第十章
甾体激素类药物
的分析
基本结构：环戊烷骈多氢菲
C
2 0
C
2 1
A B
C D1
2
3
4 5 6
7
8910
11
12
13
14 15
16
17
18
19
分类：
甾体激素
肾上腺皮质激素
性激素
雄性激素及蛋
白同化激素
孕激素
雌激素
O
H O
O H
O C H
2
O H
H
H H
肾上腺皮质激素
氢化可的松
O
H O
O H
O
H
F H
O C H
3
O
H
C H
3
肾上腺皮质激素
醋酸地塞米松
O
O
H
H H
H
O
C H
3
雄性激素
丙酸睾酮
O
O
H
H H
H
O
蛋白同化激素
苯丙酸诺龙
C
O
H H
H
C H
3
O
孕激素
黄体酮
C
H O
H H
H
O H
C H
雌激素
炔雌醇
一、结构与性质
1,肾上腺皮质激素
主要活性基团 性 质
△ 4 – 3 – 酮 UV、与羰基试剂反应
C17–α – 醇酮基 还 原 性
2,雄性激素及蛋白同化激素
主要活性基团 性 质
△ 4 – 3 – 酮 UV、与羰基试剂反应
C17 –β – 羟基 可成酯
3,孕激素
主要活性基团 性 质
△ 4 – 3 – 酮 UV、与羰基试 剂反应
C17 –甲酮基 与亚硝基铁氰 化纳反应
C17 –乙炔基 与 AgNO3反应
4,雌激素
主要活性基团 性 质
A环为 3–OH 苯环 UV、与重氮苯磺酸盐反应
C17 –乙炔基 与 AgNO3反应
C17 –羟基 可成酯
二、鉴别试验
（一）与强酸的呈色反应
甾体激素
类药物 呈色
H2SO4 H3PO4
HClO4 HCl
（母核）
与硫酸显色反应
显 色 荧光 加水稀释
泼尼松龙 深红 絮状 ↓灰
泼尼松 橙 黄 →蓝绿
炔雌醚 橙红 黄绿 ↓红色
炔雌醇 橙红 黄绿 絮状 ↓玫红
醋酸可的松 黄或微 褪色并澄
带橙 清
(二 ) 官能团的反应
肾上腺
皮质激
素药物
呈色
四氮唑盐
OHˉ
1 C17–α – 醇酮基 还原性
A,呈色反应
肾上
腺皮
质激
素药
物 Cu2O↓橙红色
碱性
酒石酸铜
B,沉淀反应
Ag↓黑色
氨制硝酸银
甾酮类
激素药
物
呈色
羰基试剂
2,C3–酮基和 C20–酮基
＃常用的羰基试剂：
2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼
O
O H
N
C O N H N H 2
H C l
C O N H N
O H
N
异烟腙（黄色）
睾酮
O
C
C H 3
O
2
N
C O N H N H 2
H C l
黄体酮
C O N H N
C
C H
3
N H N O C
N
N
异烟双腙（黄色）
具有甲酮
基或活泼
亚甲基的
甾体激素
类药物
呈色亚硝基铁氰化纳
间二硝基酚
芳香醛
3,甲酮基
黄体酮 蓝紫色
亚硝基铁
氰化纳
其他甾体 淡橙色
不显色
C
O
C H
3
O
黄体酮
? ? ?????? ?? ??? ]NOCNFe[
?OH
H
2
O2+
-4
F e
5
C NN OC H
C
O
O
蓝紫色
有机氟 Fˉ有机破坏
有机氯 Clˉ
4,有机卤素
茜素氟蓝 硝酸亚铈
硝酸 —硝酸银
AgCl↓
呈色
O
O
O H
O H
C H 2 N
C H 2 C O O H
C H 2 C O O H
茜素氟蓝
O
O
O H
O
C H 2 N
C H 2 C O O
C e
C H 2 C O O
F
O H
蓝紫色
F- ??Ce
雌激素
类药物
红色偶
氮染料
重氮苯磺酸
5,酚羟基
含炔基
的甾体
激素
银盐沉淀硝酸银
6,乙炔基
R C C H
A gN O 3
R C C A g↓
炔雌醇
O H
C C H
H O
O H
C C A g
H O
白
3AgN O
???? ?? 黄体酮双酮肟黄体酮 盐酸羟胺△
℃? ? ?? ? ? ~.p.m
???? ?? 苯甲酸酯炔雌醇 苯甲酰氯KOH
℃? ? ?? ? ? ~.p.m
(三 ) 制备衍生物测定 m.p.
