第捱章 名酶制忌生产
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常?孢子埂液用50 ml牺生理盐巷洗下;;＂ 种?痉发酵篷聩逛艺坯方
种子3m3 烦30 m?
总配鄙 基上换?
豆?粉 4 ==>.5 4 22?7
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换同阶段通风比为：
种子罐 0-10小时，1,1.3； 10-14小时 1:1.45
发酵罐 0-12小时，1,0.74；12小时以后1:1.46-1.1
中间补料 12小时后，每隔1小时补料一次直至多40小时左右。
pH高于6.5,菌体空泡多，意味着出现衰老，多补一些。补料结束后6-8小时，升至7.5，营养细胞80%不空泡，酶活不增加，放罐。
补料优点：（低浓度发酵和高浓度补料）
1、 有利于菌体生长产酶
2、 发酵后残糖、残氮低，便于提取
3、 高浓度补料可以保持环境稳定，延长产酶期，增强菌体产酶的诱导作用，增加产酶量。
三、提取工艺 发酵液的预处理见P214-218，P226
酶的提取原理：——蛋白质的沉淀作用
（1） 利用酒精、丙酮等有机溶剂作为脱水剂因为它们的亲水性大于蛋白质的亲水性，与水分子缔合，破坏蛋白质的水化膜。使蛋白质处于不规则的扩散过程中，颗粒之间互相碰撞，在分子内聚力的影响下，聚合形成大颗粒而沉淀 。
（2） 加入电解质或调整到等电点，蛋白质失去电荷。——盐析作用硫酸铵是常用的盐析剂，其优点是即使在较低温度下溶解度仍然很高，盐析时不必加温使盐溶解，其饱和溶液可使大多数酶沉淀，对酶无破坏作用。压滤下来的废液可直接作农肥。
α-淀粉酶食用酶的提取：
发酵液350U/mL
质量指标：5000U/g，保存率85%（半年）
作业：
1、 从生物样品细胞中分离纯化某种酶，首先将该样品制备成粗提液，今选择DEAE层析和盐析二种方法进行分离纯化比较，现测得总蛋白和酶活力的数据列于下表，请将结果填入下列规定的空格中，从中可发现什么?
纯化实验 总蛋白(g) 总活力（U） 比活力（U/mg蛋白） 纯化倍数 收率（%）
粗提取液 30 21000 / 100
DEAE-层析 0.133 5025
硫酸盐层析 0.048 3467
2、 称取25毫克蛋白酶粉配制成25毫升酶溶液，从中取出0.1毫升酶液，以酪蛋白为底物，用Folin-酚比色法测定酶活力，得知每小时产生1500微克酪氨酸。另取2毫升酶液，用凯氏定氮法测得蛋白氮为0.2毫克。若以每分种产生1微克酪氨酸的酶量为1个活力单位计算，根据以上数据，求出：
（1） 1毫升酶液中所含的蛋白质量及总活力
（2） 比活力
（3） 1克酶制剂的总蛋白含量及总活力。
3、 用1克淀粉酶制剂，用水溶解成1000毫升，从中取出1毫升测定淀粉酶活力，测知每5分钟分解0.25克淀粉，计算每克酶制剂所含的淀粉酶活力单位数。（淀粉酶活力定义：每小时分解1克淀粉的酶量为1个活力单位。）
4、某一酶游离状态下酶活为2000U/g，用卡拉胶固定化后用于酶反应，固定化操作采用如下二种方案：
A、用2g酶粉与200mL 4%卡拉胶溶液混合，得200g固定化酶，每克固定化酶的酶活为12U；
B、用10g酶粉与200mL4%卡拉胶溶液混合，得200g固定化酶，每克固定化酶的酶活为40U。
请计算A和 B酶活力回收率？若该酶很贵，请问选用何方案？若该酶很便宜，又选用何方案？说明理由。
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换同阶段通风比为：
种子罐 0-10小时，1,1.3； 10-14小时 1:1.45
发酵罐 0-12小时，1,0.74；12小时以后1:1.46-1.1
中间补料 12小时后，每隔1小时补料一次直至多40小时左右。
pH高于6.5,菌体空泡多，意味着出现衰老，多补一些。补料结束后6-8小时，升至7.5，营养细胞80%不空泡，酶活不增加，放罐。
补料优点：（低浓度发酵和高浓度补料）
1、 有利于菌体生长产酶
2、 发酵后残糖、残氮低，便于提取
3、 高浓度补料可以保持环境稳定，延长产酶期，增强菌体产酶的诱导作用，增加产酶量。
三、提取工艺 发酵液的预处理见P214-218，P226
酶的提取原理：——蛋白质的沉淀作用
（1） 利用酒精、丙酮等有机溶剂作为脱水剂因为它们的亲水性大于蛋白质的亲水性，与水分子缔合，破坏蛋白质的水化膜。使蛋白质处于不规则的扩散过程中，颗粒之间互相碰撞，在分子内聚力的影响下，聚合形成大颗粒而沉淀 。
（2） 加入电解质或调整到等电点，蛋白质失去电荷。——盐析作用硫酸铵是常用的盐析剂，其优点是即使在较低温度下溶解度仍然很高，盐析时不必加温使盐溶解，其饱和溶液可使大多数酶沉淀，对酶无破坏作用。压滤下来的废液可直接作农肥。
α-淀粉酶食用酶的提取：
发酵液350U/mL
质量指标：5000U/g，保存率85%（半年）
作业：
1、 从生物样品细胞中分离纯化某种酶，首先将该样品制备成粗提液，今选择DEAE层析和盐析二种方法进行分离纯化比较，现测得总蛋白和酶活力的数据列于下表，请将结果填入下列规定的空格中，从中可发现什么?
纯化实验 总蛋白(g) 总活力（U） 比活力（U/mg蛋白） 纯化倍数 收率（%）
粗提取液 30 21000 / 100
DEAE-层析 0.133 5025
硫酸盐层析 0.048 3467
2、 称取25毫克蛋白酶粉配制成25毫升酶溶液，从中取出0.1毫升酶液，以酪蛋白为底物，用Folin-酚比色法测定酶活力，得知每小时产生1500微克酪氨酸。另取2毫升酶液，用凯氏定氮法测得蛋白氮为0.2毫克。若以每分种产生1微克酪氨酸的酶量为1个活力单位计算，根据以上数据，求出：
（1） 1毫升酶液中所含的蛋白质量及总活力
（2） 比活力
（3） 1克酶制剂的总蛋白含量及总活力。
3、 用1克淀粉酶制剂，用水溶解成1000毫升，从中取出1毫升测定淀粉酶活力，测知每5分钟分解0.25克淀粉，计算每克酶制剂所含的淀粉酶活力单位数。（淀粉酶活力定义：每小时分解1克淀粉的酶量为1个活力单位。）
4、某一酶游离状态下酶活为2000U/g，用卡拉胶固定化后用于酶反应，固定化操作采用如下二种方案：
A、用2g酶粉与200mL 4%卡拉胶溶液混合，得200g固定化酶，每克固定化酶的酶活为12U；
B、用10g酶粉与200mL4%卡拉胶溶液混合，得200g固定化酶，每克固定化酶的酶活为40U。
请计算A和 B酶活力回收率？若该酶很贵，请问选用何方案？若该酶很便宜，又选用何方案？说明理由。
