http://spxy.zjgsu.edu.cn 《生物技术综合大实验》教学大纲 （ Experiment of Biotechnology） 一、基本信息 课程代码：1034411 学 分 ：1 总 课 时: 1周 课程性质: 必修课 适用专业：生物工程专业 先修课程：生物化学, 微生物学 二、本课程教学目的和任务 二十一世纪将是以分子生物学为代表的生命科学的世纪，分子生物学已成为生命科学的 基础学科之一，其基本理论和实验技术已渗透到生物学的各个领域并促进了一批新学科的兴 起和发展。以分子生物学为基础的基因克隆重组技术是现代生物技术的核心。实验内容包括 目的基因的制备、克隆、表达和分离纯化等，使学生对现代生物工程的上、中和下游技术有 一个完整的概况。力求全面、系统地培养学生生物技术基本实验的操作能力。 三、教学方法与手段 以学生自己动手为主，老师在适当时间予以提示；对实验中所出现的一些现象多向学生 提出问题，使它们学会分析结果，并与理论知识有机结合；根据实验的进行程度，引导学生 更深入思考，逐步树立他们的创新意思；严格要求使操作技能规范化，老师作示范，强调其 要点学生自己练。 四、教学内容及要求 实验一：大肠杆菌质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定 要求掌握细菌培养和收集、质粒 DNA 的少量快速提取，了解质粒 DNA 的电泳鉴定。 重点内容：质粒 DNA 的少量快速提取。 难点内容：质粒 DNA 的少量快速提取。 实验二：质粒 DNA 酶切及凝胶电泳分析 要求掌握质粒 DNA 的酶切反应和琼脂糖凝胶的制备及电泳，了解琼脂糖凝胶电泳的原 理。 重点内容：质粒 DNA 的酶切反应。 难点内容：琼脂糖凝胶的制备及电泳。 实验三：大肠杆菌感受态细胞制备和转化 要求掌握受体菌的培养、感受态细菌的制备、外源核酸的转化，了解外源核酸转化原理 http://spxy.zjgsu.edu.cn 并观察计算转化率。 重点内容：质粒 DNA 的酶切反应。 难点内容：琼脂糖凝胶的制备及电泳。 实验四：植物基因组 DNA 的提取 要求掌握 CTAB 法提取植物基因组 DNA、基因组 DNA 的电泳鉴定、PCR 扩增目的基因片断 和 PCR 产物的电泳分析。了解植物基因组 DNA 提取的原理，和 PCR 扩增的原理。 重点内容：植物基因组 DNA 的提取。 难点内容：聚合酶链式反应的原理 。 实验五：植物组织 RNA 的提取 要求掌握 Trizol 法提取植物组织 RNA、总 RNA 的电泳分析。了解植物总 RNA 提取的原 理。 重点内容：Trizol 法提取植物组织 RNA。 难点内容：Trizol 法提取植物组织 RNA。 五、教学时数分配表 序号 实 验 名 称 实验类型 实验要求 实验时数 1 大肠杆菌质粒 DNA 的分离、纯化和鉴定 验证性 必做 4 2 质粒 DNA 酶切及凝胶电泳分析 验证性 必做 2 3 大肠杆菌感受态细胞制备和转化 验证性 必做 4 4 植物基因组 DNA 的提取 验证性 必做 4 5 植物基因组 RNA 的提取 验证性 必做 2 教学课时合计 16 六、考核方式及成绩评定标准 考核方式：闭卷考试及实验操作 成绩评定标准：平时成绩占总成绩的 30%，期末考试占总成绩的 70%。成绩评定为百分 制。 七、教材及主要参考书 教 材 ：朱旭芬编著，《基因工程实验指导》，高等教育出版社，2006 参考书目：[1] 吴乃虎编著， 《基因工程原理》，科学出版社，1999 [2] 张钰主编， 《分子生物学基本实验方法》，复旦大学出版社，1998 执笔人:宋达峰，顾 青