三 杂粮病害 玉米、高粱、谷子是我国重要的粮食作物，病害的种类也比较多。在我国玉米、高粱、谷子病害有80多种，其中发生普遍而又严重的玉米病害主要有小斑病、大斑病、弯孢霉叶斑病、灰斑病、丝黑穗病、瘤黑粉病、茎腐病、炭疽病、病毒病等。高粱病害主要有丝黑穗病、散黑穗病等五种黑穗病及炭疽病、紫斑病、顶腐病等；谷子病害主要有白发病、谷瘟病、叶锈病、病毒性红叶病、纹枯病、粒黑穗病、腥黑穗病等。 实验实习一 杂粮作物病害识别与鉴定 一、目的要求 认识玉米、高粱、谷子三种作物主要病害的症状特点及病原菌的形态特征，掌握各种病害诊断特征，为今后开展病害的田间诊断和调查以及防治提供科学依据。 二、仪器用品 显微镜、幻灯机、投影仪、计算机及多煤体教学设备、载玻片、盖玻片、解剖针、挑针、纱布块、蒸馏水滴瓶、新刀片、徒手切片夹持物、革兰氏染色液一套、香柏油、二甲苯、镜头纸、0.1%升汞水、无菌水等。 三、实习材料 玉米主要病害（大斑病、小斑病、丝黑穗病、瘤黑粉病、炭疽病、茎腐病、弯胞霉叶斑病、纹枯病、褐斑病、灰斑病、矮花叶病、粗缩病、细菌性枯萎病），高粱主要病害（丝黑穗病、散黑穗病、坚黑穗病、炭疽病）、谷子主要病害（白发病、谷瘟病、粒黑穗病、纹枯病、叶锈病、病毒性红叶病、线虫病）的实物标本、新鲜材料、挂图、病原菌玻片、多煤体教学课的实物标本、新鲜材料、挂图、病原菌玻片、多煤体教学课件（包括幻灯片、录像带、光盘等影像资料）。 四、观察内容和方法 Ⅰ 玉米病害 玉米大斑病（Exserohilum turcicum） １.症状　该病在整个生育期都可以发生，但在中后期，特别是在抽雄后发生严重。主要危害叶片，严重时苞叶和叶鞘也可受害。感病的叶片上，病斑沿着叶脉扩展，形成黄褐色或灰褐色大小不等的长梭状斑，病斑中间颜色较浅，边缘较深。一般长约5～10cm，宽1～2cm左右，潮湿时病斑上密生灰黑色的霉状物。注意观察：①病斑的形状、色泽及大小；②病部是否出现灰色的霉状物；③不同抗病性品种的症状表现有何不同？ 2.病原　属半知菌亚门突脐蠕孢属真菌。分生孢子梗从气孔伸出，单生或2～6根束生，橄榄色，不分枝，圆筒形，直立或上部曲膝状，2～８个隔膜，基细胞膨大，顶端色较淡。孢痕明显。分生孢子梭形或长梭形,橄褐色,直或略向一端弯曲,有2～８个隔膜，顶端细胞钝圆或呈长椭圆形，基部细胞尖锥形，孢子的脐点突出。从材料的病斑处刮取少量霉层，制片镜检。仔细观察：①分生孢子梗的形态、色泽、长短及分隔等特点；②分生孢子的形状、大小、分隔等形态特征；③分生孢子的脐点是否突出于基细胞之外？④病部的霉层是病菌的什么结构？ 玉米小斑病（Bipolaris maydis） 1．症状 该病从苗期到成株期都可发病，但在抽穗灌浆期发生严重。主要危害叶片，严重时也可侵染叶鞘、苞叶、果穗及籽粒。叶部发病常从下部叶片开始,逐渐向上蔓延。病部初为水渍状小点，后变为黄褐色或红褐色，边缘颜色较深。叶部病斑因品种不同表现三种类型,第一种:`病斑椭圆形或长椭圆形,扩展受叶脉限制,黄褐色,有明显的紫褐色或深褐色边缘；第二种, 病斑椭圆形或纺锤形,扩展不受叶脉限制，灰色或黄色，一般无明显的边缘，有时病斑上出现轮纹；第三种，病斑为黄褐色坏死小点，这种坏死小点一般不扩展，周围明显有黄褐色晕圈。前两种病斑在潮湿的情况下产生灰黑色的霉层。注意观察：①叶片上是否有黄色的小斑点；②病部是否有灰褐色的霉层；③病斑的形状及大小，与大斑病的病斑有何区别？④不同抗病性品种的症状表现有何不同？ 2．病原 无性阶段属半知菌亚门平脐蠕孢属真菌，有性阶段属子囊菌亚门旋孢腔菌属真菌。无性阶段产生分生孢子梗及分生孢子，分生孢子梗2～3根束生，从叶片的气孔伸出，橄榄褐色至褐色，直或曲膝状，不分枝，孢痕显著，具３～15个隔膜。分生孢子长椭圆形，褐色，两端钝圆，多向一端弯曲，中间粗两端细，多6～7个隔膜。脐点凹陷。有性阶段可以看到黑色的子囊座，喙部明显，内部着生近圆筒性的子囊，基部有柄，内生4个线性、无色、彼此互相缠绕、呈螺旋状的子囊孢子。用刀片从材料的病斑处刮取少量霉层，制片镜检。注意观察：①分生孢子的大小、形状、色泽、分隔有何特点；②分生孢子梗的形状、色泽、分枝等形态特征；③在Sach，s培养基上置玉米叶、茎秆和籽粒,将小斑病菌接种于基物两端,在30℃ 左右培养,观察子囊座的形态特征。④分生孢子的脐点是否突出于基细胞之外？和大斑病菌的分生孢子的主要区别是什么？⑤病部的霉层是病菌的什么结构？ （三）玉米丝黑穗病（Sphacelotheca reiliana） 1．症状 属苗期侵入的系统性病害，在穗期表现典型症状，主要为害雌雄穗。病穗上的症状主要表现两种类型，黑穗型：除苞叶外，整个果穗变成黑粉包，内夹杂有丝状寄主维管束组织，外面包被白膜，白膜破裂后散出黑粉；变态畸形穗：雄穗花器变形，颖片呈多叶状，雌穗的颖片过度生长呈管状长刺，呈刺猬头状，没有明显的黑丝。注意观察病穗的症状，看里面是否夹杂有丝状物。 2．病原 属担子菌亚门孢堆黑粉菌属真菌。黑穗里的黑粉是病菌冬孢子。冬孢子黄褐色，暗紫色或赤褐色，球形或近球形，表面有细刺，冬孢子萌发产生三个分隔的先菌丝，侧生担孢子，担孢子无色，单孢，椭圆形。用挑针从病穗上挑取少量丝状物，制片镜检。注意观察：①孢子的形状、颜色、表面是否有微刺？②观察孢子在加有糖的蒸馏水中萌发的情况。 （四）玉米瘤黑粉病（Ustilago maydis） 1．症状 属局部侵染性病害。