医学微生物学
? 多媒体教学课件
? 蚌埠医学院微生物学教研室
Medical Microbiology
第一篇 微生物学的基本原理
? 第二章 微生物的生物学性状
? 第三章 感染
? 第四章 抗感染免疫
? 第五章 遗传与变异
? 第六章 医学微生态学与医院内感染
? 第七章 消毒与灭菌
? 第八章 病原学诊断与防治
? 第九章 细菌的耐药性与控制策略
第八章 细菌感染的检查与防治
?第一节 细菌学诊断
?第二节 病毒学诊断
?第三节 真菌学诊断
?第四节 特异性预防与治疗
第 8章 检查与防治
第一节 细菌学诊断
? 包括
血清学诊断 — 检测病人血清中
特异性抗体
病原学诊断
病原菌
抗原
代谢产物
核酸
一 细菌学检查
? 一、标本的采集
? 1、采集适宜标本（部位、病程）
? 2、防止杂菌污染
? 3、及时送检（注意抵抗力低细菌）
第 8章 检查与防治
病原菌检验程序
直接涂片
Gram’染色 培养、鉴定
生
化
反
应
血清学鉴定
动 物 实 验
药
敏
试
验
新技术、新方法
第 8章 检查与防治
形
态
菌
落
二,血清学诊断
? 血清中抗体测定
凝集反应
中和试验
补体结合试验
免疫标记技术
第 8章 检查与防治
第二节 病毒学诊断
? 一、标本的采集与送检
? 二、病毒的分离与鉴定
? 三、病毒感染的血清学诊断
? 四、病毒感染的快速诊断
病毒感染的诊断
? 一、标本的采集与送检：
合适的标本与正确取送
⒈ 感染部位取标本：
⒉标本处理：
污染的标本用抗生素处理
⒊冷藏速送：
二、病毒分离与鉴定
动物接种
鸡胚接种
细胞培养
三
大
培
养
方
法
原则：活的组织细胞
病毒感染的诊断
? 病毒的分离培养与鉴定
1.动物接种 — 易感动物、适宜的接种途径
动物（小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴）
接种途径,鼻内
皮内
皮下
脑内
腹腔内
静脉
eg.乙型脑炎病毒 脑内接种 小鼠（ 3W龄）
病毒感染的诊断
? 病毒的分离培养与鉴定
2.鸡胚接种, 9-14日龄的鸡胚
⑴,绒毛尿囊膜接种：疱疹病毒
⑵,尿囊腔接种：传代病毒
⑶,羊膜腔接种：流感病毒
⑷,卵黄囊接种：乙脑病毒
气室
尿囊腔
卵黄囊
蛋白
羊膜腔
壳膜
绒毛尿囊膜
鸡 胚 结 构 模 式 图
病毒感染的诊断
? 病毒的分离培养与鉴定
3.细胞培养
⑴ 细胞类型,
原代和次代细胞培养
二倍体细胞株（ 50-100代）
传代细胞系（肿瘤细胞系）
第一节 病毒感染的诊断
⑵ 病毒在细胞培养中增殖的指标
① 细胞病变效应,cytopathic effect,
CPE
② 红细胞吸附,吸附脊椎动物的 RBC
③ 细胞代谢变化,pH 的变化
④干扰现象,干扰后进入的病毒增殖
病毒在细胞内增殖的指标
2、红细胞吸附
1,CPE细胞病变 效应 CPE
正常细胞
病变细胞
病毒的血清学诊断
中和试验
补体结合试验
血凝抑制试验
免疫扩散等
三、病毒感染的血清学诊断
四、病毒感染的快速诊断
光镜 -----包涵体
电镜（形态）
检测病毒抗原
检测 IgM抗体
检测病毒核酸
四、病毒感染的快速诊断
1.形态学检查：
⑴,光镜,
包涵体（ inclusion body),在普通光镜下，
某些病毒感染的细胞内，可见胞浆或胞核内出现嗜
酸性或嗜碱性、大小和数量不同的圆形或不规则团
块结构。
巨细胞病毒 → 浆内嗜酸性包涵体