℃? ? ?? ? ? ~.p.m
????? ?? 睾丸素丙酸睾酮 醇制 K O H△
???? ??
盐酸氨基脲
苯丙酸诺龙 △
? ?分解℃约 ? ? ?.p.m
缩氨基脲衍生物
? ? ???? ??? ? KOHOCOCHR 醇制
香
??? O C O C HCHCH
?? SOH
OHHC ??
（四）水解产物的反应
?
戊酸戊酸雌二醇 醇制 ???? ?? N a O H
?H
特臭
己酸己酸羟孕酮 醇制 ???? ??
?OH
? ?H
特臭
△ ４ -3-酮 240nm
苯环 280nm
OCCC ???
CCCCCC ?????
（五） UV法
CH??
3300～ 3000cm-1
HC ?? 3000～ 2700cm
-1
OC ??
1900～ 1650cm-1
CC ??
1650～ 1450cm-1
1000～ 650cm-1CH??
（六） IR法
3750～ 3300cm-1ν OH?
醋酸可的松
C O
O
O
O H
C H 2 O C O C H 3
结构特征：△ 4–3–酮,C17 –OH
C20 –酮基,C11 –酮基、醋酸酯
1630cm-1
OC ??
νOH?
3420cm-
亚甲基、角
甲基吸收带
1750cm-1
1232cm-1
1052cm-1
COC ???
结构特征：△ 4–3–酮,C17 –OH
C17–乙炔基
炔诺酮
O
O H
C C H
1650cm-1
OC ??
νOH?
3300cm-
3270cm-1
ν CH? CC ??
1615cm-1
结构特征：酚羟基,C17 –OH
C17 –乙炔基
炔雌醇
O H
C C H
H O
1505cm-1ν
OH?
3505cm-
3300cm-1
ν CH?
CC ??
1590cm-1
3610cm-
νOH?
酚羟基 醇羟基
1615cm-1
苯环的骨
架振动
（七） TLC法
主要用于甾体激素类药物
制剂的鉴别
? 方法：对照品法
要求供试品溶液所显主斑
点的 颜色 和 位置 与对照品溶液
的主斑点相同。
炔诺酮
TLC图
（八） HPLC法
主要用于甾体激素类药物
制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈
德软膏、醋酸氟轻松软膏）
? 方法：对照品法
要求在含量测定项下记录
的色谱图中，供试品峰的 tR与
对照品峰的 tR一致。
三,杂质检查
（一）其他甾体
1.定义
与标示药物结构不同的甾
体化合物都称为“其他甾体”
O H
H 3 C O
O H
H 3 C O
O H
O
Li/NH3 C2H5OH 弱酸
雌二醇－ 3－甲醚
苯丙酸诺龙
的合成路线I
II
O H
O
O C O ( C H 2 ) 2 - C 6 H 5
O
强酸
苯丙酰氯
HCl
III
3,特点
（ 1）可能存在多个甾体杂质
（ 2）结构类似
2,来源
原料、中间体、异构体、
降解产物
4,方法（具有一定分离能力）
TLC法（高低浓度对比法）
HPLC法（类似高低浓度对比法）
（ 1） TLC法（高低浓度对比法）
判定方法：
?规定杂质斑点数目
?规定杂质斑点颜色
醋酸氟轻松 检查 其他甾体
取本品加氯仿 -甲醇（ 9, 1）制
成 3.0mg/ml作为供试液，精密量取适
量，加氯仿 -甲醇（ 9, 1）稀释成
0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱
法，各取 5μl，分别点于同一硅胶 G
板上，以氯仿 -甲醇（ 97, 3）为展
开剂，展开后晾干，在 105℃ 干燥 10
分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试
%%
.