玉米在整个生育过程中植株的幼嫩组织都可发病，发病部位细胞强烈增生，体积膨大，形成肿瘤，呈球状、棒状、单生、串生或叠生，肿瘤外面包有一层白色薄膜，后期冬孢子形成，薄膜破裂，散出大量黑色粉末状的冬孢子。注意观察：①发病的部位；②病瘤的色泽、形状、质地等；③和丝黑穗症状有何区别？ 2．病原 属担子菌亚门黑粉菌属真菌。病瘤里的黑粉是病菌的冬孢子。冬孢子暗褐色或浅橄榄色，球形或椭圆形，表面有细刺状突起，冬孢子萌发产生四个细胞的先菌丝，顶端或分隔处产生四个担孢子。担孢子无色，梭形或者略弯曲。用挑针从病瘤上挑取少量黑色粉末物，制片镜检。注意观察：①冬孢子的形状、颜色、表面是否有微刺？②观察孢子在清水中或有其他营养液中萌发的情况。 （五）玉米茎基腐病（spp.） 1．症状 该病是由多种病原菌复合侵染造成茎基腐烂的一类病害的总称，根据发生时期、发病部位和症状特点又称为青枯病、枯萎病、萎蔫病、晚枯病、茎基腐等；根据致病菌种类不同有干腐型茎基腐、赤霉菌茎基腐、镰孢菌茎基腐、疫霉菌茎基腐等多种。因病原菌的种类、寄主抗病性不同和环境条件存在差异，因此其症状各具特点，但无论何种病原菌都能引起茎基部腐烂和青枯等症状。茎部症状：开始在茎基节间产生纵向扩展的不规则状褐斑，随后很快变软下陷，内部空松，一掐即瘪，手感十分明显。剖茎检查，组织腐烂，维管束呈丝状游离，可见白色或玫瑰红色菌丝，以后产生玫瑰红色菌丝的病秆表面可见蓝黑色的子囊壳。茎秆腐烂自茎基第一节开始向上扩展，可达第二、三节甚至全株。叶部症状：大体分为三种类型，即青枯型、黄枯型和青黄枯型，以前两种为主。青枯型也称急性型，发病后，叶片自下而上迅速枯死，呈灰绿色，水烫状或霜打状。黄枯型，也称慢性型，发病后叶片自下而上，或自上而下逐渐变黄枯死，注意观察病斑发生的部位，是否造成茎基腐烂？植株是否表现青枯症状？病株微管束呈何状态？ 2．病原 我国玉米茎腐病主要病原菌有以下几种： （1）禾谷镰孢菌（Fusarium graminearum） 属半知菌亚门镰刀菌属真菌。在高粱粒或麦粒上培养易产生大型分生孢子，大型分生孢子无色，镰刀形，多数是3～5个隔膜；不产生小型分生孢子和厚垣孢子。有性阶段为玉蜀黍赤霉菌，在麦粒上产生蓝黑色、球形的子囊壳，子囊棍棒形，子囊孢子纺锤形，双列斜向排列，1～3个隔膜。注意观察：①接种在PSA平板上于25℃和20瓦日光灯下12小时明暗交替照射培养，观察菌丝的形态，色泽，分隔有何特点？②将经PSA斜面培养的菌种转接于麦粒或高梁粒培养基上，在25℃培养6～7天，基物长满菌丝后，平铺于白瓷盘里，给予一定的光源照射处理，何种情况下产孢量最大？③观察分生孢子的形状、大小、色泽，子实体的形状特征，子囊壳、子囊及子囊孢子的形状和色泽。 （2）串珠镰孢菌（Fusarium moniliforme） 产生大、小两种分生孢子，大型分生孢子多3～5个隔，镰刀形；小型分生孢子串生，无色，卵圆形或纺锤形，单孢，少数双孢。在相同培养条件下，比较禾谷镰孢菌与串珠镰孢菌菌丝生长的速度，接种在PSA平板上于25℃和20瓦日光灯下12小时明暗交替照射，观察菌丝、分生孢子的形态、色泽等特征。 （3）瓜果腐霉菌（Pythium aphamideimatum） 菌丝发达，白色棉絮状，游动孢子囊丝状不规则膨大，小裂瓣状，分枝简单或复杂。游动孢子产生在泡囊内。注意观察游动孢子囊的形态特征以及泡囊的产生部位。 (4)玉蜀黍壳色单隔孢菌 （Diplodia maydis）分生孢子器球形或烧瓶形，分生孢子椭圆形，直或稍弯曲，橄褐色至褐色。 把病组织材料用无菌水冲洗干净后，保湿培养，待长出菌丝后，制片镜检，观察菌丝的形态、色泽、分隔及分生孢子的形状、大小、色泽，确定为哪一种病原菌所引起的。 （六）玉米弯孢霉叶斑病（Curvularia lunata） 1．症状 主要危害叶片，也可危害叶鞘和苞叶。病斑初为水渍状或淡黄色半透明小点，后扩大成圆形、椭圆形、梭形或长条状病斑。病斑形状及大小因品种抗性分为3类：①抗病形病斑（R）：病斑小，1～2mm，圆形、椭圆形或不规则形，中央苍白色或淡褐色，边缘无褐色环带或环带很细，最外围有狭细的半透明晕圈，以唐玉5为典型代表。②中间形病斑（M）：病斑小，1～2mm，圆形、椭圆形、长条形或不规则形，中央苍白色或淡褐色，边缘有较明显的褐色环带，最外围有明显的褪绿晕圈，以F28为典型代表。③感病形病斑（S）：病斑较大，长2～5mm，宽1～2mm，圆形、椭圆形或不规则形，中央苍白色或黄褐色有较宽的褐色环带，最外围具有较宽的半透明黄色晕圈，严重感病的植株叶片密布病斑，病斑偶有联合，引起全叶枯死。潮湿情况下，病斑正反面均可产生灰黑色的霉状物。注意观察：病斑发生的部位、形状、色泽；和小斑病有何区别？ 2．病原 属半知菌亚门弯孢霉属真菌。分生孢子梗暗褐色，较直或弯曲，单生或数根丛生，不分枝，有隔，顶部多呈屈膝状，顶端和侧面着生分生孢子；分生孢子淡褐色、灰褐色，棍棒形或椭圆形，少数呈“Y”型，向一端弯曲，多数分生孢子为3个隔膜4个细胞结构，中间两个细胞膨大，暗褐色，以第三个细胞为最，两端细胞较小，淡褐色。把采集的病叶保湿培养后，制片镜检。致意观察：①分生孢子梗的形状、色泽及分枝状况；②分生孢子的形状、大小、色泽及分隔情况。 （七）玉米纹枯病（Thanatephorus cucumeris） 1．症状 从苗期到成株期均可发病。主要危害叶鞘、叶片、果穗和茎秆。多从下部叶鞘开始发病，逐渐向上发展，叶鞘病斑近圆形或不规则形，边缘浅褐色，中部灰白色，有时病斑相连，形成较大的云纹形病斑，致使叶鞘腐败，叶片干枯。