上海中医药大学《实验中医学》教案（6） 课程名称 实验中医学（理论部分） 总学时数 36 专业 中医基础和中医临床专业 授课教师 方肇勤 内容 细胞生物学研究方法及其在中医研究中的应用 时数 2  本次课目的要求  1．掌握细胞生物学的概念及内容。 2．掌握细胞培养的概念，细胞培养技术的作用及其优点和局限性。 3．了解细胞生物学研究的主要技术（包括细胞培养技术，形态学观察技术，细胞化学技术，细胞结构成分的离心分离技术和分析细胞学技术）。 4．了解细胞生物学在中医药研究中的现状。 5．了解中医的细胞培养研究范例。  本次课的重点难点  1．细胞生物学研究的主要技术。 2．细胞生物学在中医药研究中的现状，经验和教训。 3．中医的细胞培养研究范例的合理与不合理。  本次课的应用教具  多媒体设备。   第五章 细胞生物学研究方法及其在中医研究中的应用 （2学时） 通知：考试时间不变，请安排复习。 一．一些基本的问题（课堂提问，要求2-4个同学回答） 1．人、动物、细胞作为实验对象的异同？ 2．动物可不可以用来研究中医？ 动物不会讲话，无法交流；望闻问切困难，生物、生理上与人类有巨大区别。怎么办？ 有没有有利的地方，优越于人的？ 3．细胞可不可以用来研究中医？ 似乎还不如动物，连整体都没有了，如何用药、如何辨证、如何整体观？ 有没有有利的地方，优越于动物的？ 4．你如何选择细胞生物学来研究中医？ 能不能举一些例子？ 比如从某一项实验展开。回答可以用二仙汤为例，或肿瘤研究为例。 二仙汤：1）有无作用；2）哪些组合、配伍、药物有效；3）药物的有效部位、成分、及其组合；4）被调控的组织、系统、器官； 5）被调控的基因、基因组；6）整个调节链、网。用到不同的实验对象。 二．离体和在体研究的利弊。 解释“离体” 和“在体”。 细胞培养的优点 1）因素单纯：培养细胞不受体内各种复杂因素的影响。 2）实验条件易控：人为改变培养条件，即可观察细胞在单因素或多因素影响下的生理改变。 3）重复性好：可避免种属及个体之间的差异。 4）方法简便：便于使用各种技术方法观察研究活细胞的形态结构和生命活动。 5）结果易于分析。 6）经济：节约动物、药物。 7）快速：可在较短时间内获得较多的实验样品和研究结果。 8）便于应用人体组织。 整体实验的优点 1）保持了机体的完整性，神经、体液、脏腑、组织、药物代谢，等。 2）符合临床用药。 3）取材不受限制，创伤实验不受限制（不伤害人，或人不可以的实验）。 4）数量满足方便。 其他优点与细胞培养类似，即相对于人而言： 5）实验条件易控：人为改变培养条件，即可观察细胞在单因素或多因素影响下的生理改变。 6）重复性好：可避免种属及个体之间的差异（纯系动物）。 7）方法简便：便于使用各种技术方法观察研究活细胞的形态结构和生命活动。 8）结果易于分析。 9）经济：节约药物和其他费用。 10）实验周期较短。 三．具体实验形式不是孤立的，是有密切联系的 几种用途 1．观测不同组织细胞的生物特性及其中医药调整作用 2．观测不同肿瘤细胞，了解中医药对生物学特征，包括转移、分化、凋亡等影响 3．细胞系，目的同上，而细胞稳定，而以上原代细胞的部分生物特性，可能会逐渐消失。 4．工具，主要为细胞系，作为一种载体使用。比如研究基因的表达与调控，经常使用报道基因技术、哺乳类载体技术、基因转移技术，等（简单介绍）。 四．细胞体外培养的一些基本理论和知识 1．细胞周期（增殖态） G1+S+G2+M G1：细胞分裂后期，DNA合成前。 S：DNA合成期，DNA增加一倍（拷贝） G2：介于S与 M之间，时间短。 M：细胞有丝分裂期。 2．不同的称谓和意义 名称 原代培养 细胞系阶段 首次转化 （指数生长期） 连续细胞系（不死） 有限细胞系（死亡）  时间 0~2周 2~12周 12周以上  * 50代，大约25~50周（6~12月）。 3．讲义上引言部分介绍。 五．细胞生物学研究的主要技术，介绍书上内容 1．细胞培养技术 1）细胞体外培养的一般条件 （1）培养基 （2）培养环境 2）细胞培养的基本步骤 原代细胞（从机体取出后直接培养的细胞） 传代细胞（适合在体外培养条件下继续培养的细胞）。 3）培养细胞的生长与观察 2．形态学观察技术 3．细胞化学技术 1）酶细胞化学技术 2）免疫细胞化学技术 3）放射自显影技术 4．细胞结构成分的离心分离技术 5．分析细胞学技术 1）流式细胞计（FCM） FCM（flow cytometer），又称荧光激活细胞分类仪（Fluorescence activated cell sortor, FACS），流体喷射+激光+空气计数+γ射线能谱术+计算机+显微荧光光度计。方法：细胞分离、固定、染色、通过、检测、分析。可以分析单细胞和群体细胞。速度：5000个细胞/秒！ 2）显微分光光度计（MSP） MSP（microspectrophotometer，细胞光度计），光学显微镜+荧光显微镜+分光光度计。对细胞内的某些重要的生物分子（如DNA 、RNA、蛋白质等）的含量进行定量测试。 3）激光共聚焦仪（interactive laser cytometer） 建立于显微分光光度计与流式细胞计基础之上，研究单细胞水平的结构、功能、应答反应。 4）图像分析系统（IAS） IAS是分析细胞学中的主要测量手段之一，常用于细胞形态分析、白细胞和红细胞分类、肿瘤细胞分析、染色体核型分类、微血管系统分析等方面。 5．2细胞生物学在中医药研究中的现状（自修，部分解释）