色普法
一、实验目的
? 1,了解色谱法分离提纯有机化合物的基
本原理和应用。
? 2,掌握柱层析、薄层析和纸层析的操作
技术。
二、基本原理
? 色谱法 （ Chromatography）亦称 色层法、层析法
等。
? 色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方
法之一。色谱法的基本原理是利用混合物各组分
在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，
或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物
质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分
离。
＊ 色谱法在有机化学中的应用主要包括以
下几方面,
? 1, 分离混合物 一些结构类似、理化性质也
相似的化合物组成的混合物，一般应用化学方法
分离很困难，但应用色谱法分离，有时可得到满
意的结果。
? 2, 精制提纯化合物 有机化合物中含有少量结
构类似的杂质，不易除去，可利用色谱法分离以
除去杂质，得到纯品。
? 3, 鉴定化合物 在条件完全一致的情况，纯碎的化合
物在薄层色谱或纸色谱中都呈现一定的移动距离，称比
移值（ R f 值），所以利用色谱法可以鉴定化合物的
纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。但
影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的
大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组
成、挥发性等。所以，要获得重现的比移值就比较困难。
为此，在测定某一试样时，最好用已知样品进行对照。
? 4, 跟踪一些化学反应进程,可以利用薄层色谱或纸色
谱观察原料色点的逐步消失，以证明反应完成与否。
三、柱色谱
? 柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两种。
吸附色谱常用氧化铝和硅胶为吸附剂。分
配色谱以硅胶、硅藻土和纤维素为支持剂，
以吸收较大量的液体作为固定相。下面主
要介绍以氧化铝为吸附剂的柱色谱分离方
法。
砂
谱 带
吸 附 剂
砂
玻 璃 棉
? * 吸附剂
? 常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭
等。供色谱使用的氧化铝有酸性、中性和碱性三种。
? 碱性氧化铝适用于碳氢化合物、生物碱以及其它碱性化合
物的分离。
? 中性氧化铝应用最广，适用于醛、酮、醌以及酯类化合物
的分离。
? 酸性氧化铝适用于有机酸类的分离。氧化铝的活化化 I~V
五级,I 级的吸附作用太强,V 级的吸附作用太弱。所
以一般常采用 II, III 级。
? 表 1 吸附剂活性和含水量的关系
活性等级 I II III IV V
氧化铝加
水量 /% 0 3 6 10 15
硅胶加水
量 /% 0 5 15 25 38
? 2,溶质的结构和吸附能力 化合物的吸附
性和它们的极性成正比，化合物分 子中含
有极性较大的基团其吸附性较强。氧化铝
对各种化合物的吸附性按下列顺序递
减。
? 酸、碱 > 醇、胺、硫醇 > 酯、醛、酮 >
芳香族化合物 > 卤代物、醚 > 烯 > 饱和
烃。
3,溶解试样的溶剂
? （ 1 ）溶剂要求较纯，如氯仿中含有乙醇、水分及不挥
发物质，都会影响试样的吸附和洗脱。（ 2 ）溶剂和氧
化铝不能起化学反应。
? （ 3 ）溶剂的极性应比试样极性小一些，否则试样不易
被氧化铝吸附。
