一、普通分光光度法
1.单组分的测定
通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。
2.多组分的同时测定
⑴ 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可
在各自最大吸收波长处分别进行测定。这
本质上与单组分测定没有区别。
⑵ 若各组分的吸收曲线互有重叠，则可
根据吸光度的加合性求解联立方程组得出
各组分的含量。
Aλ1= εaλ1bca ＋ εbλ1bcb
Aλ2= εaλ2bca ＋ εbλ2bcb
二、示差分光光度法（示差法）
普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含
量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射
光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比
溶液。
设：待测溶液浓度为 cx,标准溶液浓度为 cs(cs < cx)。
则：
Ax= εb cx
As = εb cs
ΔＡ ＝ Ａ x － Ａ s =εb(cx － cs ） =εbΔc
测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸
光度之差 ΔＡ 。
ΔA＝ Ax － As =εb(cx － cs ） =εbΔc
测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的
吸光度之差 ΔA。
示差法测得的吸光度与 Δc呈直线关系。由标准曲线上
查得相应的 Δc值，则待测溶液浓度 cx：
cx = cs + Δc
示差法标尺扩展原理：
普通法,cs的 T=10%； cx的 T=5%.示差法,cs 做参比，调
T=100%则,cx的 T=50% ；标尺扩展 10倍
三、双波长分光光度法
不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色
光 (λ 1和 λ 2)； 以参比波长 λ 1处的吸光度 Aλ 1作为参比，来
消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出
很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单
波长法有所提高。
ΔA ＝ Aλ 2 － Aλ 1 ＝ (ε λ 2 － ε λ 1)b c
两波长处测得的吸光度差值 ΔA与待测组分浓度成正比
。 ε λ 1和 ε λ 2分别表示待测组分在 λ 1和 λ 2处的摩尔吸光系
数。
关键问题,
测量波长 λ 2和参比波长 λ 1的选择与组合
以两组分 x和 y的双波长法测定为例：
设,x为待测组分,y为干扰组分，二者的吸光度差分别为,
ΔAx和 ΔAy,则该体系的总吸光度差 ΔAx+y为：
ΔAx+y = ΔA x + ΔAy
如何选择波长 λ1, λ2有一定的要求。
选择波长组合 λ 1, λ 2的基本要求是：
⑴选定的波长 λ 1和 λ 2处干扰组分应具有相同吸光度，
即,ΔAy = ΔA yλ 2 － ΔA yλ 1 = 0
故,ΔAx+y = ΔA x=(ε xλ 2－ ε xλ 1)bcx
此时：测得的吸光度差 ΔA只与待测组分 x的浓度呈线性关系
，而与干扰组分 y无关。若 x为干扰组分，则也可用同样的方
法测定 y组分。
可采用作图法选择符合上
述两个条件的波长组合 。
⑵在选定的两个波长 λ 1和
λ 2处待测组分的吸光度应具
有足够大的差值。
四、导数分光光度法
导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消
除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等
方面，显示了很大的优越性。
利用吸光度 (或透光度 )对波长的导数曲线来进行分析：
Ｉ ＝ Ｉ 0 e-ε bc
假定入射光强度 Ｉ 0 在整个波长范围内保持恒定：
dI 0 /dλ ＝ 0
则, dI/dλ ＝－ Ｉ 0 bc e -ε bc dε /dλ