茎秆被害，病斑褐色，不规则，后期茎秆质地松软组织解体，露出纤维束，病株极易倒伏。果穗受害，苞叶上也产生云纹状大斑，严重时果穗干缩、霉变、穗轴腐败。注意观察：病斑发生的部位、形状、色泽，当天气潮湿时，在病斑表面尤其病叶鞘内侧是否产生菌丝和菌核？病斑的典型特征是什么？ 2．病原 有性世代属担子菌亚门亡革菌属真菌。自然条件下很少见。无性世代为立枯丝核菌。菌丝初无色，较细，分隔距离较长，后期菌丝细胞渐变粗短，颜色变为棕紫色或褐色。菌丝呈直角、近直角或锐角分枝，分枝处缢缩且有一横隔膜。培养2～3天后，在培养皿的周围可产生菌核，菌核初为白色，后变为黑褐色，不规则形，较紧密，表面粗糙。在PDA平板上培养,注意观察菌丝的色泽变化及菌核的形成过程有何特点？镜检菌丝的形态特征，观察该菌菌丝的典型特征是什么？ （八）玉米灰斑病（Cerospora zeae-maydis） 1．症状 主要危害叶片。在感病品种上病斑呈长方形（约2～4mmχ1～6cm），初期呈褐色，后期变为灰色长条病斑，与叶脉平行。该病典型的特征是病斑具有明显的平行边缘，病斑不透明，严重时病斑汇合连片，叶片枯死，叶片两面产生灰色霉层。注意观察：病斑发生的部位、色泽、形状，病斑有何特点？ 2．病原 属半知菌亚门尾孢属真菌。分生孢子梗3～10根丛生，暗褐色，1～4个隔膜，直或稍弯，孢痕明显。分生孢子倒棍棒形，细长，直或稍弯，无色，具有1～8个隔膜，基部倒圆锥形，脐点明显，顶端渐细，稍钝。注意观察分生孢子的形状、色泽及分隔。 （九）玉米褐斑病（Physoderma maydis） 1．症状 主要危害果穗以下的叶鞘和叶片。病斑多从叶鞘开始，初为圆形、椭圆形或线形，黄色，以后变为褐色或紫褐色，隆起成疱状。后期病斑表面破裂，散出黄褐色粉状物。注意观察病斑的发生部位、形状及色泽等特征，黄褐色粉状物为病菌的何种结构？后期病叶呈何状态？ 2．病原 属鞭毛菌亚门节壶菌属真菌。是玉米上的一种专性寄生菌，寄生在薄壁细胞内。休眠孢子囊壁厚，近圆形至卵圆形或球形，黄褐色，略扁平，有囊盖。注意观察休眠孢子囊形态特征。 （十）玉米锈病（Puccinia sorghi） 1．症状 主要危害叶片，受害部位初形成乳白色、淡黄色、后变褐色乃至红褐色的夏孢子堆，夏孢子堆表面破裂后，散出锈粉状的夏孢子，后期在夏孢子堆附近形成黑色的冬孢子堆。观察病斑的形状和色泽，表皮开裂情况，锈状物的排列方式，散生、聚生还是线状？ 2．病原 属担子菌亚门柄锈菌属真菌。夏孢子近球形或椭圆形，淡黄褐色，表面有细刺。冬孢子椭圆形或棍棒形,黑褐色，分隔处有缢缩，深褐色，顶细胞钝圆。在病斑上，用刀片刮取少量锈状物，制片镜检，观察夏孢子、冬孢子的形状、大小、色泽。 （十一）玉米全蚀病（Gaeumannomyces graminis） 1．症状 主要症状表现在根部，轻者根系变栗褐色至黑褐色，重者种脐基部和种子根变色，根皮坏死腐烂。幼苗发病仅限于根部，成株期地上部分也表现症状，叶片自下而上枯死，植株易倒伏，在植株生长后期根组织里的病菌菌丝继续发展并集结使根皮变黑发亮，并向根基延伸形成“黑膏药”和“黑脚”症状。注意观察：①病斑的发生部位、色泽、形状？②病株根茎部有何特点？ 2．病原 属子囊菌亚门顶囊壳属真菌。病菌在自然条件下子囊壳群集或散生，从病茎上挑取的子囊壳梨形，暗褐色，具短颈，顶端有孔口，周围生有褐色茸毛状菌丝。颈部穿透表皮外露，直或向一侧稍弯。子囊壳内有多数子囊，子囊棍棒形，无色，基部有柄，顶部有一折光性顶环，内有8个子囊孢子，束状排列。子囊孢子线形，无色，稍弯，一头钝一头尖，有3～8个隔膜。取病株，用刀片划开茎基节表皮内侧观察：①子囊壳、子囊及子囊孢子的形态特征；②切取病根黑皮组织经乳酚油透明镜检，观察菌丝的色泽和分枝分隔情况。 （十二）玉米炭疽病（Colletotrichum graminicolum） 1．症状 玉米整个生长期都可发生为害，可引起种苗萎蔫、颈腐、根腐、叶枯、顶枯及粒腐等症状。主要发生在玉米的中后期植株中、下部叶片上，典型症状是初期病斑水浸状，半透明，圆形至不规则形，后变成梭形，中央淡褐色，边缘深褐色，上密生小黑点。注意观察：①病斑发生的部位、色泽、形状；②病斑上有小黑点吗？③病苗呈何状态？ 2．病原 属半知菌亚门炭疽菌属真菌。分生孢子盘，散生或聚生，分生孢子盘中有许多褐色的刚毛。分生孢子梗圆柱形，无色单孢，产孢方式为内壁芽生—瓶梗式，分生孢子香蕉形，无色单孢。用挑针从有病组织上挑取小颗粒状物制片镜检，观察：①分生孢子盘的形状、色泽及着生部位；②分生孢子梗和分生孢子的形状、大小、色泽；③分生孢子盘上有无刚毛，刚毛的形态特征如何？④病部颗粒状物为病菌的何种结构？ （十三）玉米矮花叶病（Dwarf mosaic of corn） 1．症状 在玉米整个生长期都可发生，以苗期侵染发病最重，抽穗后发病受害较轻。典型症状是在发病初期，心叶基部叶脉间出现许多椭圆形褪绿小点，以后叶片粗脉之间形成长短不一颜色深浅不同的褪绿条纹，脉间叶肉失绿变黄，叶脉仍保持绿色，形成明显黄绿相间的条纹症状。病株严重矮化，生长缓慢，不能抽穗而提早枯死。注意观察叶片的症状表现特点，田间症状诊断叶部的主要鉴别特征，病株呈何状态？ 2．病原 属马铃薯Y病毒属的玉米矮花叶病毒（MDMV））。病毒粒体线状，略弯曲。采用氯仿处理，聚乙二醇沉淀和低速离心分离法获得病毒粗提纯液，进行血清学试验；用病叶组织制超薄切片，观察病毒粒体的形状；是否形成内含体？ （十四）玉米粗缩病（Rough dwarf of corn） 1．