上海中医药大学《实验中医学》教案（7） 课程名称 实验中医学（理论部分） 总学时数 36 专业 中医基础和中医临床专业 授课教师 方肇勤 内容 实验中医学常用的实验研究方法及其在中医研究中的应用 时数 16  本次课目的要求 1．掌握不同学科实验研究方法的特点和优势。 2．掌握如何根据实验研究的要求选择实验研究方法（包括一种或几种方法）。 3．了解各学科的主要实验研究方法。 4．了解各学科实验研究方法在中医药研究中的应用。 5．了解了解各学科研究中医药学的现状。  本次课的重点难点 第一节 解剖学方法及其在中医研究中的应用 1．大体解剖学的主要方法。 2．大体解剖学方法研究中医的现状。 第二节 组织学方法及其在中医研究中的应用 1．组织学的主要研究方法。 2．组织学方法研究中医的现状。 第三节 电镜技术及其在中医研究中的应用 1．电子显微镜及电子显微术概况。 2．电子显微术研究中医的现状。 第四节 生物化学方法及其在中医研究中的应用 1．生物化学的主要方法。 2．生物化学方法研究中医的现状。 第五节 生理学方法及其在中医研究中的应用 1．生理学的主要方法。 2．生理学方法研究中医的现状。 第六节 免疫学方法及其在中医研究中的应用 1．免疫学的主要方法。 2．用免疫学方法研究中医的现状。 第七节 核医学方法及其在中医研究中的应用 1．核医学的主要研究方法。 2．用核医学方法研究中医的现状。 第八节 分子生物学方法及其在中医研究中的应用 1．分子生物学的主要技术和方法。 2．用分子生物学方法研究中医的现状。  本次课的应用教具  多媒体设备。   第五节 生理学方法及其 在中医研究中的应用 （2学时） “人体生理学是研究人体机能活动及规律的科学，又是一门实验性科学。” 该段的其余部分简述了生理学的发展历史。 第二段主要讲了与中医的关系。可以就这样的问题展开：如何用生理的方法去研究中医，比如脾虚证的辨证标准、辨证分型、辨证论治及其机理，有没有办法？比如对心脏搏动，不同中医药的作用，表现在什么地方？不用生理的方法行不行？ 6．5．1 生理学的主要方法 该段介绍了“现代生理学” 两大研究方法的分类，即急性实验和慢性实验两类： 1. 急性实验法（包括离体组织、器官实验法）其优点是可以人工控制条件，有利于排除其它因素，专对某器官组织的基本功能和生理特性进行较细致的观察与分析，缺点是动物脱离整体或受解剖或麻醉的影响下进行的，所得结果常有一定的局限性。有没有事例？拿不同的肿瘤组织来说，细胞膜上一些生物泵功能的离体检测，中药的调整作用，发生的时间。 2. 慢性实验法是在完整的正常动物机体上对某种生命现象进行观察和实验研究。这种方法所得资料更符合正常的生理活动规律，但实验的难度大、要求高。上述两种实验方法可以取长补短，互相补充。这样的例子会很多，大家能不能举一些例子？ 第二段，介绍了另外的分类方法，即“根据生理学研究的层次不同，又可以分成三个水平：细胞水平、器官水平和整体水平”。这样分还在于讲清了由表入里、由浅入深的研究过程。而医学实验中为了说明问题，往往需要反反复复的这样的研究，从粗到细，再从细到粗，直到把问题搞清楚。还是看看消化道，比如腹泻，可以举出不同层次的观察吗？意义如何？又比如呼吸系统，如哮喘，可以举出不同层次的观察吗？意义如何？ 有哪些方法，这里没有办法一一介绍，百分之一也难，所以，教材推荐参考文献1-7所列举的专著，以及专题检索有关学术刊物。我们一道来看看。 6．5．1．1 生理学实验常用仪器 请注意，这里介绍的主要是以生物电激发和检测的常用仪器。应该还有许多。 “阴极射线示波器。”介绍书上内容。这类设备很经典，目前不少已经电脑化，或者直接与电脑相连，利用电脑进行信号处理、存储。 “生物信号放大器、电子刺激器、多道生理记录仪、生理数据处理机。”（介绍书上内容，可以考虑举例） “膜片钳实验装置。”做膜片钳实验除了一般电生理所需的仪器外，特殊的仪器有膜片钳放大器、倒置显微镜、三维液压微操纵器、微电极拉制仪和计算机及相关软件等。因为膜片钳实验所用的标本多数是放在培养皿中的细胞，需要在相差倒置显微镜下，借助微操纵器进行操作。膜片钳放大器内通常含有一个标准的差分放大器线路，将记录到的电流以电位差的形式输出，所以膜片钳放大器的核心部分是一个高增益的电流-电压转换器，具有高输入阻抗，低躁声，宽频带等特性。此外，还有频率提升部分，加法器，瞬时补偿和钳位放大器等部件组成。 6．5．1．2 生理学实验常用的方法 神经系统。电生理学方法是研究神经或神经-肌肉机能状态的常用的方法。尤其是细胞外记录方法，利用可兴奋组织（如神经、肌肉）的生物电现象，观察组织细胞的正常功能、病理变化及药物的作用。细胞外记录法是把引导电极安放在神经、肌肉组织的表面或附近，引导神经、肌肉组织的电活动。由于可兴奋细胞兴奋时其兴奋的部位产生去极化，未兴奋的部位处于正常极化状态，在容积导体中的两部位间由于电位不同，电流从一点流向另外一点，放置于细胞表面的电极就会记录出两者之间所产生的电位差。如在针刺镇痛原理的研究中有人用剥制细束法记录猫外周神经中单位电活动、脊髓白质中单位电活动、脊髓电位等方法和脑电图、脑诱发电位、脑干电位的记录等，在“肾主耳”的研究则是采用内耳生物电（听神经动作电位、内耳毛细胞微音器电位）记录“肾”与内耳听觉功能的关系。这些方法均为常用的细胞外记录方法。 随着生理学研究发展到细胞水平，开始采用细胞内记录的方法，这是研究神经、肌肉等细胞基本生物物理特性的有力手段。如欲记录膜电位，必须结合玻璃微电极技术，将电极插入细胞膜内，这种方法称细胞内记录法，用于测量膜电位、神经元的兴奋性突触后电位（EPSP）和抑制性突触后电位（IPSP）等。近二十年来发展出的膜片钳技术，是一种可以控制跨膜电位用来研究细胞膜离子单通道的理想技术。膜片钳技术的应用使生理学研究进一步发展到了微观的分子水平。 循环系统。无创伤心功能测定（包括心电图ECG、心音图PCG、颈动脉搏动描记曲线CPT和心尖搏动图ACG）、心室肌收缩功能的测定、血管张力测定、脉搏图的测定等方法是研究“心主血脉”、脉象的常用的方法。用微循环显微镜系统进行甲襞微循环观察的方法是研究“血瘀证”的常用指标。 呼吸系统。通过呼吸运动描记方法，可以测定肺功能状况，这些方法包括胸腔内压记录、胸廓运动记录、呼吸肌活动及肌电图描记、呼吸气流速度测定等方法。例如观察“肺气虚”时肺功能受损情况，这些方法都是经常使用的。 消化系统。胃肠电图和胃肠运动波的记录方法能反应胃肠功能状况，是研究“脾主运化”的常用指标；木糖吸收试验和唾液淀粉酶活性测定已被公认为“脾气虚证”的客观指标。 6．5．2 用生理学方法研究中医的现状与范例 第一段介绍了中医生理研究的特殊性。 第二段，提出中医学必须吸取现代科学技术的精华，包括把生理学的实验手段引用到中医研究中来。 第三段简述了近半个世纪来，中医药生理研究进展。主要集中在针灸、针麻原理，听觉生理，胃肠电生理等方面的工作。 以后主要介绍我校曾兆麟教授课题组肾与耳关系开展的工作。可以介绍。 以及广州中医药大学王建华教授课题组脾主运化的研究工作。可以介绍。 6．5．3 展望 随着计算机技术、分子生物学技术、显微技术向生理学的渗透，这几年生理学实验手段、方法有了新的发展，生理研究已深入到单细胞离子通道的研究；同时，学科的交叉、渗透，研究生理现象已往往同时借助于其它学科的方法、指标，使结果更为丰富、可靠。 可以预计，随着大量的新技术、新方法的引入，生理学在中医药现代化的进程中必将发挥积极的作用。