第 26卷 第 4期
2007年 4月水 产 科 学
F ISHER IES SC IENCE
Vol,26 No,4
Ap r,2007
恩 诺 沙 星 在 日 本 鳗 鲡 体 内 残 留 消 除 规 律 研 究张 德 云,匡 维 华,郑 映 钦
(广 东 顺 德 出 入 境 检 验 检 疫 局,广 东 顺 德 528303)
摘 要,采 用 高 效 液 相 色 谱 法 检 测 日 本 鳗 鲡 肌 肉,血 清,肠,鳃 和 肝 脏 组 织 中 恩 诺 沙 星 及 其 代 谢 物 环 丙沙 星 的 残 留 。 方 法 的 日 内 和 日 间 变 异 系 数 分 别 为 1,86%和 2,53%,标 准 添 加 回 收 率 为 (95 ± 6) % ;最低 测 量 限 为 1,0μ g/kg。 用 现 场 试 验 方 法 研 究 恩 诺 沙 星 在 鳗 鱼 体 内 的 代 谢 残 留 规 律 。 对 约 50 g鳗 鱼 按
9 mg/kg鱼 体 重 每 天 给 药 2次,连 续 投 喂 7 d。 给 药 期 间 鳗 鱼 体 内 的 药 物 含 量 呈 锯 齿 状 上 升,停 药 60 d
后 鳗 鱼 肠,鳃 和 肝 脏 组 织 中 药 物 即 下 降 至 1～ 5μ g/kg。 肌 肉 和 血 清 中 药 物 残 留 到 90 d,分 别 消 除 至 3
μ g/kg和 4μ g/kg。 所 测 组 织 的 药 物 残 留 至 停 药 120 d后 降 到 检 测 限 以 下 。 故 鳗 鱼 的 停 药 期 不 应 低 于
120 d。
关 键 词,恩 诺 沙 星 ;日 本 鳗 鲡 ;残 留 ;高 效 液 相 色 谱 法中 图 分 类 号,S942,2 文 献 标 识 码,A 文 章 编 号,100321111 (2007) 0420210204
收 稿 日 期,2006 - 07 - 12; 修 回 日 期,2006 - 09 - 04.
作 者 简 介,张 德 云 (1973 - ),男,检 验 师,硕 士,研 究 方 向,药 物 分 析 ; E - mail,zhdy2000@163,com.
恩 诺 沙 星 ( Enrofloxacin,ENR )俗 称 海 达,是 化学 合 成 的 第 三 代 喹 诺 酮 类 抗 菌 药 物 。 该 药 为 专 用兽 药,主 要 作 用 于 细 菌 DNA,具 有 广 谱 高 效 的 特 点,
广 泛 应 用 于 鱼 类 感 染 性 疾 病 的 预 防 和 治 疗 。 恩 诺沙 星 代 谢 缓 慢,容 易 残 留 于 肌 肉,肝 脏,肾 脏 等 动 物组 织 中 。 长 期 摄 入 该 药 容 易 引 起 关 节 和 软 骨 损 伤,
大 量 药 物 还 可 能 造 成 消 化 系 统,泌 尿 系 统 甚 至 神 经系 统 的 损 害 [ 1 ]。 欧 盟 和 日 本 对 该 类 药 物 的 残 留 标准 都 有 规 定,我 国 尚 未 颁 布 动 物 源 食 品 国 家 卫 生 标准 及 其 相 应 的 检 测 标 准 。 目 前 已 有 动 物 组 织 中 喹诺 酮 药 物 代 谢 方 面 的 报 道 [ 2,325 ],尚 未 见 到 关 于 日 本鳗 鲡 (A nguilla japonica)恩 诺 沙 星 代 谢 方 面 的 文 献 。
鳗 鱼 生 活 习 性 为 群 居 性,对 饲 养 环 境 具 有 严 格 的 选择 性,适 宜 在 野 外 环 境 中 生 长,用 容 器 人 工 喂 养 则不 进 食 。 因 此 本 试 验 采 用 田 间 现 场 试 验,能 真 实 反映 药 物 在 鱼 体 内 的 吸 收 和 消 除 状 况 。 药 物 代 谢 随动 物 种 属 差 异,药 物 种 类 和 食 物 构 成 而 各 不 相 同 。
笔 者 对 鳗 鱼 体 内 恩 诺 沙 星 的 残 留 和 消 除 规 律 进 行了 研 究,为 研 究 其 代 谢 动 力 学,生 物 利 用 效 率 以 及药 物 残 留 监 控 等 方 面 提 供 参 考 数 据 。
1 材 料 与 方 法
1,1 试 验 鱼 和 养 殖 场 所采 用 平 均 体 重 约 50 g,体 长 30～ 50 cm的 健 康鳗 鱼 8000条 作 为 受 试 对 象,投 放 于 约 6000 m2的 鱼塘 中 自 然 喂 养 。 将 鱼 塘 分 割 成 4000 m2 和 2000
m2,分 别 喂 养 6000和 2000尾 鳗 鱼 作 为 试 验 组 和 对照 组 。 试 验 前 驯 化 喂 养 15 d,每 天 按 鱼 体 重 1,8%
投 喂 饲 料 。
1,2 仪 器 与 试 剂仪 器,岛 津 LC10 - A高 效 液 相 色 谱 系 统 (配 荧光 检 测 器,Class - vp 软 件 系 统 ) ; T18 型 均 质 器 ;
LCP型 多 功 能 振 荡 器 ; LABORTA /4000旋 转 浓 缩 蒸发 仪 ; TDL - S离 心 机 ;M illi - Q超 纯 水 系 统 。
试 剂,市 售 盐 酸 恩 诺 沙 星 (含 量 99% ) ;恩 诺 沙星 和 环 丙 沙 星 标 准 品 为 Sigma试 剂 公 司 提 供,使 用时 用 乙 腈 配 制 成 1000μ g/m l的 标 准 储 备 溶 液 ;乙腈 和 甲 醇 为 色 谱 纯 试 剂 ;正 己 烷,四 丁 基 溴 化 铵 为分 析 纯 试 剂 ;试 验 用 水 均 为 M illi - Q超 纯 水 。
