第十一章
抗生素类药物
的分析
第一节 概述
抗生素的定义
抗生素是细菌、放线菌和真
菌等微生物的代谢产物，对各种
病原微生物有强大的抑制或杀灭
作用。
抗生素的来源
1,生物合成（发酵）
2,化学合成或半合成
抗生素质量的复杂性
产品稳定性差 分子结构大多不稳
定，降解后疗效下
降、失效或增加毒
副作用
发酵过程不易控制
易受污染
生产工艺复杂
发酵液中杂质
无机盐、脂肪、各种蛋白质、
各种降解产物、色素、热原、
毒性物质
增加 异常毒性、细菌内毒素、
热原、降压物质、无菌
[检查 ]
含量测定方法
（一）生物学方法
测定抗生素抑菌或杀菌的能力
优点 1、与临床效果一致
2、灵敏度高
3、干扰物质少
缺点 1、操作繁琐
2、培养时间长
2、测定误差大
（二）化学及物理化学方法
以理化方法测定主药含量
优点 1,准确度高
2,简单、快速
1,不一定代表生物效价缺点
2,易受杂质干扰
分类 （按结构与性质）：
β–内酰胺类、氨基糖苷类、
四环素类、大环内酯类、
氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类
林可霉素类、其他抗生素类
N
S
C H
3
C H
3
C O O H
O
H N
1
2
34
56
7
R C O
母核（6 - 氨基青霉烷酸）
第二节 β –内酰胺类抗生素
青霉素类
头孢菌素类
7 6
5
4
3
2
1
N
O
N H
S
C H
2
R
1
C O O H
母核（7- 氨基头孢菌烷酸）
R C O
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
青霉素
（青霉素 G、苄青霉素）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
氨苄西林
（氨苄青霉素）
阿莫西林
（羟氨苄青霉素）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
H O C H 2
C 2 H 5
2
N C H 2 C H 2 O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2
普鲁卡因青霉素
头孢氨苄
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
OC
N H 2
C H 2
头孢拉定
C H 2
N H 2
C O
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
头孢羟氨苄
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
OC
N H 2
C H 2H O
头孢噻吩钠
S
C H 2 C O
N
O
N H
S
C H 2 O C O C H 3
C O O N a
N
S
O
H N
C O O K
C H 3
C H 3
OCC H 2
酸性
结构与性质一、
Na
与碱金属 (Na+,K+)成盐
（一）羧基
易溶于水
与有机碱 (普鲁卡因 )成盐 难溶于水
普鲁卡因 青霉素
C 2 H 5
2
N C H 2 C H 2 O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2
N
S
O
1
2
3
4
56
7
（二）手性 C
8
7 6
5
4
3
2
1
N
O
S
(5%头孢唑啉钠溶液 –18～ –24° )20
D］［ ?
头孢菌素类 C6 C7
青霉素类 C3 C5 C6
旋光性
﹡ ﹡
﹡
﹡ ﹡
（三）共轭体系
N
S
O
头孢菌素类 母核有共轭体系
青霉素类 母核无明显 UV
多数有苯环取代基
N
O
S
UV
青霉素钠 UV7-20
（四） β–内酰胺环
水溶液 不稳定
干燥纯净 稳定
不稳定
性因素
四元环张力大
酰胺键易水解
（某些金属离子）
（温度） 失效
降解
青霉素类
酸、碱、青霉素酶
?????? ??
某些氧化剂
例 青霉素的降解反应
青
霉
素
青霉噻唑酸H2O/OHˉ
青霉素酶
青霉酸H2OpH2 100℃
α–青霉噻唑
酰基羟胺酸
NH2OH
青霉烯酸pH4
青霉胺
CO2
青霉醛
HgCl2
失效
降解
头孢菌素类
酸、碱、胺类
????? ??
内酰胺酶??
二、
K+,Na+反应（一）
鉴别
焰色 →鲜黄色
+ 醋酸氧铀锌 →↓黄Na
+
焰色 →紫色
+ 0.1%四苯硼钠 + Ac→↓白K
+
（二）呈色反应
1,羟肟酸铁反应 β-内酰胺类
NaOH ????? ????
?? H C lNO HH内酰胺类
呈色
羟肟酸衍生物
Fe3+/3
H+
N
S
O
N
S
CO H
N H O H
H 2 N O H H C l
N
S
C H
N H
O
F e
3 +
3
O
H+Fe3+/3
（红、棕、褐）
2,与 H2SO4 - HNO3反应
亮黄
红棕
黄色
头孢噻肟钠
头孢噻吩钠
头孢氨苄
????? ??
???? H N OSOH
头孢菌素类
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
3,茚三酮 反应
蓝紫色氨基 茚三酮 ??? ???? △
α -氨基
α-氨基、伯胺
某些羟基胺类 酮式
烯醇式
茚三酮
茚三酮
缩合
蓝紫色
+
H
2
O
C N C H
2
R
C O H
2
R
C HH
2
N C O O H
2
O HC
C O
C O
C
O H
N H
2
C
C O
C O
C O
C
O H
CNC
C O
C O
C O
C
O H
C H RNC
C O
C O
C O
4,双缩脲反应 β-内酰胺类
?? CO NH
紫内酰胺类 碱性酒石酸铜 ????? ???? （开环分解）
似肽键
2
O H
C O
N H
2
C u
C O H N
C
C H
3
C O O N a
C H
3
S
N
H N
C H
3
C H
3
C O O N a
C
S
N
O
H O
H O
O
C H
2
N H
2
C H
2
H
H
蓝紫色
5,与变色酸 -硫酸反应
活泼,-CH2-”
青霉素
阿莫西林
氨苄西林
H C H OCH SOH ??? ???? ???,羰基侧链含,△ （分解）
变色酸
显色
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
H O C H 2
??? ????? ?? ?? 变色酸阿莫西林 H C H OSOH
150℃ （缩合） 色
褐
S O 3 H
S O 3 H
H O
H O
S O 3 H
S O 3 H
H O
H O O H
O H
H O 3 S
H O 3 S
C H
HCHO ? ?? ?
（缩合）
6,与重氮苯磺酸反应
橙黄色重氮苯磺酸 ????? ???? ?? OHHC （偶合）
酚羟基
头孢哌酮
S
N
O H
C O N HC HC O N HH 5 C 2
O O
NN
O
C O O H
C H 2 S
N
NN
N
C H 3
N C lNN a O 3 S
?OH
（偶合）
N
NN
N
C H 3
S
N
O H
C O N HC HC O N HH 5 C 2
O O
NN
O
C O O H
C H 2 S
NNN a O 3 S
7,与铜盐反应
??? ???? ?? ?C u S OH A c头孢氨苄
橄榄绿色
NaOH专属反应
（三）沉淀反应
1,遇酸 →↓
白青霉素青霉素钠
青霉素钾
??? ??
?H
在过量 HCl或
有机溶剂中溶解
2,有机胺盐反应
（ 1）重氮化 - 偶合反应
青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素 ??? ??
?H
重氮化 -偶合反应
红?
芳伯氨基
C
2
H
5 2
N C H
2
C H
2
O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H
3
C H
3
OC
H
+
C
2
H
5
2
C H
2
N H
2
H
2
N C O O C H
2
C H
2
N
普鲁卡因
普鲁卡因青霉素
N C H 2 C H 2 O O C
2
C 2 H 5
N
+
C l
-
N
2
C 2 H 5C O O C H 2 C H 2 N
N H 2
H C lN a N O 2 ?
（ 2）与三硝基苯酚反应
?????? ???
??? ??
三硝基苯酚
二苄基乙二胺苄星青霉素
N a O H
△
二苄基乙二胺
mp
三硝基苯酚
H
2
O
H
O H
-
H
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H
3
C H
3
C H
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
O H
N O
2
O
2
N N O
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
光谱法（四）
1,UV法
A,Em in,m ax,,%1 cm1??光谱图
样品、分解产物
nm339
H A??? ?? ? 苯唑青霉烯酸苯唑青霉素 Cu2+
头孢氨苄 λmax = 262nm
青霉素 V钠
A280nm/A264nm = 1.30～ 1.50
N
O
C O N H
C H 3
N
O
S
C H 3
C H 3
C O O N a
N
O
C H
C H 3
O
C O
CN
H N
C H H C
C H 3
C H 3
S H
C H C O O H
Cu2+ pH3.8
△
氯唑青霉素 341 0.682
双氯青霉素 342 0.653
苯唑青霉素 339 1.328
m a x?
%1
cm1E(nm)
? ?ml/g50 ?
2,IR法
117401815 ?? cm~V OC
116901710 ?? cm~V OC
β-内酰胺环
酰胺
3,NMR法
利用不同结构的原子核在 D2O中有
不同的 NMR光谱进行鉴别
JP
以吸收峰频率对峰强度进行作图
主要研究原子核的磁化性质及其在
外磁场中的运动规律
硫酸庆大霉素 NMR谱 7-08硫酸庆大霉素 NMR
色谱法（五）
1,TLC法
对照品对照法
和斑点颜色比较
供试品
对照品 相同条件
fR???? ??
2,HPLC法
Rt比较
供试品
对照品 相同条件
???? ??
精密称取样品 0.1009g，置 250ml碘瓶中，
加水 10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液
(0.1mol/L)25.0ml，再加盐酸 5ml，立即密塞
并振摇 1分钟，在暗处静置 15分钟后，注意
微开瓶塞，加碘化钾试液 10ml，立即密塞，
摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（ 0.09863mol
/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继
续滴定至蓝色消失，消耗硫代硫酸钠滴定液
(0.09863mol/L)13.80ml，并将滴定结果用空
白试验校正，空白试验消耗硫代硫酸钠滴定
液（ 0.09863mol/L） 21.64ml。每 1ml溴滴定
液 (0.1mol/L)相当于 13.01mg的 C12H17N2NaO3。
N
S
O
H N
C O O K
C H 3
C H 3
OCC H 2
酸性
结构与性质一、
Na
与碱金属 (Na+,K+)成盐
（一）羧基
易溶于水
与有机碱 (普鲁卡因 )成盐 难溶于水
普鲁卡因 青霉素
C 2 H 5
2
N C H 2 C H 2 O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2
N
S
O
1
2
3
4
56
7
（二）手性 C
8
7 6
5
4
3
2
1
N
O
S
(5%头孢唑啉钠溶液 –18～ –24° )20
D］［ ?