症状 在整个生长期都可感染发病，以苗期发病危害严重。玉米出苗后即可感病，5～6叶时才开始表现症状，病株先在心叶中脉两侧的细脉间出现透明的虚线条点，以后透明线点增多，叶背主脉上产生长短不等的白色蜡状突起（即脉突），叶片浓绿，表面粗糙；病株节间缩短，植株严重矮化。重病株不能抽穗或形成畸形穗。注意观察病株叶片有何变化，田间症状诊断的主要鉴别特征，病株呈何状态？同矮化叶病的症状有何区别？ 2．病原 属植物呼肠孤病毒属的玉米粗缩病毒（MRDV）。病毒粒体球形，基因组为12条双链RNA，病毒粒体极不稳定，在分离纯化过程中蛋白质衣壳极易脱落，故粒体大小报道的颇不一致，结构也未完全清楚。观察病毒粒体的电镜照片。 （十五）玉米细菌性茎腐病（Erwinia　chrysanthemi） 症状 主要危害中部茎秆和叶鞘。叶鞘上病斑不规则形，边缘浅褐色，水渍状。病部腐烂，软化，散出臭味。潮湿时，病斑以上易倒折，出黄褐色腐臭菌液。注意观察病斑的发生部位、形状等特征。 病原 属原核生物界欧文氏菌属细菌。菌体杆状，两端钝圆，单生，偶成双链，革兰氏染色阴性，周生鞭毛，无芽孢和荚膜。菌落圆形，低度突起，乳白色，稍透明。观察菌体的形态，染色反应及培养性状。 （十六）玉米细菌性萎焉病（Erwinia　stewartii） 1．症状 维管束病害，细菌堵塞维管束，轻病株矮化，重病株萎蔫死亡，发病以开花前后最明显，病株叶片上产生不规则、波状淡绿色条纹，后期变褐枯死。基部茎髓中空。注意观察：①用刀片切病株的导管，观察切口处是否流出黄色的脓液？是否可以拉成丝状？②病株的地上部分呈何状态？ 2．病原 属原核生物界欧文氏菌属细菌。菌体杆状，无鞭毛不游动。革兰氏染色阴性。在肉汁胨琼脂培养基上产生乳黄色、柠檬黄色或桔黄色的菌落，菌落可呈不同程度的隆起，流体状而在斜面上易滑落。用解剖刀切取病维管束，将溢脓流在载玻片上的水滴中，经涂片、固定、革兰氏染色后镜检。注意观察菌体的形态，染色反应及培养性状。 Ⅱ 高粱病害 （一）高粱丝黑穗病（Spoisorium reilianum） 1．症状 主要发生在穗部，抽穗时整个穗部变成一个大黑包，少数情况仅部分受害，病穗外部有一层白色薄膜，膜破裂，散发出大量的黑色粉末，里面夹杂有残存黑色的丝状微管束组织。注意观察病穗的形态,是否有丝状物,病株呈何状态，是否矮花？ 2．病原 属担子菌亚门孢堆黑粉菌属。黑穗里的冬孢子集结成黑褐色的孢子团,冬孢子卵形或球形,暗褐色,表面密生细刺。有时在冬孢子堆里混有不育细胞，不育细胞无色透明，表面光滑。冬孢子萌发产生先菌丝或侧生担孢子。用挑针从病穗上挑取少量粉状物，制片镜检。注意观察冬孢子的形状、颜色、表面是否有微刺？孢子团的集结状况，是否有不孕细胞？ （二）高粱散黑穗病（Sorisporium cruenta） 1．症状 主要为害穗部，破坏花器，子房内形成黑粉，为病菌的冬孢子，病粒未破裂前有灰白色薄膜，孢子成熟后，膜即破裂，散出黑粉，并露出长而弯曲的黑色中柱，为寄主的维管束残留组织，此为散黑穗病的主要特点。注意观察病穗的形态特征，与黑穗病的如何区别；主要的鉴别特征是什么？病株呈何状况，是否矮花，分蘖是否增多？ 2．病原 属担子菌亚门轴黑粉菌属真菌。冬孢子卵圆形或圆形,暗褐色,表面隐约有网纹。冬孢子萌发产生4个细胞的先菌丝，其上侧生担孢子。用挑针从病穗上挑取少量丝状物，制片镜检。注意孢子的形状、颜色、表面是否有网纹？观察孢子在各种营养液中萌发的情况。 （三）高粱坚黑穗病（Sorisporium sorghi） 1．症状 主要为害穗部，一般全穗籽粒都变成卵形的灰包，外膜坚硬，不易破裂或仅顶端略微裂开，内部充满黑粉，中柱短而不显著，护颖较健株稍短。比较该病与散黑穗病的植株矮化程度、病粒的外膜的坚硬度、中柱的裸露情况是否一样？有何区别？ 2．病原 属担子菌亚门轴黑粉菌属真菌。冬孢子圆形或近圆形,黄褐色至褐色,表面细刺不明显。冬孢子萌发产生先菌丝，先菌丝具有2～3个隔膜，顶生或侧生1至数个担孢子。用挑针从病材料上挑取少量粉状物，制片镜检。注意孢子的形状、颜色、表面是否有微刺？ （四）高粱炭疽病（Colletotrichum graminicola） 1．症状 主要为害叶片、叶鞘和穗，也可侵染茎部和茎基部。叶片上形成梭形病斑，中央深褐色，边缘紫红色，其上密生小黑点，此即病原菌的分生孢子盘。常先发生于叶片的端部，发生严重时，叶片病斑连片或全叶干枯死亡。在穗部，可侵染小穗枝梗以及穗颈或主轴，造成籽粒灌浆不良甚至颗粒无收。注意观察病斑发生的部位、色泽、形状、有无病征，病苗呈何状态？ 2．病原 属半知菌亚门炭疽菌属真菌。分生孢子盘椭圆形，内有许多褐色的刚毛，散生或聚生在病斑的两面。分生孢子梗圆柱形，无色单孢，产孢方式为内壁芽生—瓶梗式，分生孢子新月形，无色单胞，具一油球。用挑针从有病组织上挑取小颗粒状物制片镜检，观察分生孢子盘及分生孢子梗的形态，分生孢子的形状、大小、色泽，分生孢子盘上有无刚毛？刚毛的形状、色泽、分隔情况如何？病部颗粒状物的小黑点为病菌的何种结构？ （五）高粱大斑病（Exserohilum turcicum） 1．症状 主要危害叶片。形成长梭形的大病斑，边缘紫红色，中央淡褐色或紫色，无黄色晕圈，病斑正反面可产生一层黑色霉状物。严重时，叶片自上而下枯死。注意观察病斑发生的部位、色泽、形状，黑色霉状物为病菌的何种结构？ 2．病原 属于半知菌亚门突脐孢属真菌。