% ??? ? ??
?
???
?限量
液，立即检视，供试品溶液如显杂
质斑点，不得多于 2个，其颜色与对
照液的主斑点比较，不得更深。
1 2
特点：
（ 1）简便易行，不需特殊的仪
器；
（ 2）不需对照品；
（ 3）只能控制单个杂质的限量；
（ 4）要求杂质与主成分的显色
灵敏度接近。
（ 2） HPLC法（高低浓度对比法）
判定方法：
?规定杂质峰数目
?规定杂质峰面积
取本品适量，精密称定，以无水
乙醇为溶剂，配制成每 1ml含 2mg的溶
液（ 1）与每 1ml含 0.04mg的溶液（ 2），
用含量测定项下的方法和溶液
(0.16mg/ml)，取 10μl注入液相色谱仪，
调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达
记录仪的满量程。再分别取溶液（ 1）
醋酸甲地孕酮 检查 其他甾体
和溶液（ 2）各 10μl，进样。记录至
主成分峰保留时间的 2倍。溶液（ 1）
显示的杂质峰数不得超过 4个，各杂
质峰面积及其总和分别不得大于溶液
（ 2）主峰面积的 1/2和 3/4。
供试溶液：溶液（ 1） 2mg/ml
对照溶液：溶液（ 2） 0.04mg/ml
特点：
（ 1）需特殊的仪器；
（ 2）不需对照品；
（ 3）可以控制杂质的总量；
（二）游离磷酸
地塞米松磷酸钠
氢化可的松磷酸钠
倍他米松磷酸钠
氢化泼尼松磷酸钠
对照品法
原理：
? ?? ? ???? ??
??? ???? ??
?????
??
??
?
??
?
?
OnHM o OPH
POHPO
M o OH
还原
钼蓝
对照液
供试液
对
样还原钼酸铵
A
Anm
??? ???? ????? ?? ???
方法：
检查 游离磷酸地塞米松磷酸钠
精密称取本品 20mg，置 25ml量瓶
中，加水 15ml溶解，精密加钼酸铵硫
酸试液 2.5ml与 1-氨基 -2-萘酚 -4-磺酸溶
液 1ml，加水至刻度，摇匀，在 20℃ 放
置 30～ 50分钟，照分光光度法，在 740
nm处测定吸收度，与对照液 4.0ml同法
处理的吸收度比较，不得更大。
（ 对照液 0.0035%KH2PO4）
? ? ?
??
?
??
??
POKH
POH
%
.
%..
L ????
???
???
??
?????????
?
%.???
（三）甲醇和丙酮
（灵敏度法）甲醇 不得出峰
检测限 = 3.1ng
丙酮 ≤5.0%
内标法 + 校正因子
GC法
地塞米松磷酸钠 检查 甲醇和丙酮
精密称取本品 0.16g，置 10ml量瓶
中，精密加内标溶液 2ml，加水稀释至
刻度，作为供试液；另精密量取甲醇 10
μl(≈7.9mg)与丙酮 100μl(≈79mg)置
100ml量瓶中，精密加内标溶液 20ml，
加水至刻度，作为对照液。照气相色谱
法测定，含丙酮不得过 5.0%，并不得
出现甲醇峰。
O
H O 雌酮
O H
C C H
H O 炔雌醇
???
O
O
H 3 C
H O
二酮烯
羟基雄甾
??????
?????
