝基化合物的乳白色沉淀。
N H 2
C O O C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
O H
N H C O C H 3
[H2O]
Ar-NH2
NaNO 2+HCl
A r-N 2 + C l -
O H
OH-
O H
A r - N = N
猩 红 或 红 色
N H C 4 H 9
C O O C H 2 C H 2 ( C 2 H 5 ) 2
+ H N O 2
C 4 H 9 N - N O
C O O C H 2 C H 2 ( C 2 H 5 ) 2
+ H 2 O
乳 白 色
(二)与三氯化铁反应对乙酰氨基酚 + FeCl3 蓝紫色化合物
N H C O C H 3
O -
N H C O C H 3
O H
3 + F e C l
3
3
F e + 3 H C l
1,与铜和钴离子反应:
利多卡因与硫酸铜生成 蓝紫色 配位化合物;
与氯化钴生成 亮绿色 沉淀。
( 三)与金属离子反应
C H 3
C H 3
N H C O C H 2 N ( C 2 H 5 ) 22
+ Cu2+
C H 3
C H 3
N C O C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
C H 3
C H 3
( C 2 H 5 ) 2 N C H 2 C O N
C u
蓝 紫 色
+Co2+
C H 3
C H 3
N C O C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
C H 3
C H 3
( C 2 H 5 ) 2 N C H 2 C O N
C o
亮 绿 色
2,羟肟酸铁盐反应 基于普鲁卡因胺分子中的芳酰胺结构。N H 2
C O N H C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
N H 2
C O N ( O H ) C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
N H 2
C O N ( O H ) C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
3
F e
H 2 O 2 F e C l
3
紫 红,暗 棕 色,棕 黑 色
3,与汞离子反应盐酸利多卡因 + H2NO3 + Hg(NO3)2 黄色对氨基苯甲酸酯 + H2NO3 + Hg(NO3)2
红色 或 橙黄色
1,盐酸普鲁卡因的鉴别
(四 ) 水解产物反应盐酸普鲁卡因 + NaOH 普鲁卡因
油状物? 对氨基苯甲酸钠 + 二乙氨基乙醇
(使湿润的红色石蕊试纸变兰色)
对氨基苯甲酸钠 + HCl 对氨基苯甲酸(白色)
N H
2
C O O C H
2
C H
2
N ( C
2
H
5
)
2
,H C l
N H
2
C O N ( O H ) C H
2
C H
2
N ( C
2
H
5
)
2
N H
2
C O O N a
N a O H N a O H
+ H O C H
2
C H
2
N ( C
2
H
5
)
2
N H
2
C O O N a
N H
2
C O O H
N H
2
C O O H
H C l
H C l H C l
.
2,苯佐卡因的鉴别苯佐卡因 + NaOH? 乙醇乙醇 + I2 + NaOH CHI3( 碘仿臭气,黄色沉淀)
(五 ) 制备衍生物测熔点
1,三硝基苯酚衍生物的制备,利多卡因和布比卡因
N H C O C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2
C H 3H 3 C
N O 2
N O 2
O 2 N
O H
.
熔 点 为 2 2 8 ℃ ~ 2 3 2 ℃
C H 3
N H C O
C H 3
N
C 4 H 9
N O 2
N O 2
O 2 N
O H
.
熔 点 为 1 9 4 ℃
2,硫氰酸盐衍生物的制备,盐酸丁卡因
C O O C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2,H C l
N H C 4 H 9
C O O C H 2 C H 2 N ( C 2 H 5 ) 2 H S C N.