分生孢子梗单生或束生，褐色，直立或呈屈膝状，基部膨大，在顶端和折点处具有明显的孢痕，分生孢子梭形，褐色，中央较宽，两端渐窄，具有3～8个隔膜，孢子多数正直。在病斑表面用刀片刮取少量霉状物，制片镜检，观察分生孢子梗的形态、色泽、分枝，分生孢子的形状、色泽、分隔等。孢痕及脐孢是否明显？ （六）高粱青霉颖枯病（Penicillium oxalicum Alternaria alternata） 1．症状 主要危害穗部的籽粒、颖壳及枝梗。籽粒表面皱缩，色泽发暗光滑度下将。颖壳由绿色变为褐色或灰色，颖壳与枝梗连接处组织逐渐变为红色或暗红色，坏死干枯。枝梗上形成不规则红色病斑。注意观察病斑的位置、色泽，病粒与健粒有何区别？ 2．病原 属半知菌亚门的青霉属和链格孢属的真菌联合侵染引起的，以青霉为主，链格孢菌后续侵染所致。青霉菌：分生孢子梗帚状枝非对称形，具有2～3个梗枝，偶有单轮生或具有副枝的帚状枝。分生孢子椭圆形，无色，光滑。链格孢菌：分生孢子梗单生或数根束生，不分枝或偶有分枝，1～4个隔膜，褐色，正直或屈曲，分生孢子3～10个串生，梭形、椭圆形，形状很不一致，褐色至橄榄色，有2～3个横隔膜，0～5个纵隔膜，隔膜处有缢缩，无喙或长短不一，多数色淡。这两种菌在Sach，s 培养基上培养一星期左右，观察菌落的形态特征，比较两种菌的质地、色泽有何差别？用刀片在病材料组织中刮取少量霉状物，制片镜检，观察两种菌的分生孢子梗的形状、分枝、色泽，分生孢子的形状、色泽、是否都有横、纵分隔？ （七）高粱紫斑病（Cercospora sorghi） 1．症状 危害叶片，叶鞘也可受害，叶片病斑短圆形或椭圆形，中央淡紫色，边缘紫红色，多数限于叶脉之间，大小2～8×1～3毫米。一般不产生霉层。严重时病斑汇集成云形，布满叶片，导致叶片早枯。叶鞘上病斑椭圆形。注意观察病斑的形状、色泽、大小，病斑上是否有黑色霉层？ 2．病原 属半知菌亚门尾枝孢属真菌。分生孢子梗束生，近棒形或圆柱形，无色，偶有分隔，孢痕明显。分生孢子线形至鞭形，无色，有3～9个隔膜，顶端较尖，基部截形。从病斑上刮取病菌制片镜检。注意分生孢子梗的形态特征，分生孢子的形状、分隔，顶端和基部有何特点？ Ⅲ 谷子病害 （一）谷子白发病（Sclerospora graminicola） 1．症状 为系统性病害，谷子各个生育阶段和不同部位均可受害。出苗前幼芽在土中变褐色，后腐烂，称“芽腐”；病叶上出现黄色不规则条斑，潮湿时叶背面出现灰白色霜霉状物，称“灰背”；病株抽出的新叶可继续感病，病叶上产生与叶脉平行的淡黄色条纹斑，背面亦可产生灰白色霜霉状物，心叶不能抽出展开，卷筒直立向上十分醒目，俗称“白尖”；白尖不久变褐枯死，直立田间，俗称“枪杆”；残存的灰白色叶脉所形成的细丝变白卷曲，散乱成白发状，俗称“白发”；病穗上的内外颖变成小叶状丛生，穗短缩肥肿，不能结实，呈刺猬状直立田间，俗称“看谷老”。注意观察不同时期的症状特点，发病的部位，色泽，白发状丝状物为何物？病株呈何状态？ 2．病原 属鞭毛菌亚门指梗霉属真菌。在叶片的“灰背”症状上出现的霜霉状物为病菌的无性阶段产生的孢囊梗和游动孢子囊，进入“白尖”阶段开始有性生殖，卵孢子成熟。菌丝体无色透明，无隔膜，有分枝，菌丛灰白色。孢囊梗单生或束生，无色，无隔膜，肥壮，基部不膨大，顶端膨大分枝3～4次，每个小梗顶生一个游动孢子囊。游动孢子囊卵圆形或椭圆形，无色透明。卵孢子球形，栗褐色。用挑针在病组织材料上挑取少量黄色的粉末物，制片镜检，观察卵孢子的形状、大小、色泽，是否有卵周质？ （二）谷瘟病（Pyricularia setariae） 1．症状 谷子从苗期到成株期各生育阶段都可侵染发病，引起苗瘟、叶瘟、节瘟、穗颈瘟和谷粒瘟。其中危害重的是叶瘟、节瘟和穗颈瘟，叶片上形成的病斑梭形或椭圆形，边缘深褐色，中部灰白色或灰褐色，潮湿时，叶背产生一层灰霉。穗颈受害造成死穗，小穗柄受害变成“死码”。注意观察病斑发生的部位、色泽、形状，受害的穗轴是否变色，病穗和健穗的籽粒有何不同,病苗呈何状况? 2．病原 属半知菌亚门梨孢菌属真菌。分生孢子梗单生或丛生，无色或基部稍呈淡褐色，不分枝，2～3个隔膜，基部膨大，顶端较尖，产孢方式为全壁芽生—轴式，孢痕明显。分生孢子洋梨形，梭形，倒卵形，无色透明，多数具2个隔，基部细胞钝圆，顶端细胞较尖。用刀片在病组织材料上刮取少量灰色的霉状物，制片镜检，观察分生孢子梗的形状、色泽、分枝、分隔情况，分生孢子的形状、大小、色泽，隔膜处有无缢缩？ （三）谷子粒黑穗病（Ustilago crameri） 1．症状 主要危害穗部，通常全穗发病。病穗初为灰绿色,后期变为灰白色,少数情况下部分籽粒受害,被害籽粒稍大,卵形或球形,外被一层灰膜,内含大量的黑色粉末,膜质坚韧,不易破裂。注意观察病穗颜色的变化，受害籽粒的大小与健粒有何不同。 2．病原 属担子菌亚门黑粉菌属真菌。冬孢子堆球形或卵圆形，外包以灰白色被膜，除籽粒外颖不受侵害外，整个子房和小花的基部全部遭受侵染破坏。冬孢子卵形、近圆形、椭圆形或多角形，淡黄褐色至橄榄色,表面光滑。冬孢子萌发产生1～2根先菌丝，菌丝可分枝不易产生担孢子。用挑针从病穗上挑取少量粉末状物，制片镜检。注意观察冬孢子的形状、颜色、表面是否有微刺？观察孢子在各种营养液中萌发的情况。 （四）谷子纹枯病（Rhizoctonia solani） 1．症状 主要危害叶鞘。在叶鞘上产生近圆形、不规则形或云纹状的病斑，有时病斑相连，形成较大的云纹形病斑，病斑边缘暗褐色，中部淡褐色。受病叶鞘最后干枯呈灰绿色到苍绿色，上面的叶片也变色枯死。