,
乙炔化
（四）雌酮
原理 Zimmermann反应
紫红色间二硝基苯 ????? ??碱性 KOH乙醇
O
C C H 2
高纯度
O
H O
N O 2
N O 2
硒四、
来源 合成中用二氧化硒 (SeO2)脱氢
剧毒
原理
nmA ???
环己烷
苯并苯硒二唑二氨基萘 ??????? ?? ?????,Se,
?????,.pH
???? ???? ?????? ?? SeSe 盐酸羟胺氧瓶燃烧
方法
?醋酸氟轻松 检查 硒
取本品 50mg，照氧瓶燃烧法
进行破坏后，将吸收液转移至
100ml容量瓶中，用水 15ml冲洗燃
烧瓶及铂丝，并入吸收液中，用
水加至刻度。取硒对照液
（ 0.05ug/ml）和上述供试品溶液
分别用氨试液调节 pH值至 2.0 0.2
后，转移至分液漏斗中，用水
? ?
少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液
漏斗中，使成 60ml，各加盐酸羟胺
溶液（ 1→2） 1ml，摇匀后，立即
精密加二氨基奈试液 5ml，摇匀，
在室温下放置 100分钟，精密加环己
烷 5ml，强烈振摇 2′，静置分层，取
环己烷脱水后，测 A378nm。
规定 A供 ＜ A对。
%
.
L ????
???????
???????
?
%.????
四、含量测定
（一） UV法
△ ４ -3-酮 240nm（ ± ）
肾上腺皮质激素
雄性激素和蛋白同化激素
孕激素
苯环 280nm（ ± ）
雌激素
（二）反应分光光度法
1,适用于非分光光度活性药物
2,使待测组分光谱位移，避免干扰
3,增加测定灵敏度
4,增加选择性
弱、非分
光光度活
性药物
强分光
光度活
性药物
化学反应
肾上腺皮质激素类
C17 -α－醇酮基
强还原性
1,原理
有色甲瓒四氮唑盐 醇酮基 ????? ?? ?????COH - [还原 ]
四氮唑比色法
醛基酮
甾基甲酸衍生物
醇酮基
???????
?? ???? ?? e[O]
羧酸衍生物羟基 ???????
OH-
分子重排
O O H
H
O H
C
O
H O
C
O H
C
N N
N N
H
三苯甲瓒 ↓深红
C
N N
N N
+
C l
-
氯化三苯四氮唑
（ TTC）
红四氮唑（ RT）
nm~m a x 4 904 80??
?OH
e2?
C l
-
+
C
N N
N N
O C H
3
+
-
C l
C
N N
N N
O C H
3
蓝四氮唑
（ BT）
?OH e4?
H
C
N N
N N
O C H
3
H
C
N N
N N
O C H
3
双甲瓒（暗蓝）
nmm ax 52 5??
2,方法
ChP TTC（ RT）
BP TTC（ RT）
USP BT
对照品法
?? ??
????? ???? ??
?? ℃
氢氧化四甲基铵
对照液
供试液
A
TTC
40～ 45′
暗
醋酸泼尼松龙软膏 含量测定
对照液,精密称取醋酸泼尼松龙对照品
20mg，置 100ml量瓶中，加无水乙醇振
摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试液,精密称取本品 4g（约相当于醋
酸泼尼松龙 20mg），置烧杯中，加无水
乙醇约 30ml，置水浴上加热，充分搅拌，
使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰浴中冷却，
滤过，滤液置 100ml量瓶中，同法提取
三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀
释至刻度，摇匀，即得。
测定法,精密量取上述溶液各 1ml，分
别置 干燥具塞试管 中，各精密加无水乙
醇 9ml与氯化三苯四氮唑试液 2ml，摇匀，
再各精密加氢氧化四甲基铵试液 1ml，
摇匀，在 25℃ 暗处放置 40～ 50分钟，照
分光光度法，在 485nm的波长处分别测
定吸收度，计算，即得。操作应避光。
3,讨论
（ 1） 基团对反应速度的影响
C11= O＞ C11－ OH
C21－ OH＞ C21-酯
C16无论何种取代基 ν↓
（ 2） 溶剂、水分的影响
含水量＞ 5%→ν↓
含水 10%→A↓10%
含水 30%→ 几无反应
— 无醛无水乙醇醛 → A↑
—无水乙醇
（ 3） O2与光线的影响
反应过程
反应产物
怕光 →避光、快速
O2影响
颜色强
度和稳
定性
→隔绝空气、
快速、充 N2
（ 4）碱的种类及加入顺序
反应应在强碱性（ pH13.75）
条件下进行
以 氢氧化四甲基铵 的结果最佳
碱试液四氮唑盐皮质激素溶液 ??