头孢菌素类 C6 C7
青霉素类 C3 C5 C6
旋光性
（三）共轭体系
N
S
O
头孢菌素类 母核有共轭体系
青霉素类 母核无明显 UV
多数有苯环取代基
N
O
S
UV
青霉素钠 UV7-20
（四） β–内酰胺环
水溶液 不稳定
干燥纯净 稳定
不稳定
性因素
四元环张力大
酰胺键易水解
（某些金属离子）
（温度） 失效
降解
青霉素类
酸、碱、青霉素酶
?????? ??
某些氧化剂
例 青霉素的降解反应
青
霉
素
青霉噻唑酸H2O/OHˉ
青霉素酶
青霉酸H2OpH2 100℃
α–青霉噻唑
酰基羟胺酸
NH2OH
青霉烯酸pH4
青霉胺
CO2
青霉醛
HgCl2
失效
降解
头孢菌素类
酸、碱、胺类
????? ??
内酰胺酶??
(头孢噻吩钠水溶液 25℃ 24h失活 8%)
二、
K+,Na+反应（一）
鉴别
焰色 →鲜黄色
+ 醋酸氧铀锌 →↓黄Na
+
焰色 →紫色
+ 0.1%四苯硼钠 + Acˉ→↓白K
+
（二）呈色反应
1,羟肟酸铁反应 β-内酰胺类
NaOH ????? ????
?? H C lNO HH内酰胺类
呈色
羟肟酸衍生物
Fe3+/3
H+
N
S
O
N
S
CO H
N H O H
H 2 N O H H C l
N
S
C H
N H
O
F e
3 +
3
O
H+Fe3+/3
（红、棕、褐）
例,ChP(2000)头孢哌酮
[鉴别 ]
取本品 10mg,加水 2ml与盐
酸羟胺溶液 [取 34.8%盐酸羟胺溶
液 1份, 醋酸钠 -氢氧化钠溶液 1份,
乙醇 4份 ]3ml,振摇溶解后, 放置
5min,加酸性硫酸铁铵试液 1ml，
摇匀, 显红棕色 。
2,与 H2SO4 - HNO3反应
蓝绿色
红棕
黄色
头孢噻啶
头孢噻吩钠
头孢氨苄
????? ?? ???
? H N OSOH
头孢菌素类
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
3,茚三酮 反应
蓝紫色氨基 茚三酮 ??? ???? △
α-氨基、伯胺
某些羟基胺类 酮式
烯醇式
茚三酮
茚三酮
缩合
蓝紫色
+
H
2
O
C N C H
2
R
C O H
2
R
C HH
2
N C O O H
2
O HC
C O
C O
C
O H
N H
2
C
C O
C O
C O
C
O H
CNC
C O
C O
C O
C
O H
C H RNC
C O
C O
C O
4,双缩脲反应 β-内酰胺类
?? CO NH
紫内酰胺类 碱性酒石酸铜 ????? ???? （开环分解）
似肽键
2
O H
C O
N H
2
C u
C O H N
C
C H
3
C O O N a
C H
3
S
N
H N
C H
3
C H
3
C O O N a
C
S
N
O
H O
H O
O
C H
2
N H
2
C H
2
H
H
蓝紫色
5,与变色酸 -硫酸反应
活泼,-CH2-”
青霉素
阿莫西林
氨苄西林
H C H OCH SOH ??? ???? ???,羰基侧链含,△ （分解）
变色酸
显色
??? ????? ?? ?? 变色酸阿莫西林 H C H OSOH
150℃ （缩合）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
H O C H 2
色
褐
S O 3 H
S O 3 H
H O
H O
S O 3 H
S O 3 H
H O
H O O H
O H
H O 3 S
H O 3 S
C H
HCHO ? ?? ?
（缩合）
6,与重氮苯磺酸反应
橙黄色重氮苯磺酸 ????? ???? ?? OHHC （偶合）
酚羟基
头孢哌酮
S
N
O H
C O N HC HC O N HH 5 C 2
O O
NN
O
C O O H
C H 2 S
N
NN
N
C H 3
N C lNN a O 3 S
?OH
（偶合）
N
NN
N
C H 3
S
N
O H
C O N HC HC O N HH 5 C 2
O O
NN
O
C O O H
C H 2 S
NNN a O 3 S
7,与铜盐反应
??? ???? ?? ?C u S OH A c头孢氨苄
橄榄绿色
NaOH专属反应
（三）沉淀反应
1,遇酸 →↓
白青霉素青霉素钠
青霉素钾
??? ??
?H
在过量 HCl或
有机溶剂中溶解
2,有机胺盐反应
（ 1）重氮化 - 偶合反应
青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素 ??? ??
?H
重氮化 -偶合反应
红?
芳伯氨基
C
2
H
5 2
N C H
2
C H
2
O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H
3
C H
3
OC
H
+
C
2
H
5
2
C H
2
N H
2
H
2
N C O O C H
2
C H
2
N
普鲁卡因
普鲁卡因青霉素
N C H 2 C H 2 O O C
2
C 2 H 5
N
+
C l
-
N
2
C 2 H 5C O O C H 2 C H 2 N
N H 2
H C lN a N O 2 ?
（ 2）与三硝基苯酚反应
????? ???
??? ??
三硝基苯酚
二苄基乙二胺苄星青霉素
N a O H
△
二苄基乙二胺
mp
三硝基苯酚
H
2
O
H
O H
-
H
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H
3
C H
3
C H
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
O H
N O
2
O
2
N N O
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
光谱法（四）
1,UV法
A,Em i n,m a x,,%cm????光谱图
样品、分解产物
头孢氨苄 λmax = 262nm
青霉素 V钠 A280nm/A264nm = 1.30～ 1.50
苯唑青霉烯酸苯唑青霉素 ?? ??
?H
Cu2+
nmA ????
N
O
C O N H
C H 3
N
O
S
C H 3
C H 3
C O O N a
N
O
C H
C H 3
O
C O
CN
H N
C H H C
C H 3
C H 3
S H
C H C O O H
Cu2+ pH3.8
△
氯唑青霉素 341 0.682
双氯青霉素 342 0.653
苯唑青霉素 339 1.328
m a x?
%
cmE
?
?(nm)
? ?ml/g???
2,IR法
117401815 ?? cm~V OC
116901710 ?? cm~V OC
β-内酰胺环
酰胺
3,NMR法
利用不同结构的原子核在 D2O中有
不同的 NMR光谱进行鉴别
JP
主要研究原子核的磁化性质及其在
外磁场中的运动规律
色谱法（五）
1,TLC法
对照品对照法
和斑点颜色比较
供试品
对照品 相同条件
fR??? ??
2,HPLC法
Rt比较
供试品
对照品 相同条件
??? ??
三,含量测定
?? ??? ????? ?? ? IIN a O H
头孢菌素族
青霉素族 （水解）
?H
碘量法（一）
1,原理 水解产物
??????? ?? OSNaNa IOSNaI ＋＋
定量过量
剩余
β-内酰胺类ChP
反应分两步进行：
1,水解反应 (按化学计算量进行 )
2,氧化 -还原反应 (无固定的量关
系, 受温度, PH值和时间等因素
影响, 应严格控制反应条件并采
用标准品平行对照测定 )
N
S
C H 3
C H 3
C O O HO
H NR C O
R C O
H
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
S
N
COON a
I24 + 5 H 2 O + 2 H C l
N a O H
C
C H 3
C H 3 S O
3 H
C H
N H 2
C O O HC H
N H C O R
C O O H 2
+2 N a C l
+
+
8HI
第一步
第二步
例 注射用普鲁卡因青霉素 含量测定
取装量差异项下的内容物，精密称
取约 0.12g，置 100ml量瓶中，加水使溶
解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 5ml，
置碘瓶中，加 1mol/L氢氧化钠溶液 1ml
放置 20分钟，再加 1mol/L盐酸溶液 1ml
与醋酸 -醋酸钠缓冲液 (pH4.5)5ml，精密
加入碘滴定液 (0.01mol/L)15ml，密塞，
摇匀，在 20～ 25℃ 暗处放置 20分钟，用
硫代硫酸钠滴定液（ 0.01mol/L）滴定，
至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并
强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供
试品溶液 5ml，置碘瓶中，加醋酸 -醋酸
钠缓冲液（ pH4.5） 5ml，精密加入碘滴
定液（ 0.01mol/L） 15ml，密塞，摇匀，
在暗处放置 20分钟，用硫代硫酸钠滴定
液（ 0.01mol/L）滴定，作为空白。同时
用青霉素钠对照品同法测定作对照，算
出供试品的含量。
V样空
V样
对照液 +缓冲液 +碘液 +回滴+碱 +酸 +缓冲液 +碘液 +回滴
V对空
V对
2,方法
供试液 +缓冲液 +碘液 +回滴
+碱 +酸 +缓冲液 +碘液 +回滴
? 空白试验
A、消除样品已降解产物的干扰
B、消除样品中其他消耗碘的杂
质的干扰
C、消除碘挥发造成的误差
以未经水解的样品作空白测定
空白 样品
I2
Na2S2O3
I-
I2
? 采用标准品平行对照测定
A、可消除温度,pH、操作、环
境等条件的影响
B、使本法测定结果与微生物检定
法一致
3,条件
（ 1）弱酸性 pH4.5
碱 ↑ I2 → IO3- + I-
酸 ↑ 普鲁卡因与碘在酸性条件
下会产生复盐沉淀
（ 2）温度 24～ 26℃
温度 ＞ 38 ℃
未水解的供试品亦消耗碘
（ 3）水解时间
以水解 20分钟后的 耗碘量最大
（ 4）反应时间
反应 20分钟后,耗碘量随时间的
变化较小，可减小含量测定的误
差。
4,特点
（ 1）灵敏度高
样品, 碘 = 1, 8
（ 2）反应条件、实验操作要求高
V对, V对空
V样, V样空
1份含量
加试剂次序、反应时间、滴定速度相同
4I2→8I-
5,计算 原料
%
W
W
VV
VV
对照品
）（
）（
含量％＝
样
对
对对空
样样空 ??