N H 4 S C N
N H C 4 H 9
熔 点 为 1 3 1 ℃
(六 ) 紫外特征吸收光谱法
1,在 λmax 处测定供试液的百分吸收系数。
例如:对乙酰基酚在 0.4%NaOH中于 λmax =240nm;E1%1cm = 715
在 HCl(0.1nol/L)-甲醇于 λmax =249nm; E1%1cm = 880
2,在规定的浓度测定 λmax
例如:醋氨苯砜 5μg/ml; λmax =256nm; 284nm
再例如:盐酸普鲁卡因胺 5μg/ml; λmax = 280nm
(七 )红外吸收光谱法
(一)对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查
1.乙醇溶液的澄清度与颜色,因其生产工艺用铁粉作还原剂,可能带入,致使乙醇溶液产生混浊,中间体对氨基酚易氧化产生有色化物,在乙醇溶液中显橙红色或棕色。
四、特殊杂质检查检查方法,配制 0.1g/ml本品乙醇溶液,溶液应澄清,无色;
如显混浊,与 1号浊度标 准液比较,不得更浓;
如显色,与棕红色 2号或橙红色 2号 标准液比较,
不得更深。
2,有关物质检查,Ch.P是以对氯苯乙酰胺为对照品,
采用 TLC法 中的杂质对照品法。
3,对氨基酚检查,利用对氨基酚在碱性条件下可与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物,采用比色法。
(二 )盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查为什么要检查?
H 2 N H 2 NC O O H - C O 2 O = = O
[ O ]
黄 色怎样检查?
采用 TLC法中的 杂质对照品法进行检查。
(一)亚硝酸钠滴定法
Ar-NH2; Ar-NHCOR; Ar-NO2均可采用此法
Ch.P中的苯佐卡因;盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡因胺及其制剂可直接采用本法;醋氨苯砜及注射液水解后用本法。
五、含量测定
N H C O R + H 2 O N H 2 + R C O O HH
+
△
N O 2 + 6 [ H ] N H 2 + 2 H 2 O
1,原理,
Ar-NHCOR + H2O Ar-NH2 + RCOOHH
+
Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl Ar-N2+Cl- + NaCl + 2H2O
2,测定主要条件:
(1) 加 KBr增加反应速度重氮化的反应历程为:
NaNO2 + HCl HNO2 + NaCl
HNO2 + HCl NOCl + H2O KHCl
N N
+
C l
-
快
N N O H
快
N N O
H
慢
N O
+
C l
-
N H
2
KBr + HCl HBr + KCl
HNO2 + HCl NOBr + H2O KKBr
∵ KHBr 比 KHCl大 300倍
∴ 生成 NOBr量大得多
∴ 加快反应速度
(2) 加过量 HCl加速反应:
① 重氮化速度加快;
② 重氮盐在酸性介质中稳定;
③ 防止生成氨基偶氮化合物。
Ar-N2+Cl- + H2N-Ar Ar-N=N-NH-Ar + HCl
一般摩尔比为 Ar-NH2,HCl = 1,2.5~6 。
(3) 室温条件下滴定,
温度高反应速度快;每升高 10℃ 加快 2.5倍太高,可使 Ar-N2+Cl- + H2O Ar-OH + N2 + HCl
(4) 滴定管尖端插入液面下滴定
3,指示终点的方法
(1) 用停滴定法 溶液 检流计终点前,无过量 无电流
HNO2
终点时,有过量 有电流(使指针偏离零
HNO2 永停在某一位置)
(2) 外指示剂法用 KI-淀粉指示剂指示终点的原理:
2NaO2 + 2KI + 4HCl 2NO + I2 + 2KCl + 2NaCl + 2H2O
GVV
R1 R2
+
(二)非水溶液滴定法基于盐酸丁卡因,盐酸利多卡因和盐酸布比卡因侧链叔胺氮在滴定盐酸丁卡因时,因其在冰醋酸中碱性弱,加醋酐可增加其碱性 。 因醋酐合乙酰氧离子比醋酸和质子的酸性强,可增加碱性 。
2(CH3CO)2O (CH3CO)3O+ + CH3COO-
相当于 [ B]HCl + Hg(Ac)2 [B]HAc + HgCl2
[B]HAc + HClO4 [B]HClO4 + HAc
1,对乙酰基酚原料的含量测定 在 0.4%NaOH介质中; 257nm
D%=[ E1%1cm]样 / [ E1%1cm]标 × 100% ; E1%1cm= 715
2,对乙酰基酚片溶出度测定 (测定条件同上)
1片+稀 HCl 24ml + H2O 1000ml 精密量 取 5ml
+ 0.4%NaOH10ml + H2O 100ml λ257nm测定 A。
W× 1/ 1000× 5/ 100× 100= C ( g/100ml)
W(g) = 200 × C; C = A/715
∴ 溶出度= W/ 标示量 × 100%> 80% 为合格
(三)分光光度法中性条件下的重氮化反应
(四)比色法盐酸普鲁卡因 +1,2-蒽醌 -4-磺酸钠 pH4-9
棕红色化合物,?max482nm处测定 A
(五)盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定
λex400nm( 激发波长),λem485nm( 发射波长)处测定荧光强度,标准曲线法定量。
盐酸普鲁卡因胺 + 荧胺 pH7.5 荧光物此法主要用于盐酸普鲁卡因注射液的测定。因该注射液中常含有降解产物对氨基苯甲酸;可以苯甲酸为内标同时测定两者的含量,该法简单准确。
色谱条件,色谱柱为 μBondapakC18 300mm× 4mm
流动相为甲醇- 1% HAc(40:60); UV检测器 250nm.