加入顺序：
（ 5） 温度与时间
t℃ ↑→ν↑→甲瓒分解 ↑→%↓
ChP 25℃ 40～ 45′
BP 30℃ 1h
4,特点：
缺点 影响因素太多
优点 测定结果能指示药品
的稳定性（氧化及降
解产物无此反应）
肾上腺皮质激素、
雄性激素和蛋白同
化激素、孕激素
C3－酮基
1,原理
异烟腙（黄）酮基 异烟肼 ??? ????C HCl
（缩合）
异烟肼比色法
C O N H N
O H
N
异烟腙（黄色）
2,方法
??? ??
??? ????? ??
?? ℃
异烟肼挥去乙醇
对照液
供试液
A
?C H C l
暗 45′
对照品法
醋酸地塞米松软膏 含量测定
对照液：精密称取醋酸地塞米松对照品
25mg，置 100ml量瓶中，加无水乙醇适
量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量
取 5ml，用无水乙醇稀释至 50ml，摇匀。
供试液：精密称取本品适量（约相当于
醋酸地塞米松 25mg），置烧杯中，加无
水乙醇约 25ml，置水浴中加热，搅拌，
使醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷却，
滤过，滤液置 100ml量瓶中，同法提取
三次，滤液并入量瓶中，用无水乙醇稀
释至刻度，摇匀，即得。
测定法：精密量取上述溶液各 10ml，分
别置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，
残渣中加氯仿 10ml，振摇，使残渣溶解，
各精密加 0.1%异烟肼甲醇溶液 10ml，摇
匀，置 55℃ 暗处保温 45分钟，取出，放
冷，用氯仿稀释至 25ml。摇匀，在 415
nm的波长处分别测定吸收度，计算即得。
3.讨论
反应速度（ 1）
C3= O ＞ C17= O, C20= O
C11= O 不反应
反应专属性 C3－酮基
（ 2）溶剂的选择
异烟肼盐酸盐 →甲醇、乙醇
无水甲醇
无水乙醇
（ 3）水分,O2与光线的影响
含水量 ↑→腙水解 ↑→A↓→%↓
不挥发溶剂、不吸收水分时 →
O2与光线无影响
酸、异烟肼的量(3)
盐酸, 异烟肼 = 2, 1
样品, 异烟肼 = 1, 8 →ν↑
酸度 ↑→ 异烟肼盐 ↓
酸度 ↓→ A↓
温度(4) t℃ ↑ → ν↑
1,原理
λmax=465
λmax=515
雌激素Kober反应比色法
桃红黄色雌激素 乙醇 ?? ??????? ?? ???? OHSOH△ △
O H
C H 3 O
雌二醇 -3-甲醚
C H 3
C H 3 O
C H 3
C H 3 O
λmax=465
λmax=515
??? ?? ?? SOH
?? SOHOH ?