?
?
汞量法（二）
1,原理
SHROH ??? ??
?
青霉素族 （水解）
HgRS ?）（
青霉素族ChP
??Hg??.pH
2,方法
? ?
? ?总样V
NOHgH N ON a O H ???? ????? ????? ?? ???醋酸盐缓冲液
pH4.6
滴定水解
? ?
? ?降空
醋酸盐缓冲液 VNOHg ???? ??????? ?? ??pH4.6 滴定
样
品
以未经水解的样品作空白测定
例 青霉素钠 含量测定
取本品约 50mg，精密称定，加水
5ml溶解后，加 1mol/L氢氧化钠溶液 5ml
，摇匀，放置 15分钟，加 1mol/L硝酸溶
液 5ml，醋酸盐缓冲液 (pH4.6)20ml及水
20ml，摇匀，照电位滴定法 (附录 Ⅶ A),
用铂电极为指示电极，汞 -硫酸亚汞电极
为参比电极，在 35～ 40℃,用硝酸汞滴
定液 (0.02mol/L)缓慢滴定，
（控制滴定过程约为 15分钟），不计第
一个等当点，计算第二个等当点时消耗
滴定液的量。每 1ml硝酸汞滴定液 (0.02
mol/L)相当于 7.128mg的总青霉素 (按
C16H17N2NaO4S计算 )。
另取本品约 0.5g，精密称定，加水
与上述醋酸盐缓冲液各 25ml，振摇使完
全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定
液 (0.02mol/L)滴定，终点判断方法同上,
每 1ml硝酸汞滴定液（ 0.02mol/L）相当
于 7.128mg的降解物（按 C16H17N2NaO4S
计算）。
总青霉素的百分含量与降解物的百
分含量之差值即为青霉素的含量。
3,讨论
（ 1） 以第二次滴定突跃为终点
电位法指示终点
（ 2） 反应摩尔比 1, 1
（ 3） 空白试验 消除已降解产物干扰
（ 4） 优点 不需标准品
%
W
FTV
%
W
FTV
% ????
??
?????
??
?
空
空
样
样含量
4,计算
%FT
W
V
W
V
% ???????? ）（含量
空
空
样
样
精密称取含水量为 0.5%的青霉素
钠 0.0502g，按药典方法测定总青霉素含
量时，用去硝酸汞滴定液 (0.02009mol/L)
6.97ml。另精密称取上述样品 0.5013g，
按药典方法测定降解物含量时，用去硝
酸汞滴定液 (0.02009mol/L)1.33ml。以干
燥品计算，求样品中青霉素的含量。
例 青霉素钠 含量测定
?????,T
? ?
%
%..
..
.
.
.
.
????
????????
??????????????
??
?
?
?
?
?
?????
???
?
?????
???
%.????
酸碱滴定法（三）
1,原理
青霉噻唑酸青霉素类 ??? ?? N a O H△
（钠盐）
OHN a C lHClN a O H ????（剩余）
β-内酰胺类
ChP
N
S
C H 3
C H 3
C O O N aO
H NR C O
N
S
C H 3
C H 3
C O O N a
C
H N
O N aO
R C O
? ?定量过量N a O H△
2,方法
? ???? ???? ? 供试液内酰胺类 OH
N a O H定量过量 △
?? ?? H C l回滴
中和中和
例 苯唑西林钠 含量测定
取本品约 0.5g，精密称定，加新沸
过的并用 0.01mol/L氢氧化钠溶液中和至
酚酞指示液刚显红色的水 20ml，使溶解,
再用 0.01mol/L氢氧化钠溶液中和后，精
密加氢氧化钠滴定液 (0.1mol/L)25ml，
摇匀，置水浴中加热 20分钟，注意避免
吸收空气中的二氧化碳，冷却后，加酚
酞指示液 1～ 2滴，用盐酸滴定液
（ 0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空
白试验校正。每 1ml的氢氧化钠滴定液
(0.1mol/L)相当于 40.14mgC19H19N3O5S。
? ?
%
W
FTVV
% ? ? ??
???
? 样空含量
3,讨论
（ 1） 水解前先中和溶剂和样品
（ 2） 加热时避免吸收 CO2
???? ?? ? CONaNa O H
CO△
不能使酚酞变红
（ 3） 空白试验校正 (消除 Na2CO3干扰 )
（ 4） 特点 简便快速
不适用于有残留酯的产品
? ?
%.
%
..
....
799
100
1010090
09863001301080136421
?
?
?
???
nm
CupH A
???
? ?? ???? ?? ??青霉烯酸青霉素族 （水解）
可见 -紫外分光光度法（四）
1,酸水解法（铜盐法）
（ 1）原理
稳定剂
JP
青霉素族
C H 2 C
O
C
O
N
H
H
C
C H 3
C H 3
C C O O H
CCN
H
S H
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
?pH
ACu ?? ??
??
（ 2）方法
标
样枸橼酸硫酸铜
标准液
供试液
A
A
nmA ??? ???????? ?? ? 320△
（ 3）特点
实验条件随各药物稳定性不同而定
标准品对照法
%
W
W
A
A
标准品含量
样
标
标
样 ???
（ 4）计算
2,硫醇汞盐法
（ 1）原理
青霉烯酸硫醇汞盐青霉素族 ?? ?? ?H g C l（咪唑）
nmm a x ? ? ?? ? ?? ～
青霉素族ChP
H g C l
C H 3
C H 3
C O O N a
S
N H
C
O
N
C H 2
N H
C O C H 3
N
S
O
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H
C O C H 3
?H g C l
咪唑
nmm a x ? ? ?? ? ?? ～
（ 2）方法 对照品法
%
W
W
A
A
% 对照品
样
标
标
样 ???
计算
标
样咪唑硼酸缓冲液
标准液
供试液
A
AH g C l
????? ??????? ??
? 2pH 9
例 氨苄西林钠 含量测定
取本品约 60mg 置 100ml量瓶中，加
水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取
5ml，置另一 100ml量瓶中，加水稀释至
刻度，摇匀，再精密量取 5ml，置 25ml
量瓶中，加硼酸缓冲液 2.5ml与醋酐的乙
腈溶液（ 1→50） 0.25ml，放置 5min后，
加咪唑溶液至刻度，摇匀，置 60℃ 水浴
中，加热 30min，取出冷却，照分光光
度法（附录 Ⅳ A ），在 325nm的波长
处测定吸收度；另取氨苄西林三水合
物标准品，按同法测定，计算，即得。
（ 3）讨论
a,咪唑催化的水解产率高，硫
醇汞盐稳定（ ≥3h）
b,侧链有 -NH2时，需加醋酐先
将其乙酰化后才能发生上述
反应
N
S
O
H N
C O O
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2 N a
N
S
O
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H
C O C H 3
? ? OCHCH ???pH9
（ 4）特点
A、简便快速
B、用标准品对照，重现性良
好,RSD≤1%
3,羟肟酸比色法 USP JP
Fe3+/3H+
红色
β-内酰胺类
NaOH ???? ???? ?? H C lN O HH内酰胺类
羟肟酸衍生物
HPLC法（五） ChP 头孢菌素类
内标法＋校正因子
外标法
特点
快速、高效、灵敏
专属性强、重现性好
一法多用（鉴别、检查、含测）
哌拉西宁 原料药 含量测定
色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充
剂；以甲醇 –0.2mol/L磷酸二氢钠溶
液 –10％氢氧化四乙基铵溶液 –水
（ 400︰ 50︰ 3︰ 547）用磷酸调节
pH值至 5.5为流动相。检测波长为
254nm。
第三节 氨基糖苷类抗生素
苷苷元糖 缩合 ?? ???
氨基糖苷苷元氨基糖 缩合 ?? ???
链霉素 双氢链霉素
新霉素 卡那霉素
庆大霉素 巴龙霉素
链霉素
链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基 -L-葡萄糖胺
苷元 糖
链霉双糖胺
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
链霉胍 链霉糖 N-甲基 -L-
葡萄糖胺
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
链霉胍 链霉糖 N-甲基 -L-
葡萄糖胺
庆大霉素
糖 苷元
绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 + 加洛糖胺
糖
R
O
C R 1R 2 HN
N H
2
O
O H
H
2
N
N H
2
O
O
O H N H C H
3
O H
C H
3
绛红糖胺
紫素胺
2-脱氧链霉胺 加洛糖胺
N-甲基 -3-
去氧 -4-甲
基戊糖胺
R
O
C R 1R 2 HN
N H
2
O
O H
H
2
N
N H
2
O
O
O H N H C H
3
O H
C H
3
绛红糖胺
紫素胺
2-脱氧链霉胺 加洛糖胺
N-甲基 -3-
去氧 -4-甲
基戊糖胺
庆大霉素 C复合物
庆大霉素 C1 R=H R1,R2=CH3
庆大霉素 C2 R=R2=H R1=CH3
庆大霉素 C1a R,R1,R2=H
庆大霉素 C2a R=CH3 R1= R2=H
庆大霉素 C2b R=R1=H R2=CH3
一,结构与性质
多与硫酸成盐
链霉素 3个
庆大霉素 5个碱性中心
碱性（一）
水溶性溶解性（二）
链霉素 pH5～ 7.5
庆大霉素 pH2～ 12 稳定
UV（三）
稳定性（四）
链霉素水解产物反应（五）
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
坂口反应 N-甲基葡萄
糖胺反应
麦芽酚反应
二,鉴别
茚三酮反应（一）
蓝紫色
庆大霉素
链霉素 茚三酮
??? ??△
羟基胺结构
N-甲基葡萄糖胺反应（二）
甲基葡萄糖胺
庆大霉素
链霉素 水解
??? ?? N
乙酰丙酮 OH-
吡咯衍生物
对二甲氨基苯甲醛 H+
红色
（ Elson-Morgan反应）
N H
C H 3
N H
N H
N H C N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O H
N
C H 3
C O C H 3
H
H O C H 2 C H O H 3
(缩合 ) 323 COCHCOCHCH ?OH
H
H
H
3
C
H 3 C
C HN
N
C O C H
3
C H 3
C O C H
3
C H
3
N
红色
对二甲氨基苯甲醛H+
N
C H 3
C O C H 3
H
H O C H 2 C H O H 3
麦芽酚反应（三） 链霉糖特有反应
链霉糖链霉素 ?? ??