1,3 方 法
1,3,1 饲 养 试 验 和 样 品 采 集先 将 药 物 与 饲 料 混 合 均 匀,试 验 组 鳗 鱼 按 9
mg/kg体 重 给 药,早 晚 各 1次,连 续 投 喂 7 d (1个 疗程 ),首 次 投 喂 药 物 剂 量 加 倍 。 对 照 组 投 喂 未 添 加药 物 的 饲 料 。 分 别 于 给 药 前 和 首 次 给 药 后 12,24、
36,48,72,96 h以 及 第 5,6,7,15,21,30,60,90,120
d分 别 采 集 鳗 鱼 血 清,肌 肉,鳃,肝 脏,肠,测 定 恩 诺沙 星 含 量 。 每 次 采 集 6条 鱼,每 条 鱼 肌 肉 单 独 检测,其 他 组 织 合 并 取 样 后 进 行 测 定 。
1,3,2 样 品 处 理 方 法用 断 尾 取 血 法 收 集 鱼 血,吸 取 上 层 血 清 用 于 试验 。 同 时 采 集 鳗 鱼 肝 脏,鳃 和 鱼 肉 测 定 其 中 恩 诺 沙星 和 环 丙 沙 星 的 含 量 。 准 确 称 取 约 5,00 g鳃,肝脏,肌 肉 和 2,00 g血 清 样 品 于 50 m l具 塞 塑 料 离 心管 内,加 入 25 m l乙 腈,12000 r/m in均 质 后 静 置 提取 15 m in。 以 3000 r/m in离 心 5 m in,上 清 液 倒 入预 先 装 有 50μ m l正 己 烷 的 125 m l分 液 漏 斗 中 。 残渣 捣 碎 后 再 次 加 入 25 m l乙 腈,按 前 述 方 法 提 取,合并 上 清 液 。 将 上 清 液 在 振 荡 器 上 充 分 震 荡 5 m in后静 置 分 层,收 集 下 层 乙 腈 层 至 125 m l梨 形 瓶 中,40
℃ 减 压 旋 转 蒸 发 浓 缩 至 干 后 以 50%甲 醇 溶 液 定 容至 1 m l待 测 。 同 时 做 试 剂 空 白 试 验 和 标 准 添 加 回收 试 验,添 加 标 准 物 浓 度 相 当 于 样 品 含 恩 诺 沙 星 20
μ g/kg。
1,3,3 色 谱 条 件色 谱 柱,Cloversil C18,250 mm × 4,6 mm,5
μ m;流 动 相,乙 腈 - 0,01 mol/L 四 丁 基 溴 化 铵
(8∶ 92),以 磷 酸 调 节 pH至 3,0;流 速,1,0 m l/m in;
柱 温,40 ℃ ;荧 光 检 测,激 发 波 长 280 nm,发 射 波 长
480 nm。
1,3,4 标 准 曲 线取 一 定 体 积 的 恩 诺 沙 星 和 环 丙 沙 星 标 准 储 备液,分 别 用 50%甲 醇 溶 液 配 制 6,25,12,5,25,50,
100 g/L标 准 系 列,进 样 20μ l进 行 分 析,以 峰 面 积对 应 标 准 溶 液 浓 度,绘 制 标 准 曲 线 。
1,3,5 数 据 处 理 方 法用 SPSS统 计 分 析 软 件 对 5种 组 织 中 恩 诺 沙 星药 物 浓 度 进 行 统 计 处 理 。
2 结 果 与 讨 论
2,1 色 谱 分 离 和 回 收 评 价恩 诺 沙 星 和 环 丙 沙 星 的 色 谱 图 见 图 1。 恩 诺 沙星 的 色 谱 峰 峰 形 良 好,且 与 其 他 组 分 完 全 分 离 。 在
100 g/L浓 度 水 平 内 以 药 物 浓 度 — — — 仪 器 响 应 信 号作 图,恩 诺 沙 星 和 环 丙 沙 星 直 线 回 归 线 性 相 关 系 数分 别 为 0,9997和 0,9992。 用 0,2 mg/kg水 平 作 标准 添 加 回 收 试 验,回 收 率 为 ( 95 ± 6) %。 方 法 的 日内 和 日 间 变 异 系 数 分 别 为 1,86%和 2,53%,两 者均 < 10%。 最 低 测 量 限 为 1,0 g/kg。 结 果 表 明 该方 法 灵 敏,准 确,具 有 较 好 的 重 现 性 。
图 1 恩 诺 沙 星 (1)和 环 丙 沙 星 (2)色 谱
A标 准 样 品 色 谱 ; B样 品 添 加 标 准 色 谱 ; C鱼 肉 样 品 色 谱 。
2,2 恩 诺 沙 星 及 其 代 谢 物 残 留恩 诺 沙 星 在 鳗 鱼 体 内 主 要 代 谢 物 为 环 丙 沙 星 。
按 上 述 多 次 给 药 试 验,鳗 鱼 鱼 肉 中 恩 诺 沙 星 和 环 丙
112第 4期 张 德 云 等,恩 诺 沙 星 在 日 本 鳗 鲡 体 内 残 留 消 除 规 律 研 究
沙 星 平 均 含 量 随 时 间 变 化 的 关 系 曲 线 见 图 2。 毒 理学 上 经 典 的 每 次 剂 量 和 间 隔 时 间 都 相 同 的 多 次 染毒 时 量 曲 线 的 特 点 先 为 一 锯 齿 状 上 升 曲 线,然 后 趋于 平 衡,锯 齿 线 在 一 定 范 围 内 波 动 [ 4 ]。 由 图 2可见,在 本 试 验 给 药 期 间 (前 7 d),第 1,5 d和 第 4 d