? （ 4 ）溶剂对试样的溶解度不能太大，否则影响吸附；
也不能太小，如太小，溶液的体积增加，易使色谱分散。
? （ 5 ）有时可使用混合溶剂，如有的组分含有较多的极
性基团，在极性小的溶剂中溶解度太小，也可先选用极性
较大的溶剂溶解。而后加入一定量的非极性溶剂，这样既
降低了溶液的极性，又减少了溶液的体积。
? 4,洗脱剂 试样吸附在氧化铝柱上后，用合
适的溶剂进行洗脱，这种溶剂称为洗脱剂。常用
洗脱溶剂的极性按以下次序递增,
己烷、石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜三氯乙烯＜
二硫化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜三氯甲烷＜乙
醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜丙醇＜乙醇＜甲醇＜水＜
吡啶＜乙酸
砂
谱 带
吸 附 剂
砂
玻 璃 棉
? ＊柱色谱操作步骤
? （ 1 ）装柱：取清洁、干
燥色谱柱，在玻璃管底铺一
层玻璃棉或脱脂棉，轻轻塞
紧，再在玻璃棉 上盖一层
厚约 0.5cm 的石英砂（或
用一张比柱直径略小的滤纸
代替），而后将氧化铝装入
管内（ 湿法 或 干法 ）。
? ＊湿法 是将备用的溶剂装入管内，约为柱高的四分之三，
而后将氧化铝和溶剂调成糊状，慢慢地倒入管中。此时应
将管的下端旋塞打开，控制流出速度为 1 滴 /s 。
? ＊干法 是在管的上端放一干燥漏斗，使氧化铝均匀地经
干燥漏斗成一细流慢慢装入管中，中间不应间断，时时轻
轻敲打柱身，使装填均匀，全部加入后，再加入溶剂，使
氧化铝全部润湿。另外也可先将溶剂加入管内，约为柱高
的四分之三处，而后将氧化铝通过一粗颈玻璃漏斗慢慢倒
入并轻轻敲击柱身。此法较简便。
? 2、加样, 把要分离的试样配制成适当浓度的溶
液。将氧化铝上多余的溶剂放出，直到柱内液体
表面到达氧化铝表面时，停止放出溶剂。沿管壁
加入试样溶液，注意不要使溶液把氧化铝冲松浮
起，试样溶液加完后，开启下端旋塞，使液体渐
渐放出，至溶剂液面和氧化铝表面相齐（勿使氧
化铝表面干燥）即可用溶剂洗脱。
? 色谱柱大小、吸附剂量及试样量
试样量 /g 吸附剂量 /g 柱的直径 /mm 柱高 /mm
0.01 0.3 3.5 30
0.10 3.0 7.5 60
1.00 30.0 16.0 130
10.00 300.0 35.0 280
3、洗脱和分离,在洗脱和分离的过程中，应当注意：
? ① 不断加入洗脱剂，并保持一定高度的液面，在整个操
作中勿使氧化铝表面的溶液流干，一旦流干，再加溶剂，
易使氧化铝柱产生气泡和裂缝，影响分离效果。
? ②收集洗脱液，如试样各组分有颜色，在氧化铝柱上可直
接观察。洗脱后分别收集各个组分。在多数情况下，化合
物没有颜色，收集洗脱液时，多采用等份收集，每份洗脱
剂的体积随所用氧化铝的量及试样的分离情况而定。
? ③ 控制洗脱液的流出速度，一般不宜太快，太快了柱中
交换来不及达到平衡，因而影响分离效果。
? ④由于氧化铝表面活性较大，有时可能促使某些成分破坏，
所以应尽量在一定时间内完成一个柱色谱的分离，以免试
样在柱上停留的时间过长，发生变化。
四、薄层色谱
? 薄层色谱 又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是
快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实
验技术，属固 -液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸
色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微
克，甚至 0.01微克）的分离；另一方面在制作薄
层板时，把吸附层加厚加大，又可用来精制样品，
此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变
化而不能用气相色谱分析的物质。此外，薄层色
谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的
一种, 预试, 。
* 薄层色谱几要素：
? 薄层色谱用的吸附剂和支持剂 和柱色谱相似，薄层吸附色谱的吸附
剂常用的是氧化铝和硅胶。分配色谱的支持剂为纤维素和硅藻土等。
? 硅胶是无定形多孔性的物质，略具酸性，适用于酸性和中性化合物的
分离和分析。
?, 硅胶 H, —— 不含粘合剂。
?, 硅胶 G, —— 含煅石膏做粘合剂。
?, 硅胶 HF — 254, —— 含荧光物质，可在波长 254nm 紫外光下观
察荧光。
?, 硅胶 GF — 254, —— 含有煅石膏和荧光剂。
? 薄层色谱用的氧化铝也分为氧化铝 G,氧化铝 GF-254 及氧化铝
HF — 254 。
? 粘合剂 除煅石膏（ CaSO 4 · H 2 O ）外，
还可用淀粉、羧甲基纤维素钠。加粘合剂的薄板
称为硬板，不加粘合剂的称为软板。
? 薄层吸附色谱和柱吸附色谱一样，化合物的吸
附能力和它们的极性成正比，具有较大极性的化
合物吸附较强，因而 R f 值就小。因此利用化合
物极性的不同，将它们分离开。
? 操作步骤
比移值
显色
点样
展开剂选择
薄层板的制备
碘蒸气显色法
紫外光显色法
试剂显色法
平铺法
倾注法
六、实验操作
1,柱层析
? 荧光黄和碱性湖蓝 BB 的分离
? 色谱柱,15 × 1.5cm 的层析柱
? 展开剂,95% 乙醇（为柱高的 3/4 ），
? 固定相：中性氧化铝
? 2,薄层色谱
? 1、硅胶 G 板的制备
? 取 7.5cm × 2.5cm 左右的载玻璃片 5 块，
洗净晾干。
? 在 50mL 烧杯中，放入约 3g 硅胶 G,加入
0.5% 羧甲基纤维素钠水溶液 8mL,调成糊状。
用牛角匙将此糊状物倾倒于上述玻璃片上，用食
指和拇指拿住玻璃片，做前后、左右振摇摆动，
使流动的糊状物均匀地铺在载玻片上。将已涂好
硅胶 G 的薄层板放置在水平的长玻璃片上，室温
放置 0.5h 后，移入烘箱，缓慢升温至 110 ℃,
恒温 0.5h 。取出稍冷放入干燥器中备用。
? （ 2 ）点样
? 在小试管中，分别取少量 0.5%~1% 苏丹红、
苏丹黄、偶氮苯的苯溶液及以上三个样品的混合
溶液为试样
? （ 3 ）用 2 块上述方法制好的薄层板，分别在
离薄层板一端约 1cm 处，用铅笔轻轻画一直线。
取管口平整的毛细管，插入试样溶液中，注意毛
细管必须专用，不可弄混，于画线处轻轻点样
（ 4 ）在一块板的起点线上点 1% 的偶氮苯溶液
和混合样两个点；在第二块板的起点线上点 1%
的苏丹 III 苯溶液和混合液两个样点。样点间距
离 1cm 左右。先点纯试样，再点混合试样。晾干、
备用。
? （ 3 ）展开
? 以体积比 9, 1 的正庚烷与乙酸乙酯为展
开剂，在层析缸（或大的广口瓶）中加入展开剂，
使其高度不超过 1cm 。将点好样的薄层板小心放
入层析缺中，点样一端朝下，浸入展开剂约
0.5cm （ 5 ） 。盖好瓶盖，观察展开剂前沿上
升到一定高度时取出，尽快在展开剂的前沿画出
标记 （ 6 ） 。晾干，观察混合试样斑点出现的
位置及相应样品斑点是否相符。计算 R f 值。
七、实验关键及注意事项：
? 1、薄层层析时，薄层板的制备要厚薄均匀，
表面平整光洁。
? 2、点样时，各样点间距 1— 1.5cm，样点直