?OH
麦芽酚紫红色 ?? ??
?3FeH+
分子重排
N H C N H
2
H O
O H
O HN HCH
2
N
O
O
C H
3
O H
C H O
O
O
C H
2
O H
O H
O H
N H
N H
N H
C H
3
H
2
O N a O H
O
O
O H
C H
3
O
O
C H
3
F e
3 +
H
+
O
F e 3
3 +
/
紫红麦芽酚
链霉胍特有反应
橙红
羟基喹啉
链霉胍链霉素 次溴酸钠 ???? ??
?
?? ??
?
8
OH
（ 或 α-萘酚 ）
N
O H
8-羟基喹啉
坂口反应（四）
α -萘酚
O H
O
N
B r
R N H C O N H
（四） ?24SO 反应
白??? ?? ?
??
?
??
B a S OSO BaH+
UV法（五）
IR法（六）
庆大霉素无 UV吸收
nmm a x ? ? ???链霉素
TLC法（七）
三,检查
链霉素杂质（一）
链霉素 B（甘露糖链霉素）
2,方法 TLC中的对照品法
（ BP）
1,来源 反应中间体
对微生物的活性无明显差异
毒副作用和耐药性不同
发酵菌种不同
工艺差别
C组分比例
不一致
规定控制各组分的相对百分含量
ChP
USP
BP
JP
庆大霉素 C组分的测定（二）
???? ??
??
???,pH
吲哚衍生物
巯基醋酸邻苯二醛氨基
λmax = 330nm
衍生化原理1.
1-烷基硫代 -2-烷基
异吲哚衍生物
R N H
2
+
+ H S C H
2
C O O H
O H
-
C H O
C H O
N R
S C H
2
C O O H
RP－ HPLC方法2.
规定 C1 25~50%
C1a 15~40%
C2a +C2 20~50%
计算3.
%
AAAA
A
%A
CCCC
i
i
aa
? ? ??
???
?
????
峰面积归一化法
三,含量测定 链霉素、庆大霉素
微生物检定法
本法系利用抗生素在琼脂培养
基内的扩散作用量反应平行线原理
的设计，比较标准品与供试品两者
对接种的试验菌产生抑菌圈的大小
，以测定供试品效价的一种方法。
四、血清中庆大霉素的 HPLC法
? 血浆样品的预处理
? 离子对色谱法的目的：
除去氨基酸、肽、胺的干扰
? 选用 OPA为荧光衍生化试剂
? 采用柱后衍生化法
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
第四节 四环素类抗生素
ABCD
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
1 2
3456
78
9 10 11 12
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
四环素 （ TC） tetracycline
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
C l
金霉素 (CTC) chlortetracycline
氯四环素
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
O H
土霉素 (OTC) oxytetracycline
氧四环素
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
O H
多西环素 (DOTC) doxycycline
脱氧土霉素
美他环素 （ METC） metacycline
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
N C H 3 2
O HC H
2
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
一,结构与性质
两性（一）
1,与酸、碱均能成盐
2,强酸或强碱中溶解度 ↑
酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性
二甲胺基 弱碱性
吸湿性（二） 多含结晶水
与金属离子生成有色配位化合物
Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+
UV（三）
与金属离子络合（四）
pH3 ~ 7.5 荧光
H O
H O
C a
O
O
O
O H
O H
O
O
不稳定性（四）
1,差向异构化
差向金霉素
差向四环素
金霉素
四环素 ～
??
??
??? ??
??pH
淡黄 →黑
蓝色荧光
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H
C H 3
2 N
H O
差向四环素
2C H 3N
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
H O
（土霉素、多西环素不易差向异构化）
2,降解反应
（ 1） 酸性下降解
脱水金霉素
脱水四环素
金霉素
四环素 ＜
??? ??
?pH
λmax = 445nm
λmax = 435nm
橙黄色
2C H 3N
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
N C H 3 2
H
O H
C O N H 2
O
O H
OO H
C H 3
O H
脱水四环素
2C H 3NH
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
p H 2 6
～
p H 2 6
～
TC
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H
C H 3 2 N
H O
ETC
N C H 3 2
H
O H
C O N H 2
O
O H
OO H
C H 3
O H
ATC
N2C H 3
O H
C O N H 2
O
O H
O
H
O H O
C H 3
H
EATC
p H 2
＜
p H 2
＜
（ 2） 碱性下降解
异四环素四环素 ?? ??
?OH （荧光）
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
O
N C H 3 2
二,鉴别试验
H2SO4反应（一）
黄色
朱红色
绿蓝
深紫色
盐酸多西环素
盐酸土霉素
盐酸金霉素
盐酸四环素
?
??? ??
??
SOH
FeCl3反应（二）
褐色
橙褐色
深褐色
红棕色
盐酸多西环素
盐酸土霉素
盐酸金霉素
盐酸四环素
?? ??
?
F eC l
Cl-反应（三）
白???? ??? ?
?? A g C lAgCl H N O
nmm a x ? ? ???
1mol/L盐酸 -甲醇（ 1→100）
0.01mg/ml
UV法（四）
荧光法（五）
土霉素
金霉素
四环素
绿色荧光
蓝色荧光
黄色荧光
?? ??
?OH
UV
绿色荧光
H+
UV
TLC法（六） 正相分配薄层 色谱
IR法（五）
EDTA 克服痕量金属造成的
拖尾现象
三,检查
· 4-差向四环素（ ETC）
· 脱水四环素（ ATC）
· 差向脱水四环素（ EATC）
· 盐酸金霉素（ CTC）
有关物质（一）
TLC法（ 1995版）
HPLC法（ 2000版）
标准品对照法
盐酸四环素
四环素有关物质 TLC图
I,供试液 ( 5 mg/ml)
II,ETC
( 0.2 mg/ml)
III,ATC
( 0.025 mg/ml)
IV,EATC
( 0.025 mg/ml)
V,CTC
( 0.1 mg/ml)
VI,混合液
4％
0.5％
0.5％
2％
吸收度（二）
nm
m a x
??????
?
、
盐酸四环素
C T C).~.(A nm ?? ???????????? 控制
杂质吸收度
E A T CA T C.A nm,控制 ?? ????????
异四环素控制 ?? ?????????,A nm
? ?注射用
四,含量测定 ChP,USP
HPLC法（外标法）
系统适用性试验
1,防护柱
2,预试溶液
4-差向脱水四环素
四环素
3,RSD≤2.0%
90,t R ?
01,t R ?
???,R
JP 比色法（标准曲线法）
标
nm
H C l.d
H C l.d
A ? ? ??? ??
?? ??
标准液标
调零标准液空
△
样
nm
H C l.d
H C l.d
A ? ? ??? ??
?? ??
供试液样
调零供试液空
△
原理 脱水四环素四环素 ＜ ??? ?? ?pH
1,熟悉抗生素类药物分析的特点及其
常规检验项目。了解抗生素类药物
的分析现状，熟悉生物学法与物理
化学法测定效价的原理及优缺点。
2,掌握 β－内酰胺类抗生素的结构、
性质、鉴别及含量测定。
第十一章 复习内容
3,掌握氨基糖苷类抗生素的结构、
性 质及鉴别，了解其检查及含量
测定
4,掌握四环素类抗生素的结构及性
质，了解其鉴别、检查及含量测
定
5,了解抗生素类药物的质量考察方
法
99,89,下列哪个药物会发生羟肟酸
铁反应
A,青霉素
B,庆大霉素
C,红霉素
D,链霉素
E,维生素 C
99m,71．中国药典 (1995年版 )测定头
孢菌素类药物的含量时，多
数采用的方法是
A,微生物法
B,碘量法
C,汞量法
D,正相高效液相色谱法
E,反相高效液相色谱法
95,139．属于 ?-内酰胺类的抗生素药
物有
A,青霉素
B,红霉素
C,头孢菌素
D,庆大霉素
E,四环素
45．能和茚三酮发生呈色反应的物质有
A．链霉素
B．庆大霉素
C．土霉素
D．氨基酸
E．苯巴比妥
96,135.青霉素类药物可用下面哪些
方法测定
A,三氯化铁比色法
B,汞量法
C,碘量法
D,硫醇汞盐法
E,酸性染料比色法
110．能发生重氮化一偶合反应的抗
生素类药物是
A,青霉素
B,庆大霉素
C,苄星青霉素
D,盐酸四环素
E,普鲁卡因青霉素
99,[116—120]以下反应可适用的药物
A,青霉素 B,链霉素
C,两者均能 D,两者均不能
116,Kober反应
117,羟肟酸铁反应
118,坂口反应
119,N—甲基葡萄糖胺反应
120,在酸性溶液中水解
D
A
B
B
C
98,[126—130] 可以鉴别的药物是
A,链霉素 B,庆大霉素
C,两者均可 D,两者均不可
126,用 Kober反应
127,用坂口反应
128,用麦芽酚反应
129,用三氯化铁反应
130,用茚三酮反应
D
A
A
D
C
问题 46～ 50
A,茚三酮反应 B,麦芽酚反应
C,坂口反应 D,FeC13反应
E,羟肟酸铁反应
46．头孢唑林钠
47．金霉素
48．链霉素
49．庆大霉素
50．青霉素
E
D
E
A
ABC
（ ）青霉素分子能与碘定量反
应，因此可以根据消耗的碘量计
算青霉素的含量。
×
99m,90．四环素在酸性条件下的降
解产物是
A,差向四环素
B,脱水四环素
C,异四环素
D,去甲四环素
E,去甲氧四环素
抗生素类药物
的分析
第一节 概述
抗生素的定义
抗生素是细菌、放线菌和真
菌等微生物的代谢产物，对各种
病原微生物有强大的抑制或杀灭
作用。
抗生素的来源
1,生物合成（发酵）
2,化学合成或半合成
抗生素质量的复杂性
产品稳定性差 分子结构大多不稳
定，降解后疗效下
降、失效或增加毒
副作用
发酵过程不易控制
易受污染
生产工艺复杂
发酵液中杂质
无机盐、脂肪、各种蛋白质、
各种降解产物、色素、热原、
毒性物质
增加 异常毒性、细菌内毒素、
热原、降压物质、无菌
[检查 ]
含量测定方法
（一）生物学方法
测定抗生素抑菌或杀菌的能力
优点 1、与临床效果一致
2、灵敏度高
3、干扰物质少
缺点 1、操作繁琐
2、培养时间长
2、测定误差大
（二）化学及物理化学方法
以理化方法测定主药含量
优点 1,准确度高
2,简单、快速
1,不一定代表生物效价缺点
2,易受杂质干扰
分类 （按结构与性质）：
β–内酰胺类、氨基糖苷类、
四环素类、大环内酯类、
氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类
林可霉素类、其他抗生素类
N
S
C H
3
C H
3
C O O H
O
H N
1
2
34
56
7
R C O
母核（6 - 氨基青霉烷酸）
第二节 β –内酰胺类抗生素
青霉素类
头孢菌素类
7 6
5
4
3
2
1
N
O
N H
S
C H
2
R
1
C O O H
母核（7- 氨基头孢菌烷酸）
R C O
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
青霉素
（青霉素 G、苄青霉素）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
氨苄西林
（氨苄青霉素）
阿莫西林
（羟氨苄青霉素）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
H O C H 2
C 2 H 5
2
N C H 2 C H 2 O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2
普鲁卡因青霉素
头孢氨苄
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
OC
N H 2
C H 2
头孢拉定
C H 2
N H 2
C O
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
头孢羟氨苄
N
O
N H
S
C H 3
C O O H
OC
N H 2
C H 2H O
头孢噻吩钠
S
C H 2 C O
N
O
N H
S
C H 2 O C O C H 3
C O O N a
N
S
O
H N
C O O K
C H 3
C H 3
OCC H 2
酸性
结构与性质一、
Na
与碱金属 (Na+,K+)成盐
（一）羧基
易溶于水
与有机碱 (普鲁卡因 )成盐 难溶于水
普鲁卡因 青霉素
C 2 H 5
2
N C H 2 C H 2 O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2
N
S
O
1
2
3
4
56
7
（二）手性 C
8
7 6
5
4
3
2
1
N
O
S
(5%头孢唑啉钠溶液 –18～ –24° )20
D］［ ?
