上海中医药大学《实验中医学》教案（5） 课程名称 实验中医学（理论部分） 总学时数 36 专业 中医基础和中医临床专业 授课教师 方肇勤 内容 动物实验研究方法及其在中医研究中的应用 时数 4  本次课目的要求  掌握动物实验的主要要求和特点 1．实验动物的选择（包括实验动物的概念，实验动物选择的意义，实验动物选择的依据，实验动物的基本要求和具体要求以及标准化实验动物的概念等）。 2．中医实验动物研究应注意的几个方面。 中医动物实验研究的主要内容 1．证动物模型的开创和发展（要求举例说明）。 2．以动物实验验证临床治疗方法，探求其作用机制（要求举例说明）。 3．中医基础理论的研究及其在教学上的应用。 4．其他研究与应用。 5．了解证动物模型的几个范例。 6．了解证动物模型研究中存在的问题。  本次课的重点难点  1．动物实验的主要要求和特点。 2．中医动物实验研究的主要内容。 3．证动物模型研究范例。  本次课的应用教具  多媒体设备。   第四章 动物实验研究方法及其在中医研究中的应用 （4学时） 动物实验是近代生命科学实验发展起来的重要手段，生命科学的许多重大发现和突破均建立在动物实验之上。 中医能不能采用实验动物？突出的问题是四诊困难、情志难以把握，大家有什么看法。有利的因素、不利的因素。 大家上过“实验动物学”没有？ 教材第二段讲了其重要性。 4．1 动物实验的主要要求和特点 近几十年来，实验动物学已经作为一门独立的学科迅速地发展起来。实验动物学对实验动物的饲养、繁殖、驯化、监测和开发应用，以及动物实验的规范和要求形成了一整套完整的理论和方法，这些同样适用于中医动物实验。同时，中医的动物实验又有其自身特点，其研究、发展还将丰富实验动物学的内容。 4．1．1实验动物的选择 实验动物的定义：实验动物是指以实验研究为目的，在一定的环境条件控制下，经过培养驯化，具有明确的生物学特性和清楚的遗传和微生物背景的动物。实验动物种类繁多，在进行实验时，应根据课题的需要和动物的特性加以选择，使研究目的与动物的种属、特性和个体差异相吻合，才能保证研究工作的顺利进行。 不同的科学实验要求选择和开发最适宜的实验动物。正确选择实验动物，实验设计周密详尽，可以节省人力、动物和时间，以最小的代价，最大限度地获得可靠的研究结果。否则，不仅会造成不必要的浪费，严重的还会影响到实验结果的判断，甚至导致实验的失败。因此，选择和开发实验动物是动物实验的首要环节，至关重要，应予以足够的重视。 在医学研究中首先要从研究目的和实验要求来选择实验动物，其次要考虑是否容易获得、是否经济及容易饲养等因素。实验动物通常应该具备个体间的均一性、遗传性能的稳定性和比较容易获得这三个基本要求。具体要求如下： 1．尽量选用功能、代谢、结构及其它方面机能与人相似的实验动物 一般来说，动物的进化阶段愈高，机能、代谢、结构愈复杂，也就愈接近人类。 2．选用标准化的实验动物 标准化实验动物指遗传背景明确、饲养环境与动物体内的微生物得到控制、符合一定标准的实验动物。只有选用标准化实验动物，而且实验过程也在标准环境中饲养的动物，在实验中才能排除因动物杂交、遗传上的不均质及环境条件的变化，所引起的个体反应不一致，排除因动物携带细菌、病毒、寄生虫和潜在疾病的影响，才能便于分析实验结果，减少实验误差，提高科学性，准确性，把所获得的结果与同类研究进行比较、交流，并得到承认。在实验研究中应避免使用随意交配繁殖的动物，而应根据研究目的选择用遗传学控制的方法培育出来的近交系、突变系、系统杂交或封闭群动物。同时应对实验动物进行微生物控制，发展使用无菌动物、已知菌动物或无特定病原体（SPF）动物。 3．选用解剖、生理特点符合实验目的要求的实验动物 4．选用不同种属品系实验动物某些特殊反应，使适合于不同研究目的的需要 5．实验动物种属、品系的选择 6．遵守动物实验的一般规则 1）年龄、体重 应根据实验目的来选择适龄动物。一般实验均用成年动物进行；幼龄动物一般较成年动物敏感；老年动物的代谢活动及各种机能低下，反应迟钝，除了作老年医学研究外，其它专业很少应用。同一实验所选动物年龄应一致，体重大致相近，一般不应相差10%。 2）性别 不同性别动物对同一实验处理（如药物、刺激等）的感受性常有差异，在实验研究中如无特殊要求，一般宜选用雌雄各半做实验。 