(六) HPLC法返 回第二节 苯乙胺类药物的分析一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质
(一)基本结构与典型药物
R 1 C H C H N H R 2
O H R 3
*
常见的苯乙胺类药物 H O
H O
C
O H
H
C H 2 N H C H 3
肾上腺素
H O
H O
C
O H
H
C H 2 N H 2
重酒石酸去甲肾上腺素
C
C
C O O H
C O O H
O HH
HH O
H O
C
H
O H
C H 2 N H C H 3 H C l
盐酸去氧肾上腺素
H O
C
H
O H
C H 2 N H C H ( C H 3 ) 2 H C lH O
盐酸异丙肾上腺素
(二) 主要化学性质
1.弱碱性 本类药物结构中有烃氨基侧链,为仲胺氮显弱碱性 。
2.酚羟基特性 本类药物结构中有酚羟基,可与
FeCl3;发生氧化 。
3.光学活性 多数药物结构中有手性碳原子,具有旋光性 。
二、鉴别试验
(一 )与三氯化铁反应
Ar-OH+ FeCl3 络合显色 + 碱液紫红色
。
(二)甲醛-硫酸反应在此试剂中形成醌式结构而显色。
药 物 三氯化铁 甲醛-硫酸肾上腺素 0.1mol/LHCl显绿色,甲氨试液显红-紫红 红色重酒石酸去甲肾上腺素 绿色,加 NaCO3试液显紫色-红色 淡红色盐酸去氧肾上腺素 紫色 玫瑰红橙红棕红盐酸异丙肾上腺素 深绿色,加 5% NaCO3试液显蓝紫色-红色 棕色暗紫色
(三)氧化反应本类药物具有 Ar-OH,易被氧化剂 I2,H2O2,
K3Fe(CN)6氧化而显色,
例如:肾上腺素在中性或酸性条件下,被 I2,H2O2
氧化后,生成肾上腺素红;
盐酸异丙肾上腺素在酸性条件下,被 I2氧化,
生成异丙肾上腺素红。
(四)紫外特征吸收与红外吸收光谱例如:
盐酸异丙肾上腺素 0.05mg/ml λmax = 280nm A =0.50
这一类药物均可采用红外吸收光谱进行鉴别
(五)与亚硝基铁氰化钠 (Rimini试验)
是鉴别脂肪伯氨基的特殊反应;可用于重酒石酸间羟胺鉴别。
D + 亚硝基铁氰化钠 + 丙酮 + Na2CO3
红紫色
(六 ) 双缩脲反应是鉴别芳环氨基醇的特殊反应;可用于盐酸麻黄碱,盐酸伪麻黄碱鉴别:
D + CuSO4 + NaOH 显 蓝紫色
+乙醚,醚层 (紫红色 )水层 (蓝色 )
(一 ) 酮体检查本类药物在生产过程中多采用酮体氢化制得,若氢化不完全,易引入酮体杂质。
采用 UV法检查:
利用酮体在 310nm有吸收,本类药物无吸收。
例如:肾上腺素本项检查 配 2.0mg/ml λ=310nm A < 0.05
盐酸去氧肾上腺素 配 2.0mg/ml λ=310nm A < 0.02
盐酸异丙肾上腺素 配 2.0mg/ml λ=310nm A < 0.15
三、特殊杂质检查
(二 ) 有关物质的检查采用 TLC法中的高低浓度对比法进行检查。