鱼 体 组 织 恩 诺 沙 星 含 量 分 别 比 前 一 次 低,呈 不 典 型的 锯 齿 状 上 升 趋 势 。 本 研 究 采 用 自 然 喂 养 而 不 是每 条 鳗 鱼 人 工 给 药,因 此 鳗 鱼 进 食 差 异 较 大 而 导 致药 物 摄 入 不 均 匀,鳗 鱼 体 内 药 物 含 量 呈 不 典 型 的 锯齿 状 上 升 趋 势 可 能 与 此 有 关 。 第 4～ 7 d鱼 体 组 织恩 诺 沙 星 含 量 相 对 稳 定,表 明 药 物 的 吸 收 和 清 除 达到 了 动 态 平 衡 。 鱼 体 内 药 物 含 量 变 化 符 合 群 体 给药 时 的 药 物 代 谢 动 力 学 规 律 。 鱼 肉 中 环 丙 沙 星 含 量与 恩 诺 沙 星 具 有 一 定 的 相 关 性 (相 关 系 数 r = 0,91),
含 量 约 为 恩 诺 沙 星 含 量 的 1 /10。 同 时,鱼 肉 环 丙 沙星 清 除 速 度 比 恩 诺 沙 星 快,停 药 53 d即 降 至 检 测 限以 下 。
图 2 恩 诺 沙 星 和 环 丙 沙 星 在 鳗 鱼 肌 肉 中 的 残 留 曲 线
2,3 药 物 在 鱼 体 组 织 残 留 规 律在 前 述 时 间 范 围 内 采 集 不 同 鱼 体 组 织 进 行 分 析,
鱼 体 内 恩 诺 沙 星 平 均 浓 度 随 时 间 变 化 规 律 见 表 1。
表 1 喂 饲 给 药 后 鳗 鱼 组 织 中 恩 诺 沙 星 药 物 含 量组 织给 药 后 不 同 天 数 鳗 鱼 组 织 中 恩 诺 沙 星 含 量 /mg· kg - 1
0 d 0,5 d 1 d 1,5 d 2 d 3 d 4 d 5 d
血 0,003 0,107 1,019 0,429 0,877 2,833 8,52 9,361
肝 脏 0,005 2,122 5,02 2,793 4,246 15,97 10,33 11,253
鳃 0,006 4,455 4,48 1,43 2,597 13,018 9,27 10,588
肠 0,007 12,38 17,61 18,44 20,18 14,96 13,572 15,866
肌 肉 3 0,01 ± 0,007 2,865 ± 0,6624,606 ± 0,511 1,56 ± 1,084 1,873 ± 0,78513,852 ± 3,1969,42 ± 1,375 11,06 ± 1,953
组 织给 药 后 不 同 天 数 鳗 鱼 组 织 中 恩 诺 沙 星 含 量 /mg· kg - 1
6 d 7 d 15 d 21 d 30 d 60 d 90 d 120 d
血 5,433 1,66 0,199 0,08 0,021 0,017 0,003 < 0,001
肝 脏 13,154 11,973 0,128 0,036 0,107 0,004 0,001 < 0,001
鳃 11,749 8,274 0,253 0,299 0,208 0,005 0,001 < 0,001
肠 8,93 15,606 0,643 0,071 0,057 0,001 0,001 < 0,001
肌 肉 3 9,285 ± 2,3028,758 ± 1,6090,532 ± 0,1260,135 ± 0,0250,091 ± 0,0230,017 ± 0,0110,004 ± 0,002 < 0,001
3 x ± s
对 照 组 鳗 鱼 组 织 中 均 含 有 1,0 × 10 - 9级 的 恩 诺沙 星,表 明 在 鳗 鱼 育 苗 过 程 中 可 能 使 用 过 该 药 物 。
5种 组 织 中 鱼 血 的 恩 诺 沙 星 药 物 含 量 最 低,而 鱼 肠组 织 中 最 高 。 各 组 织 恩 诺 沙 星 含 量 由 高 到 低 依 次为,肠 >肝 脏 >鳃 >肌 肉 >鱼 血 。 对 5种 组 织 中 恩诺 沙 星 含 量 进 行 的 方 差 分 析,结 果 表 明 鱼 肠 与 其 他组 织 药 物 含 量 的 差 别 具 有 统 计 学 意 义 ( P < 0,01),
鱼 血 与 其 他 3种 组 织 药 物 含 量 也 具 有 显 著 性 差 别
( P < 0,05)。 表 明 药 物 是 经 过 肠 吸 收 后 进 入 血 液,
再 在 肝 脏,肌 肉 和 鳃 等 组 织 中 富 集 。 肌 肉 和 肝 脏 中恩 诺 沙 星 在 停 药 后 的 16 d内 迅 速 降 解,但 随 后 清 除速 度 逐 渐 变 慢,直 到 第 90 d才 消 除 至 给 药 前 的 水平 。 此 结 果 比 吴 皓 报 道 的 环 丙 沙 星 休 药 期 长 [ 5 ],可能 是 由 于 本 研 究 采 用 了 多 次 给 药 现 场 试 验,而 后 者采 用 的 是 人 工 试 验 和 一 次 给 药 方 式 。 此 外,药 物 的种 类 和 剂 量 也 不 相 同 。 鳗 鱼 有 底 栖 的 习 性,自 然 喂养 时 药 物 沉 入 淤 泥 中,容 易 造 成 多 次 反 复 的 吸 收 。
由 于 恩 诺 沙 星 药 物 清 除 时 间 比 较 长,上 市 前 要 经 过
212 水 产 科 学 第 26卷较 长 的 休 药 期,建 议 选 择 其 他 替 代 药 物 来 防 治 鳗 鱼的 相 关 疾 病 。
参 考 文 献,
[ 1 ] 应 翔 宇,杨 永 胜,兽 用 新 型 抗 菌 药 物 - 恩 诺 沙 星 [ J ].