头孢菌素类 C6 C7
青霉素类 C3 C5 C6
旋光性
﹡ ﹡
﹡
﹡ ﹡
（三）共轭体系
N
S
O
头孢菌素类 母核有共轭体系
青霉素类 母核无明显 UV
多数有苯环取代基
N
O
S
UV
青霉素钠 UV7-20
（四） β–内酰胺环
水溶液 不稳定
干燥纯净 稳定
不稳定
性因素
四元环张力大
酰胺键易水解
（某些金属离子）
（温度） 失效
降解
青霉素类
酸、碱、青霉素酶
?????? ??
某些氧化剂
例 青霉素的降解反应
青
霉
素
青霉噻唑酸H2O/OHˉ
青霉素酶
青霉酸H2OpH2 100℃
α–青霉噻唑
酰基羟胺酸
NH2OH
青霉烯酸pH4
青霉胺
CO2
青霉醛
HgCl2
失效
降解
头孢菌素类
酸、碱、胺类
????? ??
内酰胺酶??
二、
K+,Na+反应（一）
鉴别
焰色 →鲜黄色
+ 醋酸氧铀锌 →↓黄Na
+
焰色 →紫色
+ 0.1%四苯硼钠 + Ac→↓白K
+
（二）呈色反应
1,羟肟酸铁反应 β-内酰胺类
NaOH ????? ????
?? H C lNO HH内酰胺类
呈色
羟肟酸衍生物
Fe3+/3
H+
N
S
O
N
S
CO H
N H O H
H 2 N O H H C l
N
S
C H
N H
O
F e
3 +
3
O
H+Fe3+/3
（红、棕、褐）
2,与 H2SO4 - HNO3反应
亮黄
红棕
黄色
头孢噻肟钠
头孢噻吩钠
头孢氨苄
????? ??
???? H N OSOH
头孢菌素类
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
3,茚三酮 反应
蓝紫色氨基 茚三酮 ??? ???? △
α -氨基
α-氨基、伯胺
某些羟基胺类 酮式
烯醇式
茚三酮
茚三酮
缩合
蓝紫色
+
H
2
O
C N C H
2
R
C O H
2
R
C HH
2
N C O O H
2
O HC
C O
C O
C
O H
N H
2
C
C O
C O
C O
C
O H
CNC
C O
C O
C O
C
O H
C H RNC
C O
C O
C O
4,双缩脲反应 β-内酰胺类
?? CO NH
紫内酰胺类 碱性酒石酸铜 ????? ???? （开环分解）
似肽键
2
O H
C O
N H
2
C u
C O H N
C
C H
3
C O O N a
C H
3
S
N
H N
C H
3
C H
3
C O O N a
C
S
N
O
H O
H O
O
C H
2
N H
2
C H
2
H
H
蓝紫色
5,与变色酸 -硫酸反应
活泼,-CH2-”
青霉素
阿莫西林
氨苄西林
H C H OCH SOH ??? ???? ???,羰基侧链含,△ （分解）
变色酸
显色
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
H O C H 2
??? ????? ?? ?? 变色酸阿莫西林 H C H OSOH
150℃ （缩合） 色
褐
S O 3 H
S O 3 H
H O
H O
S O 3 H
S O 3 H
H O
H O O H
O H
H O 3 S
H O 3 S
C H
HCHO ? ?? ?
（缩合）
6,与重氮苯磺酸反应
橙黄色重氮苯磺酸 ????? ???? ?? OHHC （偶合）
酚羟基
头孢哌酮
S
N
O H
C O N HC HC O N HH 5 C 2
O O
NN
O
C O O H
C H 2 S
N
NN
N
C H 3
N C lNN a O 3 S
?OH
（偶合）
N
NN
N
C H 3
S
N
O H
C O N HC HC O N HH 5 C 2
O O
NN
O
C O O H
C H 2 S
NNN a O 3 S
7,与铜盐反应
??? ???? ?? ?C u S OH A c头孢氨苄
橄榄绿色
NaOH专属反应
（三）沉淀反应
1,遇酸 →↓
白青霉素青霉素钠
青霉素钾
??? ??
?H
在过量 HCl或
有机溶剂中溶解
2,有机胺盐反应
（ 1）重氮化 - 偶合反应
青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素 ??? ??
?H
重氮化 -偶合反应
红?
芳伯氨基
C
2
H
5 2
N C H
2
C H
2
O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H
3
C H
3
OC
H
+
C
2
H
5
2
C H
2
N H
2
H
2
N C O O C H
2
C H
2
N
普鲁卡因
普鲁卡因青霉素
N C H 2 C H 2 O O C
2
C 2 H 5
N
+
C l
-
N
2
C 2 H 5C O O C H 2 C H 2 N
N H 2
H C lN a N O 2 ?
（ 2）与三硝基苯酚反应
?????? ???
??? ??
三硝基苯酚
二苄基乙二胺苄星青霉素
N a O H
△
二苄基乙二胺
mp
三硝基苯酚
H
2
O
H
O H
-
H
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H
3
C H
3
C H
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
O H
N O
2
O
2
N N O
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
光谱法（四）
1,UV法
A,Em in,m ax,,%1 cm1??光谱图
样品、分解产物
nm339
H A??? ?? ? 苯唑青霉烯酸苯唑青霉素 Cu2+
头孢氨苄 λmax = 262nm
青霉素 V钠
A280nm/A264nm = 1.30～ 1.50
N
O
C O N H
C H 3
N
O
S
C H 3
C H 3
C O O N a
N
O
C H
C H 3
O
C O
CN
H N
C H H C
C H 3
C H 3
S H
C H C O O H
Cu2+ pH3.8
△
氯唑青霉素 341 0.682
双氯青霉素 342 0.653
苯唑青霉素 339 1.328
m a x?
%1
cm1E(nm)
? ?ml/g50 ?
2,IR法
117401815 ?? cm~V OC
116901710 ?? cm~V OC
β-内酰胺环
酰胺
3,NMR法
利用不同结构的原子核在 D2O中有
不同的 NMR光谱进行鉴别
JP
以吸收峰频率对峰强度进行作图
主要研究原子核的磁化性质及其在
外磁场中的运动规律
硫酸庆大霉素 NMR谱 7-08硫酸庆大霉素 NMR
色谱法（五）
1,TLC法
对照品对照法
和斑点颜色比较
供试品
对照品 相同条件
fR???? ??
2,HPLC法
Rt比较
供试品
对照品 相同条件
???? ??
精密称取样品 0.1009g，置 250ml碘瓶中，
加水 10ml，振摇使溶解，精密加溴滴定液
(0.1mol/L)25.0ml，再加盐酸 5ml，立即密塞
并振摇 1分钟，在暗处静置 15分钟后，注意
微开瓶塞，加碘化钾试液 10ml，立即密塞，
摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（ 0.09863mol
/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继
续滴定至蓝色消失，消耗硫代硫酸钠滴定液
(0.09863mol/L)13.80ml，并将滴定结果用空
白试验校正，空白试验消耗硫代硫酸钠滴定
液（ 0.09863mol/L） 21.64ml。每 1ml溴滴定
液 (0.1mol/L)相当于 13.01mg的 C12H17N2NaO3。
N
S
O
H N
C O O K
C H 3
C H 3
OCC H 2
酸性
结构与性质一、
Na
与碱金属 (Na+,K+)成盐
（一）羧基
易溶于水
与有机碱 (普鲁卡因 )成盐 难溶于水
普鲁卡因 青霉素
C 2 H 5
2
N C H 2 C H 2 O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2
N
S
O
1
2
3
4
56
7
（二）手性 C
8
7 6
5
4
3
2
1
N
O
S
(5%头孢唑啉钠溶液 –18～ –24° )20
D］［ ?