麻疹病毒 → 核内及浆内嗜酸性包涵体 → 多
核巨细胞
狂犬病毒 → 浆内嗜酸性包涵体（内基小体）
⑵ 电镜：
①,直接检查：观察病毒颗粒的典型形态；
②,免疫电镜；加特异性抗体 → 病毒颗粒凝聚成团，
特异性高；
四, 病毒感染的快速诊断
2,检查病毒抗原：
免疫荧光技术,
直接法,标本 + 荧光素标记的抗体
间接法：标本 + 抗体 + 荧光素标记的第二抗体
四, 病 毒 感 染 的 快 速 诊 断
酶免疫技术,
酶免疫组化：标本片 + 酶标抗体；
→ + 酶作用底物；
→ 显色。
ELISA：可溶性抗原 /抗体包板；
→ + 酶标抗体 /抗原；
→ + 酶作用底物；
→ 显色。
四, 病 毒 感 染 的 快 速 诊 断
? 特异性 IgM抗体检测
? IgM特点,产生早、消退早
? 意义,利于早期诊断，作为正在感染或
新生儿宫内感染的指标
四, 病毒感染的快速诊断
病毒核酸杂交技术：
斑点杂交
原位杂交
PCR
核酸印迹
四, 病 毒 感 染 的 快 速 诊 断
⑴,斑点分子杂交（ dot-blot):
待测 DNA标本点硝酸纤维素膜（ NC） ；
→ 变性处理 ；
→ 酶标 /同位素标记的已知 DNA探针；
→ 杂交；
→ 底物显色 /放射自显影；
四,病毒感染的快速诊断
病毒核酸杂交技术：
⑵,原位分子杂交（ insitu hybridization):
组织 /细胞片 → 变性处理 ；
→ 酶标 /同位素标记的已知 DNA探针；
→ 杂交；
→ 底物显色 /放射自显影；
四,病毒感染的快速诊断
4,病毒核酸杂交技术：
⑶,Southern印迹（ Southern-blot):
待测病毒的 DNA → 酶切；
→ 琼脂糖电泳；
→ 转移到 NC上（ blot）；
→ 酶标 /同位素标记的已知 DNA探针；
→ 杂交；
→ 底物显色 /放射自显影；
四,病毒感染的快速诊断
4,病毒核酸杂交技术：
⑷,Northern印迹（ Northern-blot):
待测病毒 mRNA → 琼脂糖电泳；
→ 转移到 NC上（ blot）；
→ 酶标 /同位素标记的已知 DNA探针；
→ 杂交；
→ 底物显色 /放射自显影；
四、病毒感染的快速诊断
4,病毒核酸杂交技术：
⑸, 多聚酶链反应 (polymerase chain reaction,
PCR)待测（扩增）的微量 DNA/RNA（ 靶序列）
→ 94℃ 变性 （呈单链,ssDNA/ssRNA);
→ + 引物（与待扩增 DNA片段两翼互补的 DNA）
→ 55 ℃ 复性 ；
→ 72 ℃ 引物 延伸 （在 DNA聚合酶催化下以待测
DNA/RNA为模板，引物引导 DNA合成）；
→ 循环 4~30次； → 靶序列增加到 105~9以上。
第三节 真菌学诊断
? 直接镜检：
? 不染色标本 --- 观察菌丝、孢子
? 染色标本 ---革兰染色
? 分离培养：沙保弱培养基
? 动物实验：
? 皮肤试验：真菌过敏性试验
? 真菌毒素检测：
第四节 特异性预防与治疗
? 概念
? 种类
第 8章 检查与防治
一、人工主动免疫
一、人工主动免疫
减毒活疫苗
应用毒力变异获得毒力降低或
无毒株制备而成
类毒素 细菌外毒素经甲醛脱毒保留抗
原性而成
概念,将制备的 Ag 机体，使机体主
动产生免疫力的方法
灭活疫苗
用物理、化学方法杀死微生物种
类
? DNA疫苗
感染防治原则
亚单位疫苗,提取微生物某些有效抗原成分制成
基因工程疫苗：