(三 ) 盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查采用 PC法中的杂质对照法进行检查。
(一 ) 非水溶液滴定法本类药物的原料药多采用此法。本法重点将在第八章讨论。
1,重酒石酸去甲肾上腺素的测定相当于[ B] 的有机酸盐可直接滴定。
2.盐酸克仑特罗的测定相当于[ B] 的 HX酸盐不能直接滴定,需加 Hg(Ac)2处理后滴定 。
3.硫酸沙丁醇的测定相当于[ B] 的 H2SO4盐可直接滴定,也可处理后滴定。
四、含量测定
(二 ) 溴量法本类药物重酒石酸间羟胺,盐酸去氧肾上腺素及其注射液用此法 。
基本原理:
H O O H
C H - C H 2 N H C H 3 + B r 2
H O O H
C H - C H 2 N H C H 3 + 3 H B rB r
B r
B r
B r 2 + 2 K I 2 K B r + I 2
I 2 + 2 N a 2 S 2 O 3 2 N a I + N a 2 S 4 O 6
(三 ) 比色法利用药物分子结构中的 Ar-OH与 Fe3+ 络合显色,进行比色测定;
也可利用药物分子结构中的 Ar-NH2重氮化偶合显色,进行比色。
C l
[ N 2 ]
+
C l
-
C H ( O H ) C H 2 N H C ( C H 3 ) 3
C l C l
C H ( O H ) C H 2 N H C ( C H 3 ) 3
C lN H C H 2 C H 2 N H 2
+
N = N N H C H 2 C H 2 N H 2
N - ( 1 - 萘 基 ) - 乙 二 胺 5 0 0 n m 比 色 测 定例如:盐酸克伦特罗栓的含量测定上述偶合剂可与 HNO2显色,干扰比色测定,可先加氨基磺酸铵分解过量的 HNO2。
HNO2 + 2H2NSO3NH4 2N2 + (NH4)2SO4 + H2SO4 +H2O
(四 ) 提取酸碱滴定法硫酸苯丙胺的含量测定:
[ B] H2SO4 + NaOH + NaCl 乙醚 提取[ B]
+ H2SO4 蒸去乙醚
NaOH标准液滴定终点
(五 ) 荧光分光光度法肾上腺素测定,
λex410nm,λem520nm处测定荧光强度,
对照法定量。
肾上腺素 +I2 肾上腺红 一定条件下
N-甲基 -3,5,6-三羟基吲哚
(六 ) HPLC法例一,重酒石酸去甲肾上腺素注射液的测定采用 RPIP-HPLC-UV法;用外标一点法进行定量测定。
例二,血浆中儿茶酚胺类(肾上腺素类)药物的测定采用 RPIP-HPLC-EChD 法;用标准曲线法进行定量测定。
(七 ) 衍生化 GC法 ( GC-FID 以盐酸美西律作内标物 )
应用示例,盐酸芬氟拉明片的含量测定盐酸芬氟拉明+三氟乙酰肝 衍生物返 回第三节 芳氧丙醇类药物的分析一、药物结构与主要理化学性质
O
O N
H
C H
3
C H
3
C H
3
C H
2
氧 烯 洛 尔
( O x p r e n o l o l )
N H
O
O N
C H
3
C H
3H 3 C
H
.