头孢菌素类 C6 C7
青霉素类 C3 C5 C6
旋光性
（三）共轭体系
N
S
O
头孢菌素类 母核有共轭体系
青霉素类 母核无明显 UV
多数有苯环取代基
N
O
S
UV
青霉素钠 UV7-20
（四） β–内酰胺环
水溶液 不稳定
干燥纯净 稳定
不稳定
性因素
四元环张力大
酰胺键易水解
（某些金属离子）
（温度） 失效
降解
青霉素类
酸、碱、青霉素酶
?????? ??
某些氧化剂
例 青霉素的降解反应
青
霉
素
青霉噻唑酸H2O/OHˉ
青霉素酶
青霉酸H2OpH2 100℃
α–青霉噻唑
酰基羟胺酸
NH2OH
青霉烯酸pH4
青霉胺
CO2
青霉醛
HgCl2
失效
降解
头孢菌素类
酸、碱、胺类
????? ??
内酰胺酶??
(头孢噻吩钠水溶液 25℃ 24h失活 8%)
二、
K+,Na+反应（一）
鉴别
焰色 →鲜黄色
+ 醋酸氧铀锌 →↓黄Na
+
焰色 →紫色
+ 0.1%四苯硼钠 + Acˉ→↓白K
+
（二）呈色反应
1,羟肟酸铁反应 β-内酰胺类
NaOH ????? ????
?? H C lNO HH内酰胺类
呈色
羟肟酸衍生物
Fe3+/3
H+
N
S
O
N
S
CO H
N H O H
H 2 N O H H C l
N
S
C H
N H
O
F e
3 +
3
O
H+Fe3+/3
（红、棕、褐）
例,ChP(2000)头孢哌酮
[鉴别 ]
取本品 10mg,加水 2ml与盐
酸羟胺溶液 [取 34.8%盐酸羟胺溶
液 1份, 醋酸钠 -氢氧化钠溶液 1份,
乙醇 4份 ]3ml,振摇溶解后, 放置
5min,加酸性硫酸铁铵试液 1ml，
摇匀, 显红棕色 。
2,与 H2SO4 - HNO3反应
蓝绿色
红棕
黄色
头孢噻啶
头孢噻吩钠
头孢氨苄
????? ?? ???
? H N OSOH
头孢菌素类
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
3,茚三酮 反应
蓝紫色氨基 茚三酮 ??? ???? △
α-氨基、伯胺
某些羟基胺类 酮式
烯醇式
茚三酮
茚三酮
缩合
蓝紫色
+
H
2
O
C N C H
2
R
C O H
2
R
C HH
2
N C O O H
2
O HC
C O
C O
C
O H
N H
2
C
C O
C O
C O
C
O H
CNC
C O
C O
C O
C
O H
C H RNC
C O
C O
C O
4,双缩脲反应 β-内酰胺类
?? CO NH
紫内酰胺类 碱性酒石酸铜 ????? ???? （开环分解）
似肽键
2
O H
C O
N H
2
C u
C O H N
C
C H
3
C O O N a
C H
3
S
N
H N
C H
3
C H
3
C O O N a
C
S
N
O
H O
H O
O
C H
2
N H
2
C H
2
H
H
蓝紫色
5,与变色酸 -硫酸反应
活泼,-CH2-”
青霉素
阿莫西林
氨苄西林
H C H OCH SOH ??? ???? ???,羰基侧链含,△ （分解）
变色酸
显色
??? ????? ?? ?? 变色酸阿莫西林 H C H OSOH
150℃ （缩合）
N H 2
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
H O C H 2
色
褐
S O 3 H
S O 3 H
H O
H O
S O 3 H
S O 3 H
H O
H O O H
O H
H O 3 S
H O 3 S
C H
HCHO ? ?? ?
（缩合）
6,与重氮苯磺酸反应
橙黄色重氮苯磺酸 ????? ???? ?? OHHC （偶合）
酚羟基
头孢哌酮
S
N
O H
C O N HC HC O N HH 5 C 2
O O
NN
O
C O O H
C H 2 S
N
NN
N
C H 3
N C lNN a O 3 S
?OH
（偶合）
N
NN
N
C H 3
S
N
O H
C O N HC HC O N HH 5 C 2
O O
NN
O
C O O H
C H 2 S
NNN a O 3 S
7,与铜盐反应
??? ???? ?? ?C u S OH A c头孢氨苄
橄榄绿色
NaOH专属反应
（三）沉淀反应
1,遇酸 →↓
白青霉素青霉素钠
青霉素钾
??? ??
?H
在过量 HCl或
有机溶剂中溶解
2,有机胺盐反应
（ 1）重氮化 - 偶合反应
青霉素普鲁卡因普鲁卡因青霉素 ??? ??
?H
重氮化 -偶合反应
红?
芳伯氨基
C
2
H
5 2
N C H
2
C H
2
O O C
N
S
O
H N
C O O H
C H
3
C H
3
OC
H
+
C
2
H
5
2
C H
2
N H
2
H
2
N C O O C H
2
C H
2
N
普鲁卡因
普鲁卡因青霉素
N C H 2 C H 2 O O C
2
C 2 H 5
N
+
C l
-
N
2
C 2 H 5C O O C H 2 C H 2 N
N H 2
H C lN a N O 2 ?
（ 2）与三硝基苯酚反应
????? ???
??? ??
三硝基苯酚
二苄基乙二胺苄星青霉素
N a O H
△
二苄基乙二胺
mp
三硝基苯酚
H
2
O
H
O H
-
H
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H
3
C H
3
C H
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
O H
N O
2
O
2
N N O
2
C H
2
N C H
2
C H
2
N H
C H
2
光谱法（四）
1,UV法
A,Em i n,m a x,,%cm????光谱图
样品、分解产物
头孢氨苄 λmax = 262nm
青霉素 V钠 A280nm/A264nm = 1.30～ 1.50
苯唑青霉烯酸苯唑青霉素 ?? ??
?H
Cu2+
nmA ????
N
O
C O N H
C H 3
N
O
S
C H 3
C H 3
C O O N a
N
O
C H
C H 3
O
C O
CN
H N
C H H C
C H 3
C H 3
S H
C H C O O H
Cu2+ pH3.8
△
氯唑青霉素 341 0.682
双氯青霉素 342 0.653
苯唑青霉素 339 1.328
m a x?
%
cmE
?
?(nm)
? ?ml/g???
2,IR法
117401815 ?? cm~V OC
116901710 ?? cm~V OC
β-内酰胺环
酰胺
3,NMR法
利用不同结构的原子核在 D2O中有
不同的 NMR光谱进行鉴别
JP
主要研究原子核的磁化性质及其在
外磁场中的运动规律
色谱法（五）
1,TLC法
对照品对照法
和斑点颜色比较
供试品
对照品 相同条件
fR??? ??
2,HPLC法
Rt比较
供试品
对照品 相同条件
??? ??
三,含量测定
?? ??? ????? ?? ? IIN a O H
头孢菌素族
青霉素族 （水解）
?H
碘量法（一）
1,原理 水解产物
??????? ?? OSNaNa IOSNaI ＋＋
定量过量
剩余
β-内酰胺类ChP
反应分两步进行：
1,水解反应 (按化学计算量进行 )
2,氧化 -还原反应 (无固定的量关
系, 受温度, PH值和时间等因素
影响, 应严格控制反应条件并采
用标准品平行对照测定 )
N
S
C H 3
C H 3
C O O HO
H NR C O
R C O
H
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
S
N
COON a
I24 + 5 H 2 O + 2 H C l
N a O H
C
C H 3
C H 3 S O
3 H
C H
N H 2
C O O HC H
N H C O R
C O O H 2
+2 N a C l
+
+
8HI
第一步
第二步
例 注射用普鲁卡因青霉素 含量测定
取装量差异项下的内容物，精密称
取约 0.12g，置 100ml量瓶中，加水使溶
解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 5ml，
置碘瓶中，加 1mol/L氢氧化钠溶液 1ml
放置 20分钟，再加 1mol/L盐酸溶液 1ml
与醋酸 -醋酸钠缓冲液 (pH4.5)5ml，精密
加入碘滴定液 (0.01mol/L)15ml，密塞，
摇匀，在 20～ 25℃ 暗处放置 20分钟，用
硫代硫酸钠滴定液（ 0.01mol/L）滴定，
至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并
强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供
试品溶液 5ml，置碘瓶中，加醋酸 -醋酸
钠缓冲液（ pH4.5） 5ml，精密加入碘滴
定液（ 0.01mol/L） 15ml，密塞，摇匀，
在暗处放置 20分钟，用硫代硫酸钠滴定
液（ 0.01mol/L）滴定，作为空白。同时
用青霉素钠对照品同法测定作对照，算
出供试品的含量。
V样空
V样
对照液 +缓冲液 +碘液 +回滴+碱 +酸 +缓冲液 +碘液 +回滴
V对空
V对
2,方法
供试液 +缓冲液 +碘液 +回滴
+碱 +酸 +缓冲液 +碘液 +回滴
? 空白试验
A、消除样品已降解产物的干扰
B、消除样品中其他消耗碘的杂
质的干扰
C、消除碘挥发造成的误差
以未经水解的样品作空白测定
空白 样品
I2
Na2S2O3
I-
I2
? 采用标准品平行对照测定
A、可消除温度,pH、操作、环
境等条件的影响
B、使本法测定结果与微生物检定
法一致
3,条件
（ 1）弱酸性 pH4.5
碱 ↑ I2 → IO3- + I-
酸 ↑ 普鲁卡因与碘在酸性条件
下会产生复盐沉淀
（ 2）温度 24～ 26℃
温度 ＞ 38 ℃
未水解的供试品亦消耗碘
（ 3）水解时间
以水解 20分钟后的 耗碘量最大
（ 4）反应时间
反应 20分钟后,耗碘量随时间的
变化较小，可减小含量测定的误
差。
4,特点
（ 1）灵敏度高
样品, 碘 = 1, 8
（ 2）反应条件、实验操作要求高
V对, V对空
V样, V样空
1份含量
加试剂次序、反应时间、滴定速度相同
4I2→8I-
5,计算 原料
%
W
W
VV
VV
对照品
）（
）（
含量％＝
样
对
对对空
样样空 ??
?
?
汞量法（二）
1,原理
SHROH ??? ??
?
青霉素族 （水解）
HgRS ?）（
青霉素族ChP
??Hg??.pH
2,方法
? ?