中 国 兽 药 杂 志,1995,29 (3),53256.
[ 2 ] 邱 银 根,喹 诺 酮 类 药 物 在 动 物 组 织 的 残 留 [ J ],中 国兽 药 杂 志,1996,30 (1),46249.
[ 3 ] 周 秦 秦,傅 颖 君,况 荣 华,等,高 效 液 相 色 谱 法 测 定 盐酸 环 丙 沙 星 血 药 浓 度 及 其 药 动 学 研 究 [ J ],中 国 医 院药 学 杂 志,1998,18 (3),1142116.
[ 4 ] 张 桥,卫 生 毒 理 学 基 础 [M ],3版,北 京,人 民 卫 生 出版 社,2000,33235.
[ 5 ] 吴 皓,尹 文 林,邵 健 忠,等,环 丙 沙 星 在 鳗 鲡 组 织 中 残留 的 消 除 规 律 [ J ],科 技 通 报,2003,19 (6),4482451.
Stud ies on Elim ina tion of Enrofloxac in Residues
and ItsM etabolites in Eel T issues
ZHANG De2yun,KUANG W ei2hua,ZHENG Ying2qin
( Shunde Entry2Exit Inspection and Quarantine Bureau,Shunde 528303,China )
Abstract,The HPLC method was emp loyed to conduct the quantitative determ ination of the residues of enrofloxa2
cin and its metabolite ( cip rofloxacin) in tissues of eel (A ngu illa japonica),The within2day and between2day vari2
ations were 1,86% and 2,53% for the method,respectively,The recovery was ( 95 ± 6 ) % with 0,2 mg/kg
standard sp iked,The lowest detection lim it was 1,0μ g/kg,Field test was adop ted to evaluate the dep letion rates
of the drugs in muscles,serum,intestines,gills and livers,Eels were fed with enrofloxacin at a dosage of 9 mg/
kg twice a day in seven days successively,The concentrations of the two drugs rose by serrated curve during the
first seven days,Residues of enrofloxacin and cip rofloxacin were elim inated slowly in various tissues,Residues of
enrofloxacin were lower than 5μ g/kg after 60 days in tissues of intestines,gills and livers,while the concentration
in muscles and serum took 90 days to acheive the same level,Residues of enrofloxacin in all tissues were lower
than the m inimum detection lim it(1,0μ g/kg) afterwithdrawal of 120 days,For the sake of food security,eels are
not allowed to sale less than 120 days after adim inistration of enrofloxacin under the dosage above.
Key words,enrofloxacin; eel(A ngu illa japon ica) ; residues; HPLC
(责 任 编 辑,小 舟 )
新 书 信 息
由 大 连 水 产 学 院 王 吉 桥,汪 秋 宽,叶 林 编 著 的,新 世 纪 高 等 教 育 教 学 改 革 工 程,系 列 之 一,,英 语 科 技 论 文 写 作,已 由 黑 龙江 科 学 技 术 出 版 社 出 版 。 本 书 面 向 大,中 专 学 生 和 科 研 工 作 者,以 英 语 语 言 学 和 写 作 知 识 与 技 能 为 基 础,以 水 产 养 殖 学 专 业为 媒 介,以 提 高 英 语 写 作 能 力 为 目 的,主 要 解 决 广 大 科 研 工 作 者 在 英 文 论 文 写 作 方 面 出 现 的 问 题 。 本 书 有 以 下 特 点,
1,深 入 浅 出,循 序 渐 进,以,词 — 词 组 — 句 — 段 落 — 篇 章,的 编 排 顺 序 作 为 英 语 写 作 的 认 识 路 线 。
2,将 中 英 思 维 和 写 作 方 式 的 对 比 作 为 英 语 写 作 的 理 论 基 础 。
3,将 运 用 英 语 知 识 提 高 写 作 技 能 作 为 英 语 写 作 的 根 本 目 的 。