注意观察天气潮湿时，在病斑表面尤其病叶鞘内侧是否产生菌核？病苗呈何状态？ 2．病原 无性阶段属接合菌亚门丝核菌属真菌。在培养基上菌丝生长迅速，菌落初呈白色，渐变桔红色到褐色，菌落边缘不整齐，在菌丝上初生白色、疏松的小菌丝团渐变成褐色菌核。在PDA培养基上培养，观察菌落的质地、色泽，菌丝的形状、色泽随着时间的变化及分枝，菌核形成的过程，人工菌核与自然菌核有何区别？ （五）谷子锈病（Uromyces setariae-italicae） 1．症状 主要危害叶片和叶鞘，在叶片上产生夏孢子堆，长椭圆形，深褐色，散生，破裂后散出黄褐色粉末，周围表皮翻起，后期产生黑色的冬孢子堆，埋于表皮下，破裂后散出黑色粉末。注意观察病斑的形状、色泽、夏孢子堆的排列方式。 2．病原 属担子菌亚门单胞锈菌属真菌。夏孢子球形、近球形或卵原形，黄褐色，表面有细刺。冬孢子黑色，球形、倒卵形，黄褐色，柄无色或淡色，易消失，顶端有芽孔。用刀片从病组织材料上刮取少量粉末状物，制片镜检。注意观察夏、冬孢子的形状、颜色、表面是否有微刺？观察冬孢子在各种营养液中萌发的情况。 （六）弯孢霉叶斑病（Curvularia lunata） 1．症状 主要危害叶片，在叶片上产生深褐色的小斑，逐渐扩大形成灰褐色和深褐色病斑，多数病斑汇合形成不规则的波状狭条，引起叶片大片枯死，随后在穗和穗轴上生墨绿色至黑色的霉状物，籽粒虽成熟但有霉斑。注意观察病斑发生的部位,形状、色泽。 2．病原 属半知菌亚门弯孢霉属真菌。寄主表面的墨绿色霉层，即病菌的分生孢子梗和分生孢子，分生孢子梗浅褐色，单生，有时2～3根束生，2～3个隔膜，顶端曲折，基部膨大，产孢方式为内壁芽生-孔生式。分生孢子灰褐色，3个隔膜，自基部向上地三个细胞较大，色泽较深，两端细胞色浅，形状不对称，稍弯曲。用刀片在病组织材料上刮取少量灰色的霉状物，制片镜检，观察分生孢子梗的形状、色泽、分枝、分隔情况，分生孢子的形状、大小、色泽，隔膜处有无缢缩？ （七）谷子红叶病（Millet red leaf） 1．症状 因品种和感病时间不同而异。在紫秆品种上，叶片和叶鞘的向阳面颖芒变红变紫，十分显著。变红的叶片自尖端向下逐渐干枯，最后叶鞘也转变成深红色而干枯。病穗的颖片和芒也变红色或紫色。在青秆品种上，病叶顶端开始变黄并在绿色叶片上产生黄色条纹，最后全叶黄花干枯。无论那种品种，病株除了变色外，还表现矮化和各种畸形，如：叶面皱缩，叶片边缘成波状，顶叶簇生，叶片直立，节间缩短，不能抽穗，根系发育不良，易拔起，纵剖根茎基部，可见韧皮部变褐坏死。注意观察：叶片的色泽有何变化，病株呈何状态，拔起病株，纵剖根茎基部，韧皮部是否变色坏死？ 2.病原 病原为大麦黄矮病毒（Barley yellow dwarf virus）的一个株系。病毒粒体球形，直径约28nm。观察病毒的电镜照片。 （八）谷子线虫病（Aphelenchoides besseyi） 1.症状 主要症状表现在穗部，自开花后症状明显，病株小花呈暗绿色，逐渐变为黄褐色，最后呈暗褐色。有时小花不发育，不能开花或开花后子房、花柱、花丝萎缩不能结实，颖片多张开，形成多光泽的尖形秕粒。注意观察：病株的颖壳是否变色？植株呈何状态？ 2.病原 为谷滑刃线虫。雌雄同型，均为蠕虫型。体细长透明，前端稍细，尾渐细小，末端钝，头外突与身体分界明显。口器呈突出状，吻针强大，基部膨大呈节球状，中食道球发达，椭圆形，食道与肠的界限不明显，排泄孔不常见。观察线虫的形态特征，口器的类型，虫体的长短等。 五、实习作业 1.绘玉米小斑病菌、玉米大斑病菌、玉米丝黑穗病菌、玉米纹枯病菌、玉米锈病菌、高粱散黑穗病菌、高粱坚黑穗病菌、高粱炭疽病菌、高粱紫斑病、谷子白发病菌、谷瘟病菌、谷子线虫、粒黑穗病菌的形态图（任选五个）。 2.列表比较玉米大、小斑病的症状区别和病原菌的特征。 3.比较玉米丝黑穗和瘤黑粉病的症状异同点。 3.列表比较高粱散黑穗病、丝黑穗病、坚黑穗病的症状区别。 4.列表比较谷子叶斑类病害（谷瘟病、谷子叶锈病、谷子纹枯病等）的的症状区别。 实验实习二 杂粮作物田间病情调查 一、目的要求：调查了解当地杂粮作物玉米、高粱、谷子发生病害的主要种类，掌握杂粮作物主要病害的调查方法与防治技术，为杂粮作物病害的调查研究、品种抗病性评价以及制定防治措施奠定基础。 二、仪器用品：扩大镜、记录本、标本采集用具及其他用品和用具。 三、内容和方法： （一）杂粮作物病害的普查 （以小组为单位进行调查）。 调查内容 结合当地具体情况，分别对玉米、高粱、谷子病害的发生种类、分布特点、危害程度以及发病条件等基本情况进行普查，从而为制定杂粮病害防治计划提供依据。 调查时间 杂粮作物病害的普查，应分别从苗期、成株期、生长后期进行三次调查，以利于掌握杂粮病害发生的全面情况。 调查方法 结合地块情况及病害在田间分布的特点，可采用五点取样、随机取样等方法，每点调查50～100株（叶、穗等），统计各种病害的发病率。并分别记入下列表格内： 杂 粮 病 害 普 查 表 调查地点 作物种类 调查日期 田 块 号 地 势 土 质 水肥 条件 品 种 种子 来源 播 期 调查时生育期 发 病 率 危害 程度 备 注                玉米小斑病病情调查 1.玉米小斑病的普查 以小组为单位进行调查，可结合生产实习进行。 主要任务 调查当地玉米小斑病害的发病程度以及发病条件等基本情况，从而为当年和来年的防治工作提供科学依据。 调查时间：调查时间不能过早也不能过晚。