＝－ Ｉ 0 bc dε /dλ
导数分光光度法
dI/dλ ＝－ Ｉ 0 bc dε /dλ
一阶导数信号与试样浓度呈
线性关系；
测定灵敏度依赖于摩尔吸光
系数对波长的变化率 dε /dλ 。吸
收曲线的拐点处 dε /dλ 最大，故
其灵敏度最高 (见图）。
同理可以导出其二阶和三阶导
数光谱（略）
1.单组分的测定
通常采用 A-C 标准曲线法定量测定。
2.多组分的同时测定
⑴ 若各组分的吸收曲线互不重叠，则可
在各自最大吸收波长处分别进行测定。这
本质上与单组分测定没有区别。
⑵ 若各组分的吸收曲线互有重叠，则可
根据吸光度的加合性求解联立方程组得出
各组分的含量。
Aλ1= εaλ1bca ＋ εbλ1bcb
Aλ2= εaλ2bca ＋ εbλ2bcb
二、示差分光光度法（示差法）
普通分光光度法一般只适于测定微量组分，当待测组分含
量较高时，将产生较大的误差。需采用示差法。即提高入射
光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比
溶液。
设：待测溶液浓度为 cx,标准溶液浓度为 cs(cs < cx)。
则：
Ax= εb cx
As = εb cs
ΔＡ ＝ Ａ x － Ａ s =εb(cx － cs ） =εbΔc
测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的吸
光度之差 ΔＡ 。
ΔA＝ Ax － As =εb(cx － cs ） =εbΔc
测得的吸光度相当于普通法中待测溶液与标准溶液的
吸光度之差 ΔA。
示差法测得的吸光度与 Δc呈直线关系。由标准曲线上
查得相应的 Δc值，则待测溶液浓度 cx：
cx = cs + Δc
示差法标尺扩展原理：
普通法,cs的 T=10%； cx的 T=5%.示差法,cs 做参比，调
T=100%则,cx的 T=50% ；标尺扩展 10倍
三、双波长分光光度法
不需空白溶液作参比；但需要两个单色器获得两束单色
光 (λ 1和 λ 2)； 以参比波长 λ 1处的吸光度 Aλ 1作为参比，来
消除干扰。在分析浑浊或背景吸收较大的复杂试样时显示出
很大的优越性。灵敏度、选择性、测量精密度等方面都比单
波长法有所提高。
ΔA ＝ Aλ 2 － Aλ 1 ＝ (ε λ 2 － ε λ 1)b c
两波长处测得的吸光度差值 ΔA与待测组分浓度成正比
。 ε λ 1和 ε λ 2分别表示待测组分在 λ 1和 λ 2处的摩尔吸光系
数。
关键问题,
测量波长 λ 2和参比波长 λ 1的选择与组合
以两组分 x和 y的双波长法测定为例：
设,x为待测组分,y为干扰组分，二者的吸光度差分别为,
ΔAx和 ΔAy,则该体系的总吸光度差 ΔAx+y为：
ΔAx+y = ΔA x + ΔAy
如何选择波长 λ1, λ2有一定的要求。
选择波长组合 λ 1, λ 2的基本要求是：
⑴选定的波长 λ 1和 λ 2处干扰组分应具有相同吸光度，
即,ΔAy = ΔA yλ 2 － ΔA yλ 1 = 0
故,ΔAx+y = ΔA x=(ε xλ 2－ ε xλ 1)bcx
此时：测得的吸光度差 ΔA只与待测组分 x的浓度呈线性关系
，而与干扰组分 y无关。若 x为干扰组分，则也可用同样的方
法测定 y组分。
可采用作图法选择符合上
述两个条件的波长组合 。
⑵在选定的两个波长 λ 1和
λ 2处待测组分的吸光度应具
有足够大的差值。
四、导数分光光度法
导数分光光度法在多组分同时测定、浑浊样品分析、消
除背景干扰、加强光谱的精细结构以及复杂光谱的辨析等
方面，显示了很大的优越性。
利用吸光度 (或透光度 )对波长的导数曲线来进行分析：
Ｉ ＝ Ｉ 0 e-ε bc
假定入射光强度 Ｉ 0 在整个波长范围内保持恒定：
dI 0 /dλ ＝ 0
则, dI/dλ ＝－ Ｉ 0 bc e -ε bc dε /dλ
＝－ Ｉ 0 bc dε /dλ
导数分光光度法
dI/dλ ＝－ Ｉ 0 bc dε /dλ
一阶导数信号与试样浓度呈
线性关系；
测定灵敏度依赖于摩尔吸光
系数对波长的变化率 dε /dλ 。吸
收曲线的拐点处 dε /dλ 最大，故
其灵敏度最高 (见图）。
同理可以导出其二阶和三阶导
数光谱（略）