径应不超过 2mm，
? 3、柱层析时，柱子要致密紧实，无气泡。
＊注释
? （ 1 ）荧光黄为橙红色，
商品一般是二钠盐，稀的水
溶液带有荧光黄色。碱性湖
蓝 BB 又称为亚甲基蓝，深
绿色的有铜光的结晶，其稀
的水溶液为蓝色，其结构式
如下
C O 2 H
OOH O
荧 光 黄
S +( C H
3 ) 2 N
C l -
碱 性 湖 蓝 B B
N ( C H 3 ) 2
? （ 2 ）棉花塞得太紧，影响洗脱液的流速。
? （ 3 ）苏丹红的结构是：
? 苏丹黄的结构是：
N = N N = N
C H 3 C H 3 O H
1 - [ 4 - ( 2 - 甲 苯 基 偶 氮 ) - 2 - 甲 苯 基 偶 氮 ] 基 - 2 - 萘 酚
N = N
O H
1 - ( 苯 基 偶 氮 ) 基 - 2 - 萘 酚
? （ 4 ）点样时，毛细管刚接触薄板即可。点样过量影响分离效果。
点与点之间应相距 1cm 左右。
? （ 5 ）展开剂不超过点样线。
? （ 6 ）取出薄板应立即在展开剂前沿画出标记，如不注意，展开剂
挥发后，无法确定其上升的高度。也可先画出前沿，待展开剂到达立
即取出。
? （ 7 ）水解完全与否，判断方法是：用双缩脲试验检验其中是否含
有多肽。
? （ 8 ）本实验非常灵敏。手指上的油脂中含有相当量的氨基酸，若
触及滤纸会占染在滤纸上，在以后的显色步骤中会显出颜色，与样点
颜色混淆。
? （ 9 ） 80% 苯酚水溶液是由 20mL 水与 80g 苯酚混合加热溶解制
得的。制成后宜立即使用，以免氧化。若需短时间存放，可在溶液面
上加盖一层石油醚使之与空气隔离。
八、思考题
? 1,为什么极性大的组分要用极性较大的
溶剂洗脱？
? 2,柱子中若有气泡或装填不均匀，将给
分离造成什么样的结果？如何避免？
? 3,如何利用 R f 值来鉴定化合物？
? 4,展开剂的高度超过点样线，对薄层色
谱有什么影响？
一、实验目的
? 1,了解色谱法分离提纯有机化合物的基
本原理和应用。
? 2,掌握柱层析、薄层析和纸层析的操作
技术。
二、基本原理
? 色谱法 （ Chromatography）亦称 色层法、层析法
等。
? 色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方
法之一。色谱法的基本原理是利用混合物各组分
在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，
或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物
质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分
离。
＊ 色谱法在有机化学中的应用主要包括以
下几方面,
? 1, 分离混合物 一些结构类似、理化性质也
相似的化合物组成的混合物，一般应用化学方法
分离很困难，但应用色谱法分离，有时可得到满
意的结果。
? 2, 精制提纯化合物 有机化合物中含有少量结
构类似的杂质，不易除去，可利用色谱法分离以
除去杂质，得到纯品。
? 3, 鉴定化合物 在条件完全一致的情况，纯碎的化合
物在薄层色谱或纸色谱中都呈现一定的移动距离，称比
移值（ R f 值），所以利用色谱法可以鉴定化合物的
纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。但
影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的
大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组
