教学目标
说出平面色谱中定性参数 Rf及 Rr,相平衡参数 K及 k、面效参数 n及 H、分离参数 R
及 SN的概念。
简述吸附剂种类及影响活度因素。
简述选择展开剂的一般原则。
详述薄层色谱的操作方法和定性定量方法。
详述纸色谱法的分离原理和实验方法。
平面色谱方法示意
a
b
c
原点至斑点中心的距离原点至溶剂前沿的距离Rf=
原点至试样组份斑点中心的距离R
r= 原点至参考物质斑点中心的距离
Rf与 Rr值的测量示意图平面色谱法参数－定性参数
a
c=
b
c=
0.2~0.8,0.3~0.5为宜平面色谱法参数－相平衡参数
k,K增大,Rf 减小。
Rf=1,k=0; Rf=0,k=∞
ms
f VKVkR /1
1
1
1
平面色谱法参数－面效参数
2)/(16 WLn?
L：原点到斑点中心的距离
L0：原点到溶剂前沿的距离
W：组分斑点的纵向宽度影响因素,固定相的粒度、均匀度、活度、
展开剂的流速、展开方式等。
nLH /0?
平面色谱法参数－分离参数
R>1为宜
)/(2
)/()(2
21
2112
WWd
WWLLR
分离度：
分离数（ SN）：在相邻斑点分离度为 1.117
时，在 Rf＝ 0和 Rf ＝ 1两种组分斑点之间能容纳的色谱斑点数。经典薄层板的分离数为 7~10，高效薄层板的分离数为 10~20。
层析缸薄层板展开剂薄层色谱法示意图薄层色谱法特点
分离效能高，展开时间短。
灵敏度高，可检出微克至几十纳克的物质。
仪器简单，操作方便。
试样预处理简单。
自动化程度低，重现性较差，定量分析准确度与精密度较低。
薄层色谱吸附剂活性点位活性级别分离效率影响因素分离对象硅胶 硅醇基含水量 ↑
活性 ↓
（使用前活化！）
粒度 ↓,
粒度分布
↓,分离效率 ↑
有机酸氨基酸萜类甾体氧化铝 铝羟基 同上 同上氨基酸、
酸性色素 ;
挥发油、
萜类、甾体；生物碱等。
吸附剂 展开剂被测物质薄层色谱展开剂选择示意图
A
BC
A
B
C
常用溶剂极性顺序
石油醚 <环己烷 <四氯化碳 <苯 <甲苯
<氯仿 <乙醚 <醋酸乙酯 <正丁醇 <丙酮 <乙醇 <甲醇 <吡啶 <酸 <水薄层色谱操作方法定性定量分析显色展开点样制板薄层色谱操作方法－制板
软板,不含粘合剂，干法铺板，简便快速，展开速度快，但薄层薄层不牢固，分离效果较差。
硬板,倾注法、平铺法、涂铺器法
粘合剂：煅石膏（硅胶 -G板）。硬板机械强度较差，但耐腐蚀，可用硫酸试液显色。
羧甲基纤维素钠：硬板机械强度好，但耐腐蚀性较差。
常用硅胶：硅胶 G、硅胶 H、硅胶 GF254、硅胶
HF254
活化,105℃,0.5~1h
薄层色谱操作方法－ 点样
1.样品溶液：多用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机溶剂，避免水作溶剂。 0.01％ ~0.1%.
2.点样量器：平口微量注射器、玻璃毛细管、微升毛细管、自动点样装置。
3.点样量：分析型几至几十微克，制备型数毫克。
4.点样方法：一次或多次。起始线距薄层底边
1.5～ 2cm，点间距离 0.8～ 1.5cm，原点直径 2～
4mm。
1.展开装置：层析缸
2.展开方式：近水平展开、上行展开、多次展开、双向展开。
3.展开时注意事项：展开槽密闭良好、防止边缘效应 （先饱和 15~30min)、展开过程中恒温恒湿。
薄层色谱操作方法－展开薄层色谱操作方法－显色
1,物理检出法：紫外灯下观察荧光斑点或暗斑。紫外灯波长 254nm,365nm。
2,化学检出法：通用显色剂：碘（生物碱，
氨基酸衍生物等）、硫酸溶液、荧光黄溶液（芳香族与杂环化合物）；专属显色剂，
如茚三酮（氨基酸）、三氯化铁 -铁氰化钾试剂（酚羟基）、溴钾酚绿（羧酸化合物）。
定性方法
样品组分 Rf值与同一薄板上的对照品组分的 Rf值比较。
与文献的相对比移值进行比较。
定量方法
洗脱法
直接定量法
– 目视比较法
– 薄层扫描法
Cx C1 C2 C3 C4
目视比色法示意双波长双光束薄层扫描仪光学系统简图光源
1
斩光器检测器
2
应用
平面色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、
蛋白质及中草药中有效成分的分离分析中经常被使用。也可以用于无机离子的分离。还经常作为高效液相色谱的一种预试方法。
高效薄层色谱法与纸色谱法自学思考题,
HPTLC为什么比 TLC分离效能高？
纸色谱法的固定相是什么？从原理上分类它属于什么色谱？
纸色谱法的流动相有何特点？为什么流动相在使用前要预先用水饱和？
试比较纸色谱与薄层色谱的操作方法和定性定量方法。
小结一、薄层色谱法：
分离原理：吸附、分配、分子排阻。
吸附剂、展开剂的选择：分离极性小的物质需用活性高的吸附剂和极性小的洗脱剂；分离极性大的物质，需用活性低的吸附剂和极性大的洗脱剂操作方法：
制板、点样、展开、显色、定性定量二、纸色谱：
分离原理：分配操作方法：点样、展开、显色、定性定量