调查过早，病害尚没有达到发病盛期，看不出病害的严重程度；调查过晚，由于自然干枯死亡将给病害调查带来困难。实践证明，玉米小斑病的调查，应以玉米吐丝后15～20天为易。 调查方法 选择病害发生程度不同的田块，在不损坏庄稼的原则下，于田间进行五点取样或随机取样5～10个点，每点随机选取50株，仔细检查，统计病株率及病情指数。并将调查结果记于表内。 玉米小斑病害发生基本情况调查表 地块名称 调查日期 品种名称 种子来源 土壤类型 耕作情况 施肥情况 地温变化 播种时期 栽培管理情况 前茬作物 防治措施 玉米小斑病病情调查表 调查 地点 地块 代号 调查 总株数 发病 株数 病株率 （%） 病情 指数 备 注           2．玉米小斑病危害程度调查 主要任务：重病田、防治实验田、抗病育种圃均需进行危害程度的调查，以明确不同栽培方式、不同防治措施及品种之间的抗病性差异。 调查方法：病害盛发期时，对上述不同的玉米地块的小斑病进行详细调查，统计发病率、病情指数以及病株增长率和产量损失率等资料，作为分析病情轻重的依据。并将调查结果记于表内。 玉米小斑病危害程度调查 调查 品种 调查日期 调查 地点 地块 代号 调查 总株数 发病 株数 病株率 （%） 病情 指数 亩产量 （kg） 损失率（%） 备 注   CK             3.玉米品种对小斑病的抗病性调查 调查内容：通过调查进一步明确不同玉米品种之间对小斑病的抗病性情况，为抗病育种工作和生产上合理利用抗病品种提供依据。 调查方法：玉米品种对小斑病的抗性，有三种不同的表现。一种是病斑数的差异，在田间的表现是叶片上病斑的数目较少，病斑的大小和形状没有明显的不同，在苗期不容易测定。另一种表现为病斑的大小，感病的病斑大，抗病的病斑小，苗期和成株期都可以看到这种差异。还有一种是病斑型抗性，表现在病斑形状的不同，病斑型抗性的品种，在叶片上形成褪绿斑或有晕圈的坏死斑，病斑上很少产生孢子，在苗期和成株期都可看到这种差异。可根据实际情况选择其中之一或几种作为调查量纲。调查可分为田间自然发病田调查和人工接种调查测定，或二者结合进行更好。一般在心叶期到抽丝期在果穗上下两叶,每份材料调查20片叶的严重度分级,或定点取一定的株数进行全株叶片调查，分别计算病情指数,并根据情况测量20个病斑长度(毫米),计算平均长度。 自然发病田和大田人工接种调查测定：玉米品种或品系的抗性，可以在自然发病田观察，或加以人工接种效果更好。自然发病田调查，应在大田成株期定期定点，调查不同品种对小斑病的病斑数或病斑大小或病斑型的抗性，并认真做好记载。大田人工接种调查测定，可在田间专设鉴定病圃，按要求种植需要鉴定的品种，并种植若干感病品种作为对照。小斑病属于气流传播的病害，每一品种鉴定的株数至少在20～50株之间。在抽雄前，田间见有病斑时进行人工接种。测定时，将少量粉状病叶组织（即从感病品种上采取的病叶，在空气中充分干燥后磨成粉末，在低温干燥条件下保存）或人工繁殖的菌种，放在喇叭口，或撒在叶面上，最好是在降小雨时或降雨前，或者有露水的时候接种，在整个生长季节，可以接种二三次。另外，少量植株的大田接种，也可以将孢子悬浮液喷叶面或者灌在喇叭口中，定期定点，调查不同品种对小斑病的抗性，并认真做好记载。最后进行统计分析，确定品种的抗病类型。 苗期接种调查测定：此方法选择孢子多和致病性较强的菌株，在培养基上繁殖，洗下孢子配成悬浮液。病叶采回保湿，促使孢子产生，也可用来进行接种。孢子悬浮液喷在幼苗上，保湿12～16h，接种7～14d记载玉米小斑病病斑的大小和形状，并进行统计分析，确定品种的抗病类型。苗期接种只适用于测定品种病斑型的抗性，根据幼苗病斑形状（即病斑反应）确定抗性。 4．玉米小斑病调查记载和统计方法 玉米小斑病病情指数积及发病面积百分率与病害的发病程度 玉米小斑病病情指数积及发病面积百分率与病害的发病程度区分标准表 分级标准 轻发生 中偏轻 中等 中偏重 大发生   1 2 3 4 5  乳熟期病情指数 发生面积占播种面积百分比(%) ＜10 ＜20 10～15 20～30 16～20 31～50 21～40 51～60 ＞40 ＞60   玉米小斑病害严重度分级标准及抗性评价标准： 严重度分级标准：根据成株期发病程度分为10级，先确定植株基部到顶部一半的地方作为中点。病害从基部发展到中点，作为5级，中点以下分为1～4级，中点以上分为6～9级，完全不发病的为0级。每个级别发病情况如下： 0级 不发病 1级 抗病，只在最下面叶片有少数分散的病斑 2级 抗病，最下面叶片轻度发病，下面第二叶片上有分散的病斑 3级 抗病，下面第三张叶片轻度发病，最下面叶片发病中等或较重 4级 中抗，下面叶片中度到轻度发病，扩展到中点，中点下叶片轻度发病或只有分散的病斑 5级 中感，下面叶片严重发病，中点下叶片轻度或中度发病，中点以上叶片不发病 6级 中感，植株下面1/3部分严重发病，中点叶片中度发病，中点以上叶片有零星病斑 7级 感病，中点和中点下叶片严重发病，上面病害扩展到剑叶下面的叶片，或剑叶也有少量侵染 8级 感病，中叶和中叶下叶片严重发病，植株上部1/3部分中度或严重发病，剑叶发病显著 9级 高感，所有叶片都严重发病，穗状花序也有一定程度发病 抗性评价标准： （1）根据平均级别：调查结果计算平均结果，再按平均级别0级为高抗（HR），1～3级为抗病（R），4级中抗（MR），6级中感（MS），7～8级感病（S），9级为高感（HS）。 （2）根据病情指数：调查结果计算平均病情指数，再按平均病情指数0～5高抗（HR），5.1～15中抗（MR），15.1～30中感（MS），30以上高感（HS）。 （3）根据病斑反应：抗病(R)：褪绿斑点或褐点；中抗(MR)：褐斑较小,椭圆形；中感(MS)：褐斑较大,椭圆至梭形,周围黄色晕纹；感病(S)：灰褐色大病斑,周围黄色至灰色晕纹。 玉米茎腐病的调查 （以小组为单位进行调查） 1．玉米茎腐病的普查 （以小组为单位进行调查） 主要任务 调查当地玉米茎腐病的危害程度以及发病条件等基本情况，从而为当年和来年的防治工作提供科学依据。 调查方法 选择发病程度不同的田块，在不损害庄稼的原则下，于田间进行五点取样或随机取样5～10各点，每点随机拔取植株50株左右，仔细检查病害发生的程度，统计病苗率及病情指数，将调查结果记于表内。 玉米茎腐病害发生基本情况调查表 地块名称 调查日期 品种名称 种子来源 土壤类型 耕作情况 施肥情况 地温变化 播种时期 栽培管理情况 前茬作物 防治措施 玉米茎腐病病病情调查表 调查 地点 地块 代号 调查 总株数 发病 株数 病株率 （%） 病情 指数 备 注           2．玉米茎腐病危害程度调查 （1）主要任务：重病田、防治实验田、抗病育种圃均需进行危害程度的调查，以明确不同栽培方式、不同防治措施及品种之间的抗病性差异。 （2）调查方法：病害盛发期时，对上述不同的玉米地块的茎腐病进行详细调查，统计发病率、病情指数以及病株增长率和产量损失率等资料，作为分析病情轻重的依据，并将调查结果记于表内。 玉米茎腐病危害程度调查 调查 品种 调查日期 调查 地点 地块 代号 调查 总株数 发病 株数 病株率 （%） 病情 指数 亩产量 （kg） 损失率（%） 备 注   CK             3.玉米品种对茎腐病的抗病性调查 （1）调查内容：通过调查进一步明确不同玉米品种之间对茎腐病的抗病性情况，为抗病育种工作和生产上合理利用抗病品种提供依据。 （2）调查方法：调查可分为田间自然发病调查和人工接种调查测定，或二者结合进行更好。可根据实际情况选择其中之一进行调查。人工接种接种物的制备，从田间采回病株，在PDA培养基上分离菌种，接种前转移到米饭培养基上扩大培养作菌源备用。 （3）自然发病田调查，应在大田成株期定期定点，根据具体情况，采用不同的取样方法，调查不同品种对茎腐病的抗性，并认真做好记载。 （4）人工接种测定：人工接种调查测定，可在田间专设鉴定病圃，按要求种植需要鉴定的品种，并种植若干感病品种作为对照。也可在室内进行。具体接种方法有： ① 茎基部接种：可以采用牙签法、注射法和打孔法。接种时间均在开花后两周进行，4周后剖茎调查。 1）牙签法：将木制牙签煮沸消毒30分钟，然后放在装有培养液的试管里常规灭菌接种和培养使牙签带菌，接种时将牙签直接插入茎组织。 2）注射接种：将孢子悬浮液注射于茎基的第三茎节或穗以下茎节内。 3）打孔法：在玉米第三节处钻一小孔洞，将长满菌丝的麦粒菌剂放入洞里，并用棉团封住洞口保湿。 ②根部接种：可分为苗期接种法和成株期接种法两种。 苗期接种法：将接种物按1%～3%比例与灭菌土混合配制成菌土，然后其播种于土里，长到4～5叶期拔苗做发病调查，病情分级主要根据根部病斑多少和根群变色程度及地上部长势。 成株期接种法：在玉米散粉盛期进行，在距茎基部10cm处扒开两侧表土露出根系，将接种物撒在根上覆土浇水保湿。接种量为每株玉米130g接种物。 4．玉米茎腐病调查记载和统计方法 （1）玉米茎腐病病株率与发病程度区分标准 玉米茎腐病病株率与发病程度区分标准表 分级标准 轻发生 中偏轻 中等 中偏重 大发生   1 2 3 4 5  病株率(%) 5～8 8.1～15 15.1～23 23.1～30 >30   玉米茎腐病严重度分级及抗性评价标准 严重度分级标准： ① 成株期调查分级标准: 乳熟末期至收获前一周调查整株叶片枯死情况并结合剖茎检查接种茎基部组织变色程度.(王铨茂等) 0级 全株无病,茎基部内接种部位组织无反应 1级 少数叶片褪绿,茎基内接种部位组织变淡褐 2级 少数叶片枯死,茎基内接种部位组织扩大变褐 3级 病株稍矮,多数叶片枯死，茎基内接种部位扩大到整个组织变褐 4级 病株矮化，整株枯死,茎基内接种部位整个组织变褐或成空秆 ②剖茎调查分析标准 0级：接种处茎髓部不变色 1级：茎髓部组织腐烂变色面积占该茎节面积的1%～25% 2级：同上占26%～50%； 3级：同上占51%～75%； 4级：同上占76%～100%； 5级: 侵染扩展到邻近茎节处； 6级：植株死亡。 苗期调查分级标准 0级：植株正常生长，无病； 1级：植株生长基本正常，但根部可见少量病斑，病斑面积占根表总面积1/4以下，目测根群颜色白中有褐； 2级：植株生长衰弱，叶色变浅，株高变矮，仅及对照的3/4，侧根少而短，无须根，病斑连片，病斑面积占根表总面积1/4～1/2，目测根群颜色白、褐相当； 3级：植株生长极不正常，地上部可见青枯～黄枯症状，株高仅为正常的1/2，侧根极少，病斑面积占根表总面积1/2～3/4，目测根群颜色褐中有白； 4级：种子发芽但未出苗，几乎窒息而死，布满病斑，根为棕褐色。 抗性评价标准： （1）调查结果计算平均结果，再按平均级别0～1级为抗病（R），2级中抗（MR），3级中感（MS），4级和5级为感病（S）。 （2）调查结果计算平均病情指数，再按平均病情指数0～5高抗（HR），5.1～15中抗（MR），15.1～30中感（MS），30以上高感（HS）。