? ?总样V
NOHgH N ON a O H ???? ????? ????? ?? ???醋酸盐缓冲液
pH4.6
滴定水解
? ?
? ?降空
醋酸盐缓冲液 VNOHg ???? ??????? ?? ??pH4.6 滴定
样
品
以未经水解的样品作空白测定
例 青霉素钠 含量测定
取本品约 50mg，精密称定，加水
5ml溶解后，加 1mol/L氢氧化钠溶液 5ml
，摇匀，放置 15分钟，加 1mol/L硝酸溶
液 5ml，醋酸盐缓冲液 (pH4.6)20ml及水
20ml，摇匀，照电位滴定法 (附录 Ⅶ A),
用铂电极为指示电极，汞 -硫酸亚汞电极
为参比电极，在 35～ 40℃,用硝酸汞滴
定液 (0.02mol/L)缓慢滴定，
（控制滴定过程约为 15分钟），不计第
一个等当点，计算第二个等当点时消耗
滴定液的量。每 1ml硝酸汞滴定液 (0.02
mol/L)相当于 7.128mg的总青霉素 (按
C16H17N2NaO4S计算 )。
另取本品约 0.5g，精密称定，加水
与上述醋酸盐缓冲液各 25ml，振摇使完
全溶解，在室温下，立即用硝酸汞滴定
液 (0.02mol/L)滴定，终点判断方法同上,
每 1ml硝酸汞滴定液（ 0.02mol/L）相当
于 7.128mg的降解物（按 C16H17N2NaO4S
计算）。
总青霉素的百分含量与降解物的百
分含量之差值即为青霉素的含量。
3,讨论
（ 1） 以第二次滴定突跃为终点
电位法指示终点
（ 2） 反应摩尔比 1, 1
（ 3） 空白试验 消除已降解产物干扰
（ 4） 优点 不需标准品
%
W
FTV
%
W
FTV
% ????
??
?????
??
?
空
空
样
样含量
4,计算
%FT
W
V
W
V
% ???????? ）（含量
空
空
样
样
精密称取含水量为 0.5%的青霉素
钠 0.0502g，按药典方法测定总青霉素含
量时，用去硝酸汞滴定液 (0.02009mol/L)
6.97ml。另精密称取上述样品 0.5013g，
按药典方法测定降解物含量时，用去硝
酸汞滴定液 (0.02009mol/L)1.33ml。以干
燥品计算，求样品中青霉素的含量。
例 青霉素钠 含量测定
?????,T
? ?
%
%..
..
.
.
.
.
????
????????
??????????????
??
?
?
?
?
?
?????
???
?
?????
???
%.????
酸碱滴定法（三）
1,原理
青霉噻唑酸青霉素类 ??? ?? N a O H△
（钠盐）
OHN a C lHClN a O H ????（剩余）
β-内酰胺类
ChP
N
S
C H 3
C H 3
C O O N aO
H NR C O
N
S
C H 3
C H 3
C O O N a
C
H N
O N aO
R C O
? ?定量过量N a O H△
2,方法
? ???? ???? ? 供试液内酰胺类 OH
N a O H定量过量 △
?? ?? H C l回滴
中和中和
例 苯唑西林钠 含量测定
取本品约 0.5g，精密称定，加新沸
过的并用 0.01mol/L氢氧化钠溶液中和至
酚酞指示液刚显红色的水 20ml，使溶解,
再用 0.01mol/L氢氧化钠溶液中和后，精
密加氢氧化钠滴定液 (0.1mol/L)25ml，
摇匀，置水浴中加热 20分钟，注意避免
吸收空气中的二氧化碳，冷却后，加酚
酞指示液 1～ 2滴，用盐酸滴定液
（ 0.1mol/L）滴定，并将滴定结果用空
白试验校正。每 1ml的氢氧化钠滴定液
(0.1mol/L)相当于 40.14mgC19H19N3O5S。
? ?
%
W
FTVV
% ? ? ??
???
? 样空含量
3,讨论
（ 1） 水解前先中和溶剂和样品
（ 2） 加热时避免吸收 CO2
???? ?? ? CONaNa O H
CO△
不能使酚酞变红
（ 3） 空白试验校正 (消除 Na2CO3干扰 )
（ 4） 特点 简便快速
不适用于有残留酯的产品
? ?
%.
%
..
....
799
100
1010090
09863001301080136421
?
?
?
???
nm
CupH A
???
? ?? ???? ?? ??青霉烯酸青霉素族 （水解）
可见 -紫外分光光度法（四）
1,酸水解法（铜盐法）
（ 1）原理
稳定剂
JP
青霉素族
C H 2 C
O
C
O
N
H
H
C
C H 3
C H 3
C C O O H
CCN
H
S H
C O
N
S
O
H N
C O O H
C H 3
C H 3
C H 2
?pH
ACu ?? ??
??
（ 2）方法
标
样枸橼酸硫酸铜
标准液
供试液
A
A
nmA ??? ???????? ?? ? 320△
（ 3）特点
实验条件随各药物稳定性不同而定
标准品对照法
%
W
W
A
A
标准品含量
样
标
标
样 ???
（ 4）计算
2,硫醇汞盐法
（ 1）原理
青霉烯酸硫醇汞盐青霉素族 ?? ?? ?H g C l（咪唑）
nmm a x ? ? ?? ? ?? ～
青霉素族ChP
H g C l
C H 3
C H 3
C O O N a
S
N H
C
O
N
C H 2
N H
C O C H 3
N
S
O
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H
C O C H 3
?H g C l
咪唑
nmm a x ? ? ?? ? ?? ～
（ 2）方法 对照品法
%
W
W
A
A
% 对照品
样
标
标
样 ???
计算
标
样咪唑硼酸缓冲液
标准液
供试液
A
AH g C l
????? ??????? ??
? 2pH 9
例 氨苄西林钠 含量测定
取本品约 60mg 置 100ml量瓶中，加
水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取
5ml，置另一 100ml量瓶中，加水稀释至
刻度，摇匀，再精密量取 5ml，置 25ml
量瓶中，加硼酸缓冲液 2.5ml与醋酐的乙
腈溶液（ 1→50） 0.25ml，放置 5min后，
加咪唑溶液至刻度，摇匀，置 60℃ 水浴
中，加热 30min，取出冷却，照分光光
度法（附录 Ⅳ A ），在 325nm的波长
处测定吸收度；另取氨苄西林三水合
物标准品，按同法测定，计算，即得。
（ 3）讨论
a,咪唑催化的水解产率高，硫
醇汞盐稳定（ ≥3h）
b,侧链有 -NH2时，需加醋酐先
将其乙酰化后才能发生上述
反应
N
S
O
H N
C O O
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H 2 N a
N
S
O
H N
C O O N a
C H 3
C H 3
OCC H 2
N H
C O C H 3
? ? OCHCH ???pH9
（ 4）特点
A、简便快速
B、用标准品对照，重现性良
好,RSD≤1%
3,羟肟酸比色法 USP JP
Fe3+/3H+
红色
β-内酰胺类
NaOH ???? ???? ?? H C lN O HH内酰胺类
羟肟酸衍生物
HPLC法（五） ChP 头孢菌素类
内标法＋校正因子
外标法
特点
快速、高效、灵敏
专属性强、重现性好
一法多用（鉴别、检查、含测）
哌拉西宁 原料药 含量测定
色谱条件
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充
剂；以甲醇 –0.2mol/L磷酸二氢钠溶
液 –10％氢氧化四乙基铵溶液 –水
（ 400︰ 50︰ 3︰ 547）用磷酸调节
pH值至 5.5为流动相。检测波长为
254nm。
第三节 氨基糖苷类抗生素
苷苷元糖 缩合 ?? ???
氨基糖苷苷元氨基糖 缩合 ?? ???
链霉素 双氢链霉素
新霉素 卡那霉素
庆大霉素 巴龙霉素
链霉素
链霉胍 + 链霉糖 + N-甲基 -L-葡萄糖胺
苷元 糖
链霉双糖胺
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
链霉胍 链霉糖 N-甲基 -L-
葡萄糖胺
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
链霉胍 链霉糖 N-甲基 -L-
葡萄糖胺
庆大霉素
糖 苷元
绛红糖胺 + 脱氧链霉胺 + 加洛糖胺
糖
R
O
C R 1R 2 HN
N H
2
O
O H
H
2
N
N H
2
O
O
O H N H C H
3
O H
C H
3
绛红糖胺
紫素胺
2-脱氧链霉胺 加洛糖胺
N-甲基 -3-
去氧 -4-甲
基戊糖胺
R
O
C R 1R 2 HN
N H
2
O
O H
H
2
N
N H
2
O
O
O H N H C H
3
O H
C H
3
绛红糖胺
紫素胺
2-脱氧链霉胺 加洛糖胺
N-甲基 -3-
去氧 -4-甲
基戊糖胺
庆大霉素 C复合物
庆大霉素 C1 R=H R1,R2=CH3
庆大霉素 C2 R=R2=H R1=CH3
庆大霉素 C1a R,R1,R2=H
庆大霉素 C2a R=CH3 R1= R2=H
庆大霉素 C2b R=R1=H R2=CH3
一,结构与性质
多与硫酸成盐
链霉素 3个
庆大霉素 5个碱性中心
碱性（一）
水溶性溶解性（二）
链霉素 pH5～ 7.5
庆大霉素 pH2～ 12 稳定
UV（三）
稳定性（四）
链霉素水解产物反应（五）
N H C
N H
N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
N H
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O HN H
C H 3
坂口反应 N-甲基葡萄
糖胺反应
麦芽酚反应
二,鉴别
茚三酮反应（一）
蓝紫色
庆大霉素
链霉素 茚三酮
??? ??△
羟基胺结构
N-甲基葡萄糖胺反应（二）
甲基葡萄糖胺
庆大霉素
链霉素 水解
??? ?? N
乙酰丙酮 OH-
吡咯衍生物
对二甲氨基苯甲醛 H+
红色
（ Elson-Morgan反应）
N H
C H 3
N H
N H
N H C N H 2
H O
O H
O HN HCH 2 N
O
O
C H 3
O H
C H O
O O
C H 2 O H
O H
O H
N
C H 3
C O C H 3
H
H O C H 2 C H O H 3
(缩合 ) 323 COCHCOCHCH ?OH
H
H
H
3
C
H 3 C
C HN
N
C O C H
3
C H 3
C O C H
3
C H
3
N
红色
对二甲氨基苯甲醛H+
N
C H 3
C O C H 3
H
H O C H 2 C H O H 3
麦芽酚反应（三） 链霉糖特有反应
链霉糖链霉素 ?? ??