编码某病毒保护性抗原的基因
载体细胞中
克隆
表达该保护性抗原
第三代疫苗
二、人工被动免疫
? 概念
? 种类
第 7章 检查与防治
概念,将特异性抗体或效应物输入
机体，使机体被动的立即获得免疫力
二,人工被动免疫
免疫血清：
胎盘球蛋白：
丙种球蛋白：
IFN及其诱生剂、转移因子等：
种
类
? 病毒感染的药物防治：
三、感染的治疗（简述）
？ 目前尚无特异、有效地杀伤病毒的药物 ！
现在存在的共同问题,对正常细胞的毒性
致畸
致突变
免疫抑制
? 细菌感染的药物防治（略）
? 药物防治,原则
三, 病毒感染的防治原则
1.针对病毒增殖的不同环节 金刚烷胺抑制脱壳
病毒唑抑制转录
2,特异性抑制病毒复制而无细胞毒性
3.联合用药,注意剂量，以防耐药变异株出现：
已有耐叠氮胸苷（ AZT）的 HIV毒株。
4.增强机体免疫力的综合疗法
5.特殊部位局部用药 角膜、泌尿生殖道。
? 药物防治：
病毒感染的防治原则
考虑用抗病毒药物的病毒性感染：
1.尚无有效疫苗预防者：
2.致死性疾病：
3.严重的急性感染,流感大流行
4.症状明显的局部感染,病毒性角膜炎
AIDS
病毒感染防治
? 药物防治：
1.核苷类：
2.病毒蛋白酶抑制剂：
3.细胞因子：
4.基因疗法：
干扰素
干扰素诱生剂
中草药
较理想的抗病毒药物
? 1、了解细菌感染检查的程序
? 2、了解病毒感染的诊断与预防
? 3、了解病毒培养分离的方法
? 4、何谓包涵体？在病毒性疾病诊断中有
何意义？
? 5、了解人工免疫的方法及用途
本章要点
细胞病变效应 cytopathic effect,CPE
包涵体 inclusion body
专业英语
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Medical Microbiology
第一篇 微生物学的基本原理
? 第二章 微生物的生物学性状
? 第三章 感染
? 第四章 抗感染免疫
? 第五章 遗传与变异
? 第六章 医学微生态学与医院内感染
? 第七章 消毒与灭菌
? 第八章 病原学诊断与防治
? 第九章 细菌的耐药性与控制策略
第八章 细菌感染的检查与防治
?第一节 细菌学诊断
?第二节 病毒学诊断
?第三节 真菌学诊断
?第四节 特异性预防与治疗
第 8章 检查与防治
第一节 细菌学诊断
? 包括
血清学诊断 — 检测病人血清中
特异性抗体
病原学诊断
病原菌
抗原
代谢产物
核酸
一 细菌学检查
? 一、标本的采集
? 1、采集适宜标本（部位、病程）
? 2、防止杂菌污染
? 3、及时送检（注意抵抗力低细菌）
第 8章 检查与防治
病原菌检验程序
直接涂片
Gram’染色 培养、鉴定
生
化
反
应
血清学鉴定
动 物 实 验
药
敏
试
验
新技术、新方法
第 8章 检查与防治
形
态
菌
落
二,血清学诊断
? 血清中抗体测定
凝集反应
中和试验
补体结合试验
免疫标记技术
第 8章 检查与防治
第二节 病毒学诊断
? 一、标本的采集与送检
? 二、病毒的分离与鉴定
? 三、病毒感染的血清学诊断
? 四、病毒感染的快速诊断
病毒感染的诊断
? 一、标本的采集与送检：
合适的标本与正确取送
⒈ 感染部位取标本：
⒉标本处理：
污染的标本用抗生素处理
⒊冷藏速送：
二、病毒分离与鉴定
动物接种
鸡胚接种
细胞培养
三
大
培
养
方
法
原则：活的组织细胞
病毒感染的诊断