成、挥发性等。所以，要获得重现的比移值就比较困难。
为此，在测定某一试样时，最好用已知样品进行对照。
? 4, 跟踪一些化学反应进程,可以利用薄层色谱或纸色
谱观察原料色点的逐步消失，以证明反应完成与否。
三、柱色谱
? 柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两种。
吸附色谱常用氧化铝和硅胶为吸附剂。分
配色谱以硅胶、硅藻土和纤维素为支持剂，
以吸收较大量的液体作为固定相。下面主
要介绍以氧化铝为吸附剂的柱色谱分离方
法。
砂
谱 带
吸 附 剂
砂
玻 璃 棉
? * 吸附剂
? 常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭
等。供色谱使用的氧化铝有酸性、中性和碱性三种。
? 碱性氧化铝适用于碳氢化合物、生物碱以及其它碱性化合
物的分离。
? 中性氧化铝应用最广，适用于醛、酮、醌以及酯类化合物
的分离。
? 酸性氧化铝适用于有机酸类的分离。氧化铝的活化化 I~V
五级,I 级的吸附作用太强,V 级的吸附作用太弱。所
以一般常采用 II, III 级。
? 表 1 吸附剂活性和含水量的关系
活性等级 I II III IV V
氧化铝加
水量 /% 0 3 6 10 15
硅胶加水
量 /% 0 5 15 25 38
? 2,溶质的结构和吸附能力 化合物的吸附
性和它们的极性成正比，化合物分 子中含
有极性较大的基团其吸附性较强。氧化铝
对各种化合物的吸附性按下列顺序递
减。
? 酸、碱 > 醇、胺、硫醇 > 酯、醛、酮 >
芳香族化合物 > 卤代物、醚 > 烯 > 饱和
烃。
3,溶解试样的溶剂
? （ 1 ）溶剂要求较纯，如氯仿中含有乙醇、水分及不挥
发物质，都会影响试样的吸附和洗脱。（ 2 ）溶剂和氧
化铝不能起化学反应。
? （ 3 ）溶剂的极性应比试样极性小一些，否则试样不易
被氧化铝吸附。
? （ 4 ）溶剂对试样的溶解度不能太大，否则影响吸附；
也不能太小，如太小，溶液的体积增加，易使色谱分散。
? （ 5 ）有时可使用混合溶剂，如有的组分含有较多的极
性基团，在极性小的溶剂中溶解度太小，也可先选用极性
较大的溶剂溶解。而后加入一定量的非极性溶剂，这样既
降低了溶液的极性，又减少了溶液的体积。
? 4,洗脱剂 试样吸附在氧化铝柱上后，用合
适的溶剂进行洗脱，这种溶剂称为洗脱剂。常用
洗脱溶剂的极性按以下次序递增,
己烷、石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜三氯乙烯＜
二硫化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜三氯甲烷＜乙
醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜丙醇＜乙醇＜甲醇＜水＜
吡啶＜乙酸
砂
谱 带
吸 附 剂
砂
玻 璃 棉
? ＊柱色谱操作步骤
? （ 1 ）装柱：取清洁、干
燥色谱柱，在玻璃管底铺一
层玻璃棉或脱脂棉，轻轻塞
紧，再在玻璃棉 上盖一层
厚约 0.5cm 的石英砂（或
用一张比柱直径略小的滤纸
代替），而后将氧化铝装入
管内（ 湿法 或 干法 ）。
? ＊湿法 是将备用的溶剂装入管内，约为柱高的四分之三，
而后将氧化铝和溶剂调成糊状，慢慢地倒入管中。此时应
将管的下端旋塞打开，控制流出速度为 1 滴 /s 。
? ＊干法 是在管的上端放一干燥漏斗，使氧化铝均匀地经
干燥漏斗成一细流慢慢装入管中，中间不应间断，时时轻
轻敲打柱身，使装填均匀，全部加入后，再加入溶剂，使
氧化铝全部润湿。另外也可先将溶剂加入管内，约为柱高