3）生理状态与健康情况 动物的不同生理状态如怀孕、授乳时对外界刺激的反应常有所改变，在一般研究中应从实验组中删除；必须选用健康动物进行实验。 4）实验季节和昼夜过程 不同季节和不同昼夜，动物机体反应性会有一定改变，在实验动物选择中也应予以注意。 5）实验的重复与肯定 由于不同种动物有不同的功能和代谢特点，所以在肯定一个实验结果时，往往采用两种以上动物进行比较观察，尤其将动物实验结果推断到人的实验时应该慎重。例如，所选的实验动物如一种为啮齿类动物，另一种应该为非啮齿类动物。常用的序列是小鼠、大鼠、狗或猴。 4．1．2中医动物实验研究的注意点 实验动物在中医实验的应用和发展中，建议注意以下几个方面。 1．中医动物实验研究应以中医理论为指导 2．中医动物实验研究应从中医临床出发 3．中医动物实验研究应突出中医治疗原则 4．2中医动物实验研究的主要内容 4．2．1证动物模型的开创和发展 自本世纪60年代以来，在中医证的动物模型制作与研究方面做了大量的研究工作。迄今证的动物模型逾150多种。其中包括各种虚证（阴虚、阳虚、气虚、血虚、各脏腑虚）、血瘀证、肝郁证、寒证、热证、温病卫气营血诸证、里实证等模型，等等。实验动物疾病模型应用于中医临床研究，为中医诊疗方法研究提供了大量的实验模型，为临床理论的深化与新理论的形成提供了便利。 以脾虚证动物模型研究为例。（可以读书） 4．2．2以动物实验验证临床治疗方法，探求其作用机理 临床治疗方法的动物实验研究主要包括以下几方面（以下的例子很好，可以选择性介绍）： 1．研究经方的作用机理（如姜廷良的桂枝汤研究） 2．研究名老中医经验疗法的作用机理（如二仙汤的研究） 3．应用于新药开发（如谭日强肝达康片的研制） 4．2．3中医基础理论的研究及其在教学上的应用 4．2．4其它研究与应用 动物实验在中医研究中已渗入到各个领域。除以上所介绍的外，较多的应用领域有中药药理（包括性味归经）的实验研究、中草药毒理的动物实验、各类常用中草药有效成份的药理、毒理和代谢，中草药原料开发、保健品和化妆品等开发，以及对其安全性评价等等。 4．3 证动物模型研究范例（书上内容比较好，可以选择介绍） 从生物学观点看，人与动物既有特殊性也有其共同，正因为人与动物存在着共同性，所以动物实验结果对人是有参考意义的，而且实验动物可以根据研究目的需要进行各种实验，容许严格控制实验条件，可以重复实验，进行多指标观察与损害性观察。因此利用动物实验，结合临床观察，已成为中医药研究必要手段。由于辨证为中医的特点之一，因此动物证的研究被列为研究中医的突破口，用动物模拟“证”的实验研究。然而，复制中医“证”的动物模型工作复杂、难度大、任务艰巨。尽管如此，近年来在广大中、西医和中西医结合科研工作者的努力下，研制出了大量的动物模型。其复制方法主要有3类： 1．依据中医基础理论。 2．依据西医临床、药学知识。 3．根据科研成果。 以下介绍三个范例。 4．3．1 寒凉药、温热药所致寒证、热证动物模型 4．3．2 乙酰苯肼致血虚证动物模型： 4．3．3 风寒湿邪家兔痹证模型 4．3．4 展望 通过几十年的探索，中医的实验动物，尤其是证动物模型研究取得了空前的成就，同时，也暴露出了一些问题，主要表现在： 1．动物模型很难用四诊方法加以判别。 2．造模因素选择缺少标准。 3．有的造模设计，忽视临床实际，刻意去追求证，脱离病去制造证，而不是在病，尤其是常见病的模型上去区分证。 4．关于方药的反证问题。 综上所述，动物实验是一条深入探索研究中医理论的科学内涵，提高临床诊断和治疗效果的十分重要的途径。同时也为中药药理深入研究和打入国际市场具有重要意义。今后的努力方向，重点应放在寻找、挖掘证的特异性客观性指标（外在指标、实验室指标或指标群），以及不断创新、研制、应用新的证的动物模型，尤其是病证结合的动物模型。可以预计，随着这些工作的深入中医药研究将如虎添翼，长足发展。 我们以为当前重要的工作之一是探索和建立常用实验动物的辨证方法，即非创伤性的辨证方法，大家觉得其可能性如何（可以展开讨论）。现在的条件好得多，而且，从医学和科学发展史上看，不应该样样事情等外国人开始了以后，我们再去学习，再去跟在后面。我们应该干些事情，有所作为。 另外一条，可以选择那些个体差异大的实验动物，如果实现了以上辨证方法，那么，这将成为辨证论治的非常理想的动物模型。对不对？