4,实 用 性 强 。 本 书 编 者 在 联 合 国 粮 农 组 织,,大 连 水 产 学 院 学 报,,,水 产 科 学,杂 志 多 年 从 事 英 文 论 文 写 作 和 英 文 编 辑等 相 关 工 作,经 验 丰 富 ;书 中 所 举 事 例 皆 为 实 际 写 作 过 程 中 出 现 的 。
本 书 定 价 25,00元,邮 挂 费 3元 。 如 购 买,请 汇 款 至,水 产 科 学,编 辑 部 。 地 址,辽 宁 省 大 连 市 沙 河 口 区 黑 石 礁 街 50号
,水 产 科 学,编 辑 部,邮 编,116023,联 系 电 话,0411— 84679512。
312第 4期 张 德 云 等,恩 诺 沙 星 在 日 本 鳗 鲡 体 内 残 留 消 除 规 律 研 究
2007年 4月水 产 科 学
F ISHER IES SC IENCE
Vol,26 No,4
Ap r,2007
恩 诺 沙 星 在 日 本 鳗 鲡 体 内 残 留 消 除 规 律 研 究张 德 云,匡 维 华,郑 映 钦
(广 东 顺 德 出 入 境 检 验 检 疫 局,广 东 顺 德 528303)
摘 要,采 用 高 效 液 相 色 谱 法 检 测 日 本 鳗 鲡 肌 肉,血 清,肠,鳃 和 肝 脏 组 织 中 恩 诺 沙 星 及 其 代 谢 物 环 丙沙 星 的 残 留 。 方 法 的 日 内 和 日 间 变 异 系 数 分 别 为 1,86%和 2,53%,标 准 添 加 回 收 率 为 (95 ± 6) % ;最低 测 量 限 为 1,0μ g/kg。 用 现 场 试 验 方 法 研 究 恩 诺 沙 星 在 鳗 鱼 体 内 的 代 谢 残 留 规 律 。 对 约 50 g鳗 鱼 按
9 mg/kg鱼 体 重 每 天 给 药 2次,连 续 投 喂 7 d。 给 药 期 间 鳗 鱼 体 内 的 药 物 含 量 呈 锯 齿 状 上 升,停 药 60 d
后 鳗 鱼 肠,鳃 和 肝 脏 组 织 中 药 物 即 下 降 至 1～ 5μ g/kg。 肌 肉 和 血 清 中 药 物 残 留 到 90 d,分 别 消 除 至 3
μ g/kg和 4μ g/kg。 所 测 组 织 的 药 物 残 留 至 停 药 120 d后 降 到 检 测 限 以 下 。 故 鳗 鱼 的 停 药 期 不 应 低 于
120 d。
关 键 词,恩 诺 沙 星 ;日 本 鳗 鲡 ;残 留 ;高 效 液 相 色 谱 法中 图 分 类 号,S942,2 文 献 标 识 码,A 文 章 编 号,100321111 (2007) 0420210204
收 稿 日 期,2006 - 07 - 12; 修 回 日 期,2006 - 09 - 04.
作 者 简 介,张 德 云 (1973 - ),男,检 验 师,硕 士,研 究 方 向,药 物 分 析 ; E - mail,zhdy2000@163,com.
恩 诺 沙 星 ( Enrofloxacin,ENR )俗 称 海 达,是 化学 合 成 的 第 三 代 喹 诺 酮 类 抗 菌 药 物 。 该 药 为 专 用兽 药,主 要 作 用 于 细 菌 DNA,具 有 广 谱 高 效 的 特 点,
广 泛 应 用 于 鱼 类 感 染 性 疾 病 的 预 防 和 治 疗 。 恩 诺沙 星 代 谢 缓 慢,容 易 残 留 于 肌 肉,肝 脏,肾 脏 等 动 物组 织 中 。 长 期 摄 入 该 药 容 易 引 起 关 节 和 软 骨 损 伤,
大 量 药 物 还 可 能 造 成 消 化 系 统,泌 尿 系 统 甚 至 神 经系 统 的 损 害 [ 1 ]。 欧 盟 和 日 本 对 该 类 药 物 的 残 留 标准 都 有 规 定,我 国 尚 未 颁 布 动 物 源 食 品 国 家 卫 生 标准 及 其 相 应 的 检 测 标 准 。 目 前 已 有 动 物 组 织 中 喹诺 酮 药 物 代 谢 方 面 的 报 道 [ 2,325 ],尚 未 见 到 关 于 日 本鳗 鲡 (A nguilla japonica)恩 诺 沙 星 代 谢 方 面 的 文 献 。
鳗 鱼 生 活 习 性 为 群 居 性,对 饲 养 环 境 具 有 严 格 的 选择 性,适 宜 在 野 外 环 境 中 生 长,用 容 器 人 工 喂 养 则不 进 食 。 因 此 本 试 验 采 用 田 间 现 场 试 验,能 真 实 反映 药 物 在 鱼 体 内 的 吸 收 和 消 除 状 况 。 药 物 代 谢 随动 物 种 属 差 异,药 物 种 类 和 食 物 构 成 而 各 不 相 同 。
笔 者 对 鳗 鱼 体 内 恩 诺 沙 星 的 残 留 和 消 除 规 律 进 行了 研 究,为 研 究 其 代 谢 动 力 学,生 物 利 用 效 率 以 及药 物 残 留 监 控 等 方 面 提 供 参 考 数 据 。
1 材 料 与 方 法
1,1 试 验 鱼 和 养 殖 场 所采 用 平 均 体 重 约 50 g,体 长 30～ 50 cm的 健 康鳗 鱼 8000条 作 为 受 试 对 象,投 放 于 约 6000 m2的 鱼塘 中 自 然 喂 养 。 将 鱼 塘 分 割 成 4000 m2 和 2000
m2,分 别 喂 养 6000和 2000尾 鳗 鱼 作 为 试 验 组 和 对照 组 。 试 验 前 驯 化 喂 养 15 d,每 天 按 鱼 体 重 1,8%
投 喂 饲 料 。
1,2 仪 器 与 试 剂仪 器,岛 津 LC10 - A高 效 液 相 色 谱 系 统 (配 荧光 检 测 器,Class - vp 软 件 系 统 ) ; T18 型 均 质 器 ;
