上海中医药大学《实验中医学》教案（7） 课程名称 实验中医学（理论部分） 总学时数 36 专业 中医基础和中医临床专业 授课教师 方肇勤 内容 实验中医学常用的实验研究方法及其在中医研究中的应用 时数 16  本次课目的要求 1．掌握不同学科实验研究方法的特点和优势。 2．掌握如何根据实验研究的要求选择实验研究方法（包括一种或几种方法）。 3．了解各学科的主要实验研究方法。 4．了解各学科实验研究方法在中医药研究中的应用。 5．了解了解各学科研究中医药学的现状。  本次课的重点难点 第一节 解剖学方法及其在中医研究中的应用 1．大体解剖学的主要方法。 2．大体解剖学方法研究中医的现状。 第二节 组织学方法及其在中医研究中的应用 1．组织学的主要研究方法。 2．组织学方法研究中医的现状。 第三节 电镜技术及其在中医研究中的应用 1．电子显微镜及电子显微术概况。 2．电子显微术研究中医的现状。 第四节 生物化学方法及其在中医研究中的应用 1．生物化学的主要方法。 2．生物化学方法研究中医的现状。 第五节 生理学方法及其在中医研究中的应用 1．生理学的主要方法。 2．生理学方法研究中医的现状。 第六节 免疫学方法及其在中医研究中的应用 1．免疫学的主要方法。 2．用免疫学方法研究中医的现状。 第七节 核医学方法及其在中医研究中的应用 1．核医学的主要研究方法。 2．用核医学方法研究中医的现状。 第八节 分子生物学方法及其在中医研究中的应用 1．分子生物学的主要技术和方法。 2．用分子生物学方法研究中医的现状。  本次课的应用教具  多媒体设备。   第四节 生物化学方法及其 在中医研究中的应用 （2学时） 生物化学是运用化学理论和技术来研究组成生物体的基本成分及其在生物体内所进行的化学变化规律的一门学科，从而揭示生命现象的化学本质。 生物化学的发展可以分为静态生化、动态生化和机能生化三个阶段，这三个阶段并不是截然分开的，它反映了人们对生命活动认识的深入过程。 静态生化，推测主要指以分离、制备、纯化和检测某物质。 动态生化，推测主要指活体内的化学反应，及其动态平衡。 机能生化，推测主要指研究某化学物质分子结构与功能的关系。 （引言部分比较全面完整地介绍了生化的发展历程，及其灿烂的里程碑） “从发扬中医学角度来说，掌握生物化学理论和技术，不仅能更深刻理解人体的生长、发育、壮盛、衰老等问题，而且从蛋白质、核酸的分子结构变化来探讨疾病的诊断、治疗和预防，无疑会起到如虎添翼的作用。” 6．4．1生物化学的主要方法 生物化学技术是研究生物内物质的化学组成、结构、功能以及在生命过程中化学物质代谢变化规律，调节控制等的实验方法。常用的生物化学技术主要有物质的分离、提纯法，光谱法，层析法，电泳法，离心法以及分子杂交技术等，现分述如下： 6．4．1．1生物大分子物质的分离和提纯（介绍书上内容，这里介绍整个流程） 生物大分子主要指蛋白质、核酸、糖类和脂类等物质。制备高度纯化的生物大分子是研究大分子结构与功能的前提，整个分离提纯过程可分为以下几个阶段：1）材料选择。2）细胞破碎。3）亚细胞器的分离。4）提取。5）分离纯化。6）浓缩、干燥及保存。 6．4．1．2离心技术（四大技术之一，介绍书上内容，分别介绍以下：） 1．差速离心法。 2．密度梯度离心法。1）速度区带离心法。2）预制梯度等密度离心法。3）自成梯度等密度离心法。 3．沉降平衡离心法。 6．4．1．3层析技术（四大技术之一，介绍书上内容，分别介绍以下：） 1．根据分离的原理可划分为：1）吸附层析。2）分配层析。3）离子交换层析。4）凝胶层析。5）亲和层析。 2．根据两相物理状态可划分为：1）液相层析。2）气相层析。 3．根据支持物的装填方式可划分为：柱层析、薄层层析、纸层析。 6．4．1．4电泳技术（四大技术之一，介绍书上内容，分别介绍以下：） 目前采用的电泳大致有三大类：显微电泳、自由界面电泳和区带电泳。 区带电泳分类如下： 1）按支持物的物理性状不同可分为：（1）滤纸及其他纤维纸电泳，（2）粉末电泳，（3）凝胶电泳、（4）缘线电泳。 2）按支持物的装置形式不同可分为：（1）平板式电泳，（2）垂直板式电泳，（3）垂直柱式电泳，（4）连续液动电泳。 3）按pH的连续性不同可分为：（1）连续pH电泳，（2）非连续pH电泳。 6．4．1．5光谱技术（四大技术之一，介绍书上内容，分别介绍以下：） 1．比色分析法。1）标准对照法。2）标准曲线法。 2．分光光度法。 3．荧光光度。 4．比浊法。 以上这些技术，被称为生化的四大技术，很传统的。大体可以满足静态生化、动态生化的检测，而机能生化则首先有赖于对化学物质的结构认识，这样的研究目前十分热门，自然杂志专门有关于蛋白质三级机构图的专刊，目前积累迅速。而研究则是一条长链，有许多环节构成，投入成本高。 6．4．1．6分子杂交技术（详见有关章节） 6．4．2 用生物化学方法研究中医的现状 （该章节引用了大量的国内研究进展资料，值得仔细阅读） 6．4．2．1物质代谢 介绍了：阴虚、阳虚、心气虚、肝气虚、脾虚、肺虚、肾虚、体质学说与物质代谢（其中毛良、顾文聪（我校教师）） 6．4．2．2能量代谢 介绍了：心气虚、肝血虚、脾虚证、体质学说与能量代谢（其中匡调元为我校教师） 6．4．2．3神经内分泌 介绍了：阴虚、阳虚、心气虚、肝、脾虚、肺虚、肾虚、与神经内分泌（其中赵伟康、金国琴、为我校教师），（沈自尹、王文健华山医院藏象研究室，在肾虚证研究方面全国领先） 6．4．3 用生物化学方法研究中医药的范例 6．4．3．1中医阴虚火旺证的研究（主要介绍我校的经验） 6．4．3．2补肾益精方药对老年动物（肾虚衰老）下丘脑-垂体-肾上腺-胸腺轴作用的实验研究（主要介绍我校的经验） 6．4．4 展望 存在问题： 1）绝大多数研究停留在一般物质指标变化的分析上，尤其对于基因水平研究大多还处于起步阶段，其主要原因可能是由于中药成分的复杂性，难以建立合适的动物模型，缺乏现代生化实验技术与设备等； 2）其次从各地科研研究成果来看，大多是根据中医药理论，自己拟订的检测指标，缺乏统一的标准，影响了对临床疗效的评估，难以推广。