? 病毒的分离培养与鉴定
1.动物接种 — 易感动物、适宜的接种途径
动物（小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猴）
接种途径,鼻内
皮内
皮下
脑内
腹腔内
静脉
eg.乙型脑炎病毒 脑内接种 小鼠（ 3W龄）
病毒感染的诊断
? 病毒的分离培养与鉴定
2.鸡胚接种, 9-14日龄的鸡胚
⑴,绒毛尿囊膜接种：疱疹病毒
⑵,尿囊腔接种：传代病毒
⑶,羊膜腔接种：流感病毒
⑷,卵黄囊接种：乙脑病毒
气室
尿囊腔
卵黄囊
蛋白
羊膜腔
壳膜
绒毛尿囊膜
鸡 胚 结 构 模 式 图
病毒感染的诊断
? 病毒的分离培养与鉴定
3.细胞培养
⑴ 细胞类型,
原代和次代细胞培养
二倍体细胞株（ 50-100代）
传代细胞系（肿瘤细胞系）
第一节 病毒感染的诊断
⑵ 病毒在细胞培养中增殖的指标
① 细胞病变效应,cytopathic effect,
CPE
② 红细胞吸附,吸附脊椎动物的 RBC
③ 细胞代谢变化,pH 的变化
④干扰现象,干扰后进入的病毒增殖
病毒在细胞内增殖的指标
2、红细胞吸附
1,CPE细胞病变 效应 CPE
正常细胞
病变细胞
病毒的血清学诊断
中和试验
补体结合试验
血凝抑制试验
免疫扩散等
三、病毒感染的血清学诊断
四、病毒感染的快速诊断
光镜 -----包涵体
电镜（形态）
检测病毒抗原
检测 IgM抗体
检测病毒核酸
四、病毒感染的快速诊断
1.形态学检查：
⑴,光镜,
包涵体（ inclusion body),在普通光镜下，
某些病毒感染的细胞内，可见胞浆或胞核内出现嗜
酸性或嗜碱性、大小和数量不同的圆形或不规则团
块结构。
巨细胞病毒 → 浆内嗜酸性包涵体
麻疹病毒 → 核内及浆内嗜酸性包涵体 → 多
核巨细胞
狂犬病毒 → 浆内嗜酸性包涵体（内基小体）
⑵ 电镜：
①,直接检查：观察病毒颗粒的典型形态；
②,免疫电镜；加特异性抗体 → 病毒颗粒凝聚成团，
特异性高；
四, 病毒感染的快速诊断
2,检查病毒抗原：
免疫荧光技术,
直接法,标本 + 荧光素标记的抗体
间接法：标本 + 抗体 + 荧光素标记的第二抗体
四, 病 毒 感 染 的 快 速 诊 断
酶免疫技术,
酶免疫组化：标本片 + 酶标抗体；
→ + 酶作用底物；
→ 显色。
ELISA：可溶性抗原 /抗体包板；
→ + 酶标抗体 /抗原；
→ + 酶作用底物；
→ 显色。
四, 病 毒 感 染 的 快 速 诊 断
? 特异性 IgM抗体检测
? IgM特点,产生早、消退早
? 意义,利于早期诊断，作为正在感染或
新生儿宫内感染的指标
四, 病毒感染的快速诊断
病毒核酸杂交技术：
斑点杂交
原位杂交
PCR
核酸印迹
四, 病 毒 感 染 的 快 速 诊 断
⑴,斑点分子杂交（ dot-blot):
待测 DNA标本点硝酸纤维素膜（ NC） ；
→ 变性处理 ；
→ 酶标 /同位素标记的已知 DNA探针；
→ 杂交；
→ 底物显色 /放射自显影；
四,病毒感染的快速诊断
病毒核酸杂交技术：
⑵,原位分子杂交（ insitu hybridization):
组织 /细胞片 → 变性处理 ；
→ 酶标 /同位素标记的已知 DNA探针；
→ 杂交；
→ 底物显色 /放射自显影；
四,病毒感染的快速诊断
4,病毒核酸杂交技术：
⑶,Southern印迹（ Southern-blot):
待测病毒的 DNA → 酶切；