的四分之三处，而后将氧化铝通过一粗颈玻璃漏斗慢慢倒
入并轻轻敲击柱身。此法较简便。
? 2、加样, 把要分离的试样配制成适当浓度的溶
液。将氧化铝上多余的溶剂放出，直到柱内液体
表面到达氧化铝表面时，停止放出溶剂。沿管壁
加入试样溶液，注意不要使溶液把氧化铝冲松浮
起，试样溶液加完后，开启下端旋塞，使液体渐
渐放出，至溶剂液面和氧化铝表面相齐（勿使氧
化铝表面干燥）即可用溶剂洗脱。
? 色谱柱大小、吸附剂量及试样量
试样量 /g 吸附剂量 /g 柱的直径 /mm 柱高 /mm
0.01 0.3 3.5 30
0.10 3.0 7.5 60
1.00 30.0 16.0 130
10.00 300.0 35.0 280
3、洗脱和分离,在洗脱和分离的过程中，应当注意：
? ① 不断加入洗脱剂，并保持一定高度的液面，在整个操
作中勿使氧化铝表面的溶液流干，一旦流干，再加溶剂，
易使氧化铝柱产生气泡和裂缝，影响分离效果。
? ②收集洗脱液，如试样各组分有颜色，在氧化铝柱上可直
接观察。洗脱后分别收集各个组分。在多数情况下，化合
物没有颜色，收集洗脱液时，多采用等份收集，每份洗脱
剂的体积随所用氧化铝的量及试样的分离情况而定。
? ③ 控制洗脱液的流出速度，一般不宜太快，太快了柱中
交换来不及达到平衡，因而影响分离效果。
? ④由于氧化铝表面活性较大，有时可能促使某些成分破坏，
所以应尽量在一定时间内完成一个柱色谱的分离，以免试
样在柱上停留的时间过长，发生变化。
四、薄层色谱
? 薄层色谱 又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是
快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实
验技术，属固 -液吸附色谱，它兼备了柱色谱和纸
色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微
克，甚至 0.01微克）的分离；另一方面在制作薄
层板时，把吸附层加厚加大，又可用来精制样品，
此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变
化而不能用气相色谱分析的物质。此外，薄层色
谱法还可用来跟踪有机反应及进行柱色谱之前的
一种, 预试, 。
* 薄层色谱几要素：
? 薄层色谱用的吸附剂和支持剂 和柱色谱相似，薄层吸附色谱的吸附
剂常用的是氧化铝和硅胶。分配色谱的支持剂为纤维素和硅藻土等。
? 硅胶是无定形多孔性的物质，略具酸性，适用于酸性和中性化合物的
分离和分析。
?, 硅胶 H, —— 不含粘合剂。
?, 硅胶 G, —— 含煅石膏做粘合剂。
?, 硅胶 HF — 254, —— 含荧光物质，可在波长 254nm 紫外光下观
察荧光。
?, 硅胶 GF — 254, —— 含有煅石膏和荧光剂。
? 薄层色谱用的氧化铝也分为氧化铝 G,氧化铝 GF-254 及氧化铝
HF — 254 。
? 粘合剂 除煅石膏（ CaSO 4 · H 2 O ）外，
还可用淀粉、羧甲基纤维素钠。加粘合剂的薄板
称为硬板，不加粘合剂的称为软板。
? 薄层吸附色谱和柱吸附色谱一样，化合物的吸
附能力和它们的极性成正比，具有较大极性的化
合物吸附较强，因而 R f 值就小。因此利用化合
物极性的不同，将它们分离开。
? 操作步骤
比移值
显色
点样
展开剂选择
薄层板的制备
碘蒸气显色法
紫外光显色法
试剂显色法
平铺法
倾注法
六、实验操作
1,柱层析
? 荧光黄和碱性湖蓝 BB 的分离
? 色谱柱,15 × 1.5cm 的层析柱
? 展开剂,95% 乙醇（为柱高的 3/4 ），
? 固定相：中性氧化铝
? 2,薄层色谱
? 1、硅胶 G 板的制备