H C l
O H
盐 酸 卡 替 洛 尔
( C a r t e o l o l h y d r o c h l o r i d e )
氧烯洛尔 化学名为 1-邻烯丙氧基苯氧基 -3-异丙氨基 -2-丙醇,本品为白色结晶粉末,乙醇、丙酮中易溶;异密、氯仿中略溶;
水中微溶。
盐酸卡替洛尔 化学名为 5-[3-[1,1-二甲基乙基 )氨基 -2-羟丙氧基]
-3,4-二氢 -2(1H)-喹诺酮盐酸盐。本 品为白色结晶粉末,水中溶解,甲醇中略溶,乙醇中极微溶解,乙醚中几乎不溶;在冰醋酸中极微极微溶解
(一 ) 化学鉴别反应
1.沉淀反应 利用 其碱性与生物碱沉淀剂生成沉淀盐酸卡替洛尔+硫氰酸铬铵试液 淡红色
2.氧化反应 利用侧链的不饱和双键可被高锰酸钾氧化氧烯洛尔 + KMnO4 MnO2(棕色沉淀 )
(二 ) 紫外分光谱鉴别法盐酸卡替洛尔,8μg/ml,λmax = 215nm; 252nm
氧烯洛尔,40μg/ml,λmax = 275nm
二、鉴别试验三、盐酸卡替洛尔中有关物质检查本品采用 TLC法中的 高低浓度对照法四、含量测定
(一)非水溶液定法盐酸卡替洛尔,氧烯洛尔原料可采用此法盐酸卡替洛尔[ B]HCl + HClO4 [B]HClO4 + HCl
用电位法指示终点,HCl不干扰,无需加醋酸汞处理。
(二)紫外分光光度法本法主要用于制剂分析。例如盐酸卡替洛尔注射液采用本法。
采用对照品比较法:
CX = AX/AR × CR
标示量%= CX × D/V取 ml× 规格 ml/标示量 × 100%
(三 ) HPLC法应用示例,人血浆中样烯络尔及其异构体的测定色谱条件,预柱为十八烷基硅胶柱;
分析柱为手性 OD- R柱 (C18固定相上涂渍 3,5-二甲本氨基甲酸酯纤维素,作为手性剂 );
流动相为 NaClO4(0.4mol/L)-乙腈 (70:30)的磷酸缓冲液;检测器,237nm
样品预处理,血浆样品用醋酸纤维素膜透析,预柱纯化和富集,然后通过 RP- 手性 HPLC法分析。
回收率,可达 80%以上;线性范围,0.05μg/ml ~ 2.50μg/ml
日内和日间精密度的 RSD≤14%.
返 回练习与思考
[A型题 ]
1,盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是
A.水杨醛 B,间氨基酚 C.水杨酸
D.对氨基苯甲酸 E,氨基酚
2,对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是
A.水杨醛 B,间氨基酚 C,对氨基酚
D.苯甲酸 E.苯酚
3,肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是
A.水杨醛 B,间氨基酚 C,对氨基酚
D.酮体 E,苯甲酸
[B型题 ]
A。 硫酸铜反应 B.氧化反应
C,还原反应
D.水解后重氮化 -偶合反应
E,重氮化 -偶合反应
1,盐酸利多卡因
2,肾上腺素
3,盐酸普鲁卡因
4.对乙酰氨基酚
A
B
E
D
A。 溴量法 B,紫外分光光度法
C,亚硝酸钠滴定法 D,RP-HPLC法
E,非水滴定法
5,盐酸去氧肾上腺素
6,肾上腺素注射液
7,盐酸普鲁卡因
8.对乙酰氨基酚
A
D
C
B
[X型题 ]
1,直接能与 FeCl3产生颜色反应的药物有
A。 盐酸普鲁卡因 B,盐酸去氧肾上腺素
C,对乙酰氨基酚 D,盐酸利多卡因
E,盐酸丁卡因
2,直接和水解后能发生重氮化 -偶合反应的药物有
A。 盐酸丁卡因 B,盐酸普鲁卡因
C,对乙酰氨基酚 D,对氨基酚
E,盐酸肾上腺素返 回