LCP型 多 功 能 振 荡 器 ; LABORTA /4000旋 转 浓 缩 蒸发 仪 ; TDL - S离 心 机 ;M illi - Q超 纯 水 系 统 。
试 剂,市 售 盐 酸 恩 诺 沙 星 (含 量 99% ) ;恩 诺 沙星 和 环 丙 沙 星 标 准 品 为 Sigma试 剂 公 司 提 供,使 用时 用 乙 腈 配 制 成 1000μ g/m l的 标 准 储 备 溶 液 ;乙腈 和 甲 醇 为 色 谱 纯 试 剂 ;正 己 烷,四 丁 基 溴 化 铵 为分 析 纯 试 剂 ;试 验 用 水 均 为 M illi - Q超 纯 水 。
1,3 方 法
1,3,1 饲 养 试 验 和 样 品 采 集先 将 药 物 与 饲 料 混 合 均 匀,试 验 组 鳗 鱼 按 9
mg/kg体 重 给 药,早 晚 各 1次,连 续 投 喂 7 d (1个 疗程 ),首 次 投 喂 药 物 剂 量 加 倍 。 对 照 组 投 喂 未 添 加药 物 的 饲 料 。 分 别 于 给 药 前 和 首 次 给 药 后 12,24、
36,48,72,96 h以 及 第 5,6,7,15,21,30,60,90,120
d分 别 采 集 鳗 鱼 血 清,肌 肉,鳃,肝 脏,肠,测 定 恩 诺沙 星 含 量 。 每 次 采 集 6条 鱼,每 条 鱼 肌 肉 单 独 检测,其 他 组 织 合 并 取 样 后 进 行 测 定 。
1,3,2 样 品 处 理 方 法用 断 尾 取 血 法 收 集 鱼 血,吸 取 上 层 血 清 用 于 试验 。 同 时 采 集 鳗 鱼 肝 脏,鳃 和 鱼 肉 测 定 其 中 恩 诺 沙星 和 环 丙 沙 星 的 含 量 。 准 确 称 取 约 5,00 g鳃,肝脏,肌 肉 和 2,00 g血 清 样 品 于 50 m l具 塞 塑 料 离 心管 内,加 入 25 m l乙 腈,12000 r/m in均 质 后 静 置 提取 15 m in。 以 3000 r/m in离 心 5 m in,上 清 液 倒 入预 先 装 有 50μ m l正 己 烷 的 125 m l分 液 漏 斗 中 。 残渣 捣 碎 后 再 次 加 入 25 m l乙 腈,按 前 述 方 法 提 取,合并 上 清 液 。 将 上 清 液 在 振 荡 器 上 充 分 震 荡 5 m in后静 置 分 层,收 集 下 层 乙 腈 层 至 125 m l梨 形 瓶 中,40
℃ 减 压 旋 转 蒸 发 浓 缩 至 干 后 以 50%甲 醇 溶 液 定 容至 1 m l待 测 。 同 时 做 试 剂 空 白 试 验 和 标 准 添 加 回收 试 验,添 加 标 准 物 浓 度 相 当 于 样 品 含 恩 诺 沙 星 20
μ g/kg。
1,3,3 色 谱 条 件色 谱 柱,Cloversil C18,250 mm × 4,6 mm,5
μ m;流 动 相,乙 腈 - 0,01 mol/L 四 丁 基 溴 化 铵
(8∶ 92),以 磷 酸 调 节 pH至 3,0;流 速,1,0 m l/m in;
柱 温,40 ℃ ;荧 光 检 测,激 发 波 长 280 nm,发 射 波 长
480 nm。
1,3,4 标 准 曲 线取 一 定 体 积 的 恩 诺 沙 星 和 环 丙 沙 星 标 准 储 备液,分 别 用 50%甲 醇 溶 液 配 制 6,25,12,5,25,50,
100 g/L标 准 系 列,进 样 20μ l进 行 分 析,以 峰 面 积对 应 标 准 溶 液 浓 度,绘 制 标 准 曲 线 。
1,3,5 数 据 处 理 方 法用 SPSS统 计 分 析 软 件 对 5种 组 织 中 恩 诺 沙 星药 物 浓 度 进 行 统 计 处 理 。
2 结 果 与 讨 论
2,1 色 谱 分 离 和 回 收 评 价恩 诺 沙 星 和 环 丙 沙 星 的 色 谱 图 见 图 1。 恩 诺 沙星 的 色 谱 峰 峰 形 良 好,且 与 其 他 组 分 完 全 分 离 。 在
100 g/L浓 度 水 平 内 以 药 物 浓 度 — — — 仪 器 响 应 信 号作 图,恩 诺 沙 星 和 环 丙 沙 星 直 线 回 归 线 性 相 关 系 数分 别 为 0,9997和 0,9992。 用 0,2 mg/kg水 平 作 标准 添 加 回 收 试 验,回 收 率 为 ( 95 ± 6) %。 方 法 的 日内 和 日 间 变 异 系 数 分 别 为 1,86%和 2,53%,两 者均 < 10%。 最 低 测 量 限 为 1,0 g/kg。 结 果 表 明 该方 法 灵 敏,准 确,具 有 较 好 的 重 现 性 。
图 1 恩 诺 沙 星 (1)和 环 丙 沙 星 (2)色 谱
A标 准 样 品 色 谱 ; B样 品 添 加 标 准 色 谱 ; C鱼 肉 样 品 色 谱 。
2,2 恩 诺 沙 星 及 其 代 谢 物 残 留恩 诺 沙 星 在 鳗 鱼 体 内 主 要 代 谢 物 为 环 丙 沙 星 。
按 上 述 多 次 给 药 试 验,鳗 鱼 鱼 肉 中 恩 诺 沙 星 和 环 丙
112第 4期 张 德 云 等,恩 诺 沙 星 在 日 本 鳗 鲡 体 内 残 留 消 除 规 律 研 究
沙 星 平 均 含 量 随 时 间 变 化 的 关 系 曲 线 见 图 2。 毒 理学 上 经 典 的 每 次 剂 量 和 间 隔 时 间 都 相 同 的 多 次 染毒 时 量 曲 线 的 特 点 先 为 一 锯 齿 状 上 升 曲 线,然 后 趋于 平 衡,锯 齿 线 在 一 定 范 围 内 波 动 [ 4 ]。 由 图 2可见,在 本 试 验 给 药 期 间 (前 7 d),第 1,5 d和 第 4 d