→ 琼脂糖电泳；
→ 转移到 NC上（ blot）；
→ 酶标 /同位素标记的已知 DNA探针；
→ 杂交；
→ 底物显色 /放射自显影；
四,病毒感染的快速诊断
4,病毒核酸杂交技术：
⑷,Northern印迹（ Northern-blot):
待测病毒 mRNA → 琼脂糖电泳；
→ 转移到 NC上（ blot）；
→ 酶标 /同位素标记的已知 DNA探针；
→ 杂交；
→ 底物显色 /放射自显影；
四、病毒感染的快速诊断
4,病毒核酸杂交技术：
⑸, 多聚酶链反应 (polymerase chain reaction,
PCR)待测（扩增）的微量 DNA/RNA（ 靶序列）
→ 94℃ 变性 （呈单链,ssDNA/ssRNA);
→ + 引物（与待扩增 DNA片段两翼互补的 DNA）
→ 55 ℃ 复性 ；
→ 72 ℃ 引物 延伸 （在 DNA聚合酶催化下以待测
DNA/RNA为模板，引物引导 DNA合成）；
→ 循环 4~30次； → 靶序列增加到 105~9以上。
第三节 真菌学诊断
? 直接镜检：
? 不染色标本 --- 观察菌丝、孢子
? 染色标本 ---革兰染色
? 分离培养：沙保弱培养基
? 动物实验：
? 皮肤试验：真菌过敏性试验
? 真菌毒素检测：
第四节 特异性预防与治疗
? 概念
? 种类
第 8章 检查与防治
一、人工主动免疫
一、人工主动免疫
减毒活疫苗
应用毒力变异获得毒力降低或
无毒株制备而成
类毒素 细菌外毒素经甲醛脱毒保留抗
原性而成
概念,将制备的 Ag 机体，使机体主
动产生免疫力的方法
灭活疫苗
用物理、化学方法杀死微生物种
类
? DNA疫苗
感染防治原则
亚单位疫苗,提取微生物某些有效抗原成分制成
基因工程疫苗：
编码某病毒保护性抗原的基因
载体细胞中
克隆
表达该保护性抗原
第三代疫苗
二、人工被动免疫
? 概念
? 种类
第 7章 检查与防治
概念,将特异性抗体或效应物输入
机体，使机体被动的立即获得免疫力
二,人工被动免疫
免疫血清：
胎盘球蛋白：
丙种球蛋白：
IFN及其诱生剂、转移因子等：
种
类
? 病毒感染的药物防治：
三、感染的治疗（简述）
？ 目前尚无特异、有效地杀伤病毒的药物 ！
现在存在的共同问题,对正常细胞的毒性
致畸
致突变
免疫抑制
? 细菌感染的药物防治（略）
? 药物防治,原则
三, 病毒感染的防治原则
1.针对病毒增殖的不同环节 金刚烷胺抑制脱壳
病毒唑抑制转录
2,特异性抑制病毒复制而无细胞毒性
3.联合用药,注意剂量，以防耐药变异株出现：
已有耐叠氮胸苷（ AZT）的 HIV毒株。
4.增强机体免疫力的综合疗法
5.特殊部位局部用药 角膜、泌尿生殖道。
? 药物防治：
病毒感染的防治原则
考虑用抗病毒药物的病毒性感染：
1.尚无有效疫苗预防者：
2.致死性疾病：
3.严重的急性感染,流感大流行
4.症状明显的局部感染,病毒性角膜炎
AIDS
病毒感染防治
? 药物防治：
1.核苷类：
2.病毒蛋白酶抑制剂：
3.细胞因子：
4.基因疗法：
干扰素
干扰素诱生剂
中草药
较理想的抗病毒药物
? 1、了解细菌感染检查的程序
? 2、了解病毒感染的诊断与预防
? 3、了解病毒培养分离的方法
? 4、何谓包涵体？在病毒性疾病诊断中有
何意义？
? 5、了解人工免疫的方法及用途
本章要点
细胞病变效应 cytopathic effect,CPE
包涵体 inclusion body
专业英语