? 取 7.5cm × 2.5cm 左右的载玻璃片 5 块，
洗净晾干。
? 在 50mL 烧杯中，放入约 3g 硅胶 G,加入
0.5% 羧甲基纤维素钠水溶液 8mL,调成糊状。
用牛角匙将此糊状物倾倒于上述玻璃片上，用食
指和拇指拿住玻璃片，做前后、左右振摇摆动，
使流动的糊状物均匀地铺在载玻片上。将已涂好
硅胶 G 的薄层板放置在水平的长玻璃片上，室温
放置 0.5h 后，移入烘箱，缓慢升温至 110 ℃,
恒温 0.5h 。取出稍冷放入干燥器中备用。
? （ 2 ）点样
? 在小试管中，分别取少量 0.5%~1% 苏丹红、
苏丹黄、偶氮苯的苯溶液及以上三个样品的混合
溶液为试样
? （ 3 ）用 2 块上述方法制好的薄层板，分别在
离薄层板一端约 1cm 处，用铅笔轻轻画一直线。
取管口平整的毛细管，插入试样溶液中，注意毛
细管必须专用，不可弄混，于画线处轻轻点样
（ 4 ）在一块板的起点线上点 1% 的偶氮苯溶液
和混合样两个点；在第二块板的起点线上点 1%
的苏丹 III 苯溶液和混合液两个样点。样点间距
离 1cm 左右。先点纯试样，再点混合试样。晾干、
备用。
? （ 3 ）展开
? 以体积比 9, 1 的正庚烷与乙酸乙酯为展
开剂，在层析缸（或大的广口瓶）中加入展开剂，
使其高度不超过 1cm 。将点好样的薄层板小心放
入层析缺中，点样一端朝下，浸入展开剂约
0.5cm （ 5 ） 。盖好瓶盖，观察展开剂前沿上
升到一定高度时取出，尽快在展开剂的前沿画出
标记 （ 6 ） 。晾干，观察混合试样斑点出现的
位置及相应样品斑点是否相符。计算 R f 值。
七、实验关键及注意事项：
? 1、薄层层析时，薄层板的制备要厚薄均匀，
表面平整光洁。
? 2、点样时，各样点间距 1— 1.5cm，样点直
径应不超过 2mm，
? 3、柱层析时，柱子要致密紧实，无气泡。
＊注释
? （ 1 ）荧光黄为橙红色，
商品一般是二钠盐，稀的水
溶液带有荧光黄色。碱性湖
蓝 BB 又称为亚甲基蓝，深
绿色的有铜光的结晶，其稀
的水溶液为蓝色，其结构式
如下
C O 2 H
OOH O
荧 光 黄
S +( C H
3 ) 2 N
C l -
碱 性 湖 蓝 B B
N ( C H 3 ) 2
? （ 2 ）棉花塞得太紧，影响洗脱液的流速。
? （ 3 ）苏丹红的结构是：
? 苏丹黄的结构是：
N = N N = N
C H 3 C H 3 O H
1 - [ 4 - ( 2 - 甲 苯 基 偶 氮 ) - 2 - 甲 苯 基 偶 氮 ] 基 - 2 - 萘 酚
N = N
O H
1 - ( 苯 基 偶 氮 ) 基 - 2 - 萘 酚
? （ 4 ）点样时，毛细管刚接触薄板即可。点样过量影响分离效果。
点与点之间应相距 1cm 左右。
? （ 5 ）展开剂不超过点样线。
? （ 6 ）取出薄板应立即在展开剂前沿画出标记，如不注意，展开剂
挥发后，无法确定其上升的高度。也可先画出前沿，待展开剂到达立
即取出。
? （ 7 ）水解完全与否，判断方法是：用双缩脲试验检验其中是否含
有多肽。
? （ 8 ）本实验非常灵敏。手指上的油脂中含有相当量的氨基酸，若
触及滤纸会占染在滤纸上，在以后的显色步骤中会显出颜色，与样点
颜色混淆。
? （ 9 ） 80% 苯酚水溶液是由 20mL 水与 80g 苯酚混合加热溶解制
得的。制成后宜立即使用，以免氧化。若需短时间存放，可在溶液面
上加盖一层石油醚使之与空气隔离。
八、思考题
? 1,为什么极性大的组分要用极性较大的
溶剂洗脱？
? 2,柱子中若有气泡或装填不均匀，将给
分离造成什么样的结果？如何避免？
? 3,如何利用 R f 值来鉴定化合物？
? 4,展开剂的高度超过点样线，对薄层色
谱有什么影响？