鱼 体 组 织 恩 诺 沙 星 含 量 分 别 比 前 一 次 低,呈 不 典 型的 锯 齿 状 上 升 趋 势 。 本 研 究 采 用 自 然 喂 养 而 不 是每 条 鳗 鱼 人 工 给 药,因 此 鳗 鱼 进 食 差 异 较 大 而 导 致药 物 摄 入 不 均 匀,鳗 鱼 体 内 药 物 含 量 呈 不 典 型 的 锯齿 状 上 升 趋 势 可 能 与 此 有 关 。 第 4～ 7 d鱼 体 组 织恩 诺 沙 星 含 量 相 对 稳 定,表 明 药 物 的 吸 收 和 清 除 达到 了 动 态 平 衡 。 鱼 体 内 药 物 含 量 变 化 符 合 群 体 给药 时 的 药 物 代 谢 动 力 学 规 律 。 鱼 肉 中 环 丙 沙 星 含 量与 恩 诺 沙 星 具 有 一 定 的 相 关 性 (相 关 系 数 r = 0,91),
含 量 约 为 恩 诺 沙 星 含 量 的 1 /10。 同 时,鱼 肉 环 丙 沙星 清 除 速 度 比 恩 诺 沙 星 快,停 药 53 d即 降 至 检 测 限以 下 。
图 2 恩 诺 沙 星 和 环 丙 沙 星 在 鳗 鱼 肌 肉 中 的 残 留 曲 线
2,3 药 物 在 鱼 体 组 织 残 留 规 律在 前 述 时 间 范 围 内 采 集 不 同 鱼 体 组 织 进 行 分 析,
鱼 体 内 恩 诺 沙 星 平 均 浓 度 随 时 间 变 化 规 律 见 表 1。
表 1 喂 饲 给 药 后 鳗 鱼 组 织 中 恩 诺 沙 星 药 物 含 量组 织给 药 后 不 同 天 数 鳗 鱼 组 织 中 恩 诺 沙 星 含 量 /mg· kg - 1
0 d 0,5 d 1 d 1,5 d 2 d 3 d 4 d 5 d
血 0,003 0,107 1,019 0,429 0,877 2,833 8,52 9,361
肝 脏 0,005 2,122 5,02 2,793 4,246 15,97 10,33 11,253
鳃 0,006 4,455 4,48 1,43 2,597 13,018 9,27 10,588
肠 0,007 12,38 17,61 18,44 20,18 14,96 13,572 15,866
肌 肉 3 0,01 ± 0,007 2,865 ± 0,6624,606 ± 0,511 1,56 ± 1,084 1,873 ± 0,78513,852 ± 3,1969,42 ± 1,375 11,06 ± 1,953
组 织给 药 后 不 同 天 数 鳗 鱼 组 织 中 恩 诺 沙 星 含 量 /mg· kg - 1
6 d 7 d 15 d 21 d 30 d 60 d 90 d 120 d
血 5,433 1,66 0,199 0,08 0,021 0,017 0,003 < 0,001
肝 脏 13,154 11,973 0,128 0,036 0,107 0,004 0,001 < 0,001
鳃 11,749 8,274 0,253 0,299 0,208 0,005 0,001 < 0,001
肠 8,93 15,606 0,643 0,071 0,057 0,001 0,001 < 0,001
肌 肉 3 9,285 ± 2,3028,758 ± 1,6090,532 ± 0,1260,135 ± 0,0250,091 ± 0,0230,017 ± 0,0110,004 ± 0,002 < 0,001
3 x ± s
对 照 组 鳗 鱼 组 织 中 均 含 有 1,0 × 10 - 9级 的 恩 诺沙 星,表 明 在 鳗 鱼 育 苗 过 程 中 可 能 使 用 过 该 药 物 。
5种 组 织 中 鱼 血 的 恩 诺 沙 星 药 物 含 量 最 低,而 鱼 肠组 织 中 最 高 。 各 组 织 恩 诺 沙 星 含 量 由 高 到 低 依 次为,肠 >肝 脏 >鳃 >肌 肉 >鱼 血 。 对 5种 组 织 中 恩诺 沙 星 含 量 进 行 的 方 差 分 析,结 果 表 明 鱼 肠 与 其 他组 织 药 物 含 量 的 差 别 具 有 统 计 学 意 义 ( P < 0,01),
鱼 血 与 其 他 3种 组 织 药 物 含 量 也 具 有 显 著 性 差 别
( P < 0,05)。 表 明 药 物 是 经 过 肠 吸 收 后 进 入 血 液,
再 在 肝 脏,肌 肉 和 鳃 等 组 织 中 富 集 。 肌 肉 和 肝 脏 中恩 诺 沙 星 在 停 药 后 的 16 d内 迅 速 降 解,但 随 后 清 除速 度 逐 渐 变 慢,直 到 第 90 d才 消 除 至 给 药 前 的 水平 。 此 结 果 比 吴 皓 报 道 的 环 丙 沙 星 休 药 期 长 [ 5 ],可能 是 由 于 本 研 究 采 用 了 多 次 给 药 现 场 试 验,而 后 者采 用 的 是 人 工 试 验 和 一 次 给 药 方 式 。 此 外,药 物 的种 类 和 剂 量 也 不 相 同 。 鳗 鱼 有 底 栖 的 习 性,自 然 喂养 时 药 物 沉 入 淤 泥 中,容 易 造 成 多 次 反 复 的 吸 收 。
由 于 恩 诺 沙 星 药 物 清 除 时 间 比 较 长,上 市 前 要 经 过
212 水 产 科 学 第 26卷较 长 的 休 药 期,建 议 选 择 其 他 替 代 药 物 来 防 治 鳗 鱼的 相 关 疾 病 。
参 考 文 献,
[ 1 ] 应 翔 宇,杨 永 胜,兽 用 新 型 抗 菌 药 物 - 恩 诺 沙 星 [ J ].