?OH
麦芽酚紫红色 ?? ??
?3FeH+
分子重排
N H C N H
2
H O
O H
O HN HCH
2
N
O
O
C H
3
O H
C H O
O
O
C H
2
O H
O H
O H
N H
N H
N H
C H
3
H
2
O N a O H
O
O
O H
C H
3
O
O
C H
3
F e
3 +
H
+
O
F e 3
3 +
/
紫红麦芽酚
链霉胍特有反应
橙红
羟基喹啉
链霉胍链霉素 次溴酸钠 ???? ??
?
?? ??
?
8
OH
（ 或 α-萘酚 ）
N
O H
8-羟基喹啉
坂口反应（四）
α -萘酚
O H
O
N
B r
R N H C O N H
（四） ?24SO 反应
白??? ?? ?
??
?
??
B a S OSO BaH+
UV法（五）
IR法（六）
庆大霉素无 UV吸收
nmm a x ? ? ???链霉素
TLC法（七）
三,检查
链霉素杂质（一）
链霉素 B（甘露糖链霉素）
2,方法 TLC中的对照品法
（ BP）
1,来源 反应中间体
对微生物的活性无明显差异
毒副作用和耐药性不同
发酵菌种不同
工艺差别
C组分比例
不一致
规定控制各组分的相对百分含量
ChP
USP
BP
JP
庆大霉素 C组分的测定（二）
???? ??
??
???,pH
吲哚衍生物
巯基醋酸邻苯二醛氨基
λmax = 330nm
衍生化原理1.
1-烷基硫代 -2-烷基
异吲哚衍生物
R N H
2
+
+ H S C H
2
C O O H
O H
-
C H O
C H O
N R
S C H
2
C O O H
RP－ HPLC方法2.
规定 C1 25~50%
C1a 15~40%
C2a +C2 20~50%
计算3.
%
AAAA
A
%A
CCCC
i
i
aa
? ? ??
???
?
????
峰面积归一化法
三,含量测定 链霉素、庆大霉素
微生物检定法
本法系利用抗生素在琼脂培养
基内的扩散作用量反应平行线原理
的设计，比较标准品与供试品两者
对接种的试验菌产生抑菌圈的大小
，以测定供试品效价的一种方法。
四、血清中庆大霉素的 HPLC法
? 血浆样品的预处理
? 离子对色谱法的目的：
除去氨基酸、肽、胺的干扰
? 选用 OPA为荧光衍生化试剂
? 采用柱后衍生化法
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
第四节 四环素类抗生素
ABCD
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
1 2
3456
78
9 10 11 12
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
四环素 （ TC） tetracycline
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
C l
金霉素 (CTC) chlortetracycline
氯四环素
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
H O
O H
土霉素 (OTC) oxytetracycline
氧四环素
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
C H
3
O H
多西环素 (DOTC) doxycycline
脱氧土霉素
美他环素 （ METC） metacycline
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
N C H 3 2
O HC H
2
2
C H
3N
R R
3
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
一,结构与性质
两性（一）
1,与酸、碱均能成盐
2,强酸或强碱中溶解度 ↑
酚羟基、烯醇型羟基 弱酸性
二甲胺基 弱碱性
吸湿性（二） 多含结晶水
与金属离子生成有色配位化合物
Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+
UV（三）
与金属离子络合（四）
pH3 ~ 7.5 荧光
H O
H O
C a
O
O
O
O H
O H
O
O
不稳定性（四）
1,差向异构化
差向金霉素
差向四环素
金霉素
四环素 ～
??
??
??? ??
??pH
淡黄 →黑
蓝色荧光
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H
C H 3
2 N
H O
差向四环素
2C H 3N
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
2
C H
3N
H
O H
C O N H
2
O
O H
O HOO H
R
2
R
1
H O
（土霉素、多西环素不易差向异构化）
2,降解反应
（ 1） 酸性下降解
脱水金霉素
脱水四环素
金霉素
四环素 ＜
??? ??
?pH
λmax = 445nm
λmax = 435nm
橙黄色
2C H 3N
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
N C H 3 2
H
O H
C O N H 2
O
O H
OO H
C H 3
O H
脱水四环素
2C H 3NH
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H O
p H 2 6
～
p H 2 6
～
TC
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
H
C H 3 2 N
H O
ETC
N C H 3 2
H
O H
C O N H 2
O
O H
OO H
C H 3
O H
ATC
N2C H 3
O H
C O N H 2
O
O H
O
H
O H O
C H 3
H
EATC
p H 2
＜
p H 2
＜
（ 2） 碱性下降解
异四环素四环素 ?? ??
?OH （荧光）
H
O H
C O N H 2
O
O H
O HOO H
C H 3
O
N C H 3 2
二,鉴别试验
H2SO4反应（一）
黄色
朱红色
绿蓝
深紫色
盐酸多西环素
盐酸土霉素
盐酸金霉素
盐酸四环素
?
??? ??
??
SOH
FeCl3反应（二）
褐色
橙褐色
深褐色
红棕色
盐酸多西环素
盐酸土霉素
盐酸金霉素
盐酸四环素
?? ??
?
F eC l
Cl-反应（三）
白???? ??? ?
?? A g C lAgCl H N O
nmm a x ? ? ???
1mol/L盐酸 -甲醇（ 1→100）
0.01mg/ml
UV法（四）
荧光法（五）
土霉素
金霉素
四环素
绿色荧光
蓝色荧光
黄色荧光
?? ??
?OH
UV
绿色荧光
H+
UV
TLC法（六） 正相分配薄层 色谱
IR法（五）
EDTA 克服痕量金属造成的
拖尾现象
三,检查
· 4-差向四环素（ ETC）
· 脱水四环素（ ATC）
· 差向脱水四环素（ EATC）
· 盐酸金霉素（ CTC）
有关物质（一）
TLC法（ 1995版）
HPLC法（ 2000版）
标准品对照法
盐酸四环素
四环素有关物质 TLC图
I,供试液 ( 5 mg/ml)
II,ETC
( 0.2 mg/ml)
III,ATC
( 0.025 mg/ml)
IV,EATC
( 0.025 mg/ml)
V,CTC
( 0.1 mg/ml)
VI,混合液
4％
0.5％
0.5％
2％
吸收度（二）
nm
m a x
??????
?
、
盐酸四环素
C T C).~.(A nm ?? ???????????? 控制
杂质吸收度
E A T CA T C.A nm,控制 ?? ????????
异四环素控制 ?? ?????????,A nm
? ?注射用
四,含量测定 ChP,USP
HPLC法（外标法）
系统适用性试验
1,防护柱
2,预试溶液
4-差向脱水四环素
四环素
3,RSD≤2.0%
90,t R ?
01,t R ?
???,R
JP 比色法（标准曲线法）
标
nm
H C l.d
H C l.d
A ? ? ??? ??
?? ??
标准液标
调零标准液空
△
样
nm
H C l.d
H C l.d
A ? ? ??? ??
?? ??
供试液样
调零供试液空
△
原理 脱水四环素四环素 ＜ ??? ?? ?pH
1,熟悉抗生素类药物分析的特点及其
常规检验项目。了解抗生素类药物
的分析现状，熟悉生物学法与物理
化学法测定效价的原理及优缺点。
2,掌握 β－内酰胺类抗生素的结构、
性质、鉴别及含量测定。
第十一章 复习内容
3,掌握氨基糖苷类抗生素的结构、
性 质及鉴别，了解其检查及含量
测定
4,掌握四环素类抗生素的结构及性
质，了解其鉴别、检查及含量测
定
5,了解抗生素类药物的质量考察方
法
99,89,下列哪个药物会发生羟肟酸
铁反应
A,青霉素
B,庆大霉素
C,红霉素
D,链霉素
E,维生素 C
99m,71．中国药典 (1995年版 )测定头
孢菌素类药物的含量时，多
数采用的方法是
A,微生物法
B,碘量法
C,汞量法
D,正相高效液相色谱法
E,反相高效液相色谱法
95,139．属于 ?-内酰胺类的抗生素药
物有
A,青霉素
B,红霉素
C,头孢菌素
D,庆大霉素
E,四环素
45．能和茚三酮发生呈色反应的物质有
A．链霉素
B．庆大霉素
C．土霉素
D．氨基酸
E．苯巴比妥
96,135.青霉素类药物可用下面哪些
方法测定
A,三氯化铁比色法
B,汞量法
C,碘量法
D,硫醇汞盐法
E,酸性染料比色法
110．能发生重氮化一偶合反应的抗
生素类药物是
A,青霉素
B,庆大霉素
C,苄星青霉素
D,盐酸四环素
E,普鲁卡因青霉素
99,[116—120]以下反应可适用的药物
A,青霉素 B,链霉素
C,两者均能 D,两者均不能
116,Kober反应
117,羟肟酸铁反应
118,坂口反应
119,N—甲基葡萄糖胺反应
120,在酸性溶液中水解
D
A
B
B
C
98,[126—130] 可以鉴别的药物是
A,链霉素 B,庆大霉素
C,两者均可 D,两者均不可
126,用 Kober反应
127,用坂口反应
128,用麦芽酚反应
129,用三氯化铁反应
130,用茚三酮反应
D
A
A
D
C
问题 46～ 50
A,茚三酮反应 B,麦芽酚反应
C,坂口反应 D,FeC13反应
E,羟肟酸铁反应
46．头孢唑林钠
47．金霉素
48．链霉素
49．庆大霉素
50．青霉素
E
D
E
A
ABC
（ ）青霉素分子能与碘定量反
应，因此可以根据消耗的碘量计
算青霉素的含量。
×
99m,90．四环素在酸性条件下的降
解产物是
A,差向四环素
B,脱水四环素
C,异四环素
D,去甲四环素
E,去甲氧四环素