中 国 兽 药 杂 志,1995,29 (3),53256.
[ 2 ] 邱 银 根,喹 诺 酮 类 药 物 在 动 物 组 织 的 残 留 [ J ],中 国兽 药 杂 志,1996,30 (1),46249.
[ 3 ] 周 秦 秦,傅 颖 君,况 荣 华,等,高 效 液 相 色 谱 法 测 定 盐酸 环 丙 沙 星 血 药 浓 度 及 其 药 动 学 研 究 [ J ],中 国 医 院药 学 杂 志,1998,18 (3),1142116.
[ 4 ] 张 桥,卫 生 毒 理 学 基 础 [M ],3版,北 京,人 民 卫 生 出版 社,2000,33235.
[ 5 ] 吴 皓,尹 文 林,邵 健 忠,等,环 丙 沙 星 在 鳗 鲡 组 织 中 残留 的 消 除 规 律 [ J ],科 技 通 报,2003,19 (6),4482451.
Stud ies on Elim ina tion of Enrofloxac in Residues
and ItsM etabolites in Eel T issues
ZHANG De2yun,KUANG W ei2hua,ZHENG Ying2qin
( Shunde Entry2Exit Inspection and Quarantine Bureau,Shunde 528303,China )
Abstract,The HPLC method was emp loyed to conduct the quantitative determ ination of the residues of enrofloxa2
cin and its metabolite ( cip rofloxacin) in tissues of eel (A ngu illa japonica),The within2day and between2day vari2
ations were 1,86% and 2,53% for the method,respectively,The recovery was ( 95 ± 6 ) % with 0,2 mg/kg
standard sp iked,The lowest detection lim it was 1,0μ g/kg,Field test was adop ted to evaluate the dep letion rates
of the drugs in muscles,serum,intestines,gills and livers,Eels were fed with enrofloxacin at a dosage of 9 mg/
kg twice a day in seven days successively,The concentrations of the two drugs rose by serrated curve during the
first seven days,Residues of enrofloxacin and cip rofloxacin were elim inated slowly in various tissues,Residues of
enrofloxacin were lower than 5μ g/kg after 60 days in tissues of intestines,gills and livers,while the concentration
in muscles and serum took 90 days to acheive the same level,Residues of enrofloxacin in all tissues were lower
than the m inimum detection lim it(1,0μ g/kg) afterwithdrawal of 120 days,For the sake of food security,eels are
not allowed to sale less than 120 days after adim inistration of enrofloxacin under the dosage above.
Key words,enrofloxacin; eel(A ngu illa japon ica) ; residues; HPLC
(责 任 编 辑,小 舟 )
新 书 信 息
由 大 连 水 产 学 院 王 吉 桥,汪 秋 宽,叶 林 编 著 的,新 世 纪 高 等 教 育 教 学 改 革 工 程,系 列 之 一,,英 语 科 技 论 文 写 作,已 由 黑 龙江 科 学 技 术 出 版 社 出 版 。 本 书 面 向 大,中 专 学 生 和 科 研 工 作 者,以 英 语 语 言 学 和 写 作 知 识 与 技 能 为 基 础,以 水 产 养 殖 学 专 业为 媒 介,以 提 高 英 语 写 作 能 力 为 目 的,主 要 解 决 广 大 科 研 工 作 者 在 英 文 论 文 写 作 方 面 出 现 的 问 题 。 本 书 有 以 下 特 点,
1,深 入 浅 出,循 序 渐 进,以,词 — 词 组 — 句 — 段 落 — 篇 章,的 编 排 顺 序 作 为 英 语 写 作 的 认 识 路 线 。
2,将 中 英 思 维 和 写 作 方 式 的 对 比 作 为 英 语 写 作 的 理 论 基 础 。
3,将 运 用 英 语 知 识 提 高 写 作 技 能 作 为 英 语 写 作 的 根 本 目 的 。
4,实 用 性 强 。 本 书 编 者 在 联 合 国 粮 农 组 织,,大 连 水 产 学 院 学 报,,,水 产 科 学,杂 志 多 年 从 事 英 文 论 文 写 作 和 英 文 编 辑等 相 关 工 作,经 验 丰 富 ;书 中 所 举 事 例 皆 为 实 际 写 作 过 程 中 出 现 的 。
本 书 定 价 25,00元,邮 挂 费 3元 。 如 购 买,请 汇 款 至,水 产 科 学,编 辑 部 。 地 址,辽 宁 省 大 连 市 沙 河 口 区 黑 石 礁 街 50号
,水 产 科 学,编 辑 部,邮 编,116023,联 系 电 话,0411— 84679512。
312第 4期 张 德 云 等,恩 诺 沙 星 在 日 本 鳗 鲡 体 内 残 留 消 除 规 律 研 究