铁－酚试剂
[(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚 ]
* 铁盐的作用
加快黄色产物的形成、转化
加强红色产物的稳定性
* 酚的作用
加快红色产物的形成
消除反应产生的荧光
Iron-phenol Reagent
2,特点：
优点 较高的灵敏度
具有一定的选择性
缺点 非化学计量反应
反应应控制条件、
注意平行原则
（三） HPLC法 USP,BP,JP均采用
RP－ HPLC（大多内标法）
特点 用样量少，灵敏度高，分离效
果好，测定速度快
（甾体激素类药物常含有结构相似的
其他甾体杂质，对利用结构特征设计
的比色法有干扰）
1、熟悉本类药物的分类，掌握其结构
特征与分析方法的关系
2、掌握红外光谱鉴别法及某些官能团
的呈色反应，了解其他鉴别方法
3、掌握本类药物中其他甾体的检查方
法，了解其他特殊杂质的检查
第十章 复习内容
4、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法
的原理、方法及测定条件。了解
UV法,Kober反应比色法及 HPLC
法在其含量测定中的应用
112,甾体激素类药物的结构中能和
四氮唑盐发生显色反应的基团
A,酚羟基
B,活泼次甲基
C,甲酮基
D,C17 -α-醇酮基
E,酮基
用异烟肼比色法测定甾体激素药物
含量时, 其溶液的环境是
A,强酸性
B,中性
C,强碱性
D,弱碱性
E,以上都不对
问题 31～ 35
A．维生素 B1 B．醋酸地塞米松
C．两者皆是 D．两者皆不是
31,异烟肼比色法
32,硫色素反应
33,紫外分光光度法
34,羟肟酸铁反应
35,绿奎宁（ Thaciaquin）反应
B
A
C
D
D
可用于氢化可的松鉴别的试剂有
A,氨制硝酸银
B,异烟肼
C,红四氮唑
D,硫酸
E,重氮苯磺酸
75．可用于甾体激体类药物的测定方
法有
A．高效液相色谱法
B．四氮唑盐法
C．紫外分光光度法
D．异烟肼比色法
E,Kober反应比色法
能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰
紫色的药物是
A,雌二醇
B,黄体酮
C,醋酸可的松
D,苯丙酸诺龙
E,以上都不对
98,74,各国药典对甾体激素类药物
常用 HPLC或 GC法测定其含
量, 主要原因是
A,它们没有特征紫外吸收, 不能用
紫外分光光度法
B,不能用滴定分析法进行测定
C,由于, 其它甾体, 的存在, 色谱法
可消除它们的干扰
D,色谱法比较简单, 精密度好
E,色谱法准确度优于滴定分析法
113．异烟肼比色法测定甾体激素类
药物时，药物的呈色基团是
A,酮基
B,酚羟基
C,活泼次甲基
D,炔基
E,甾体母核
99,90,四氮唑比色法可用于下列哪
个药物的含量测定
A,可的松
B,睾丸素
C,雌二醇
D,炔雌醇
E,黄体酮
95,[116—120]可适用的药物：
A,可的松 B,雌二醇
C,两者均可 D,两者均不可
116．亚硝酸钠滴定法
117．高效液相色谱法
118．能与羰基试剂缩合
119．可用铁酚试剂比色法测定
120．可用四氮唑比色法测定
D
C
A
B
A
114,Kober反应是
A,雌性激素与硫酸乙醇共热呈色
B,皮质激素与硫酸一乙醇共热呈色
C,雌性激素与硫酸－乙醇共热呈色,
用水或稀硫酸稀释后加热颜色改变
D,维生素 A与无水三氯化锑的无醇氯
仿溶液呈色
E,异丙嗪于酸性条件下与钯离子呈色
96,139,黄体酮在酸性溶液中可与下
列哪些试剂反应呈色
A,2,4-二硝基苯肼
B,三氯化铁
C,硫酸苯肼
D,异烟肼
E,四氮唑盐
95,76,Kober反应及铁一酚试剂法
适用于哪一药物的含量测定
A,黄体酮
B,雌二醇
C,甲基睾丸素
D,甲基炔诺酮
E,氢化可的松
用四氮唑比色法测定皮质激素类
药物, 是利用 C17–α醇酮基的何种性
质
A,氧化性
B,还原性
C,可加成性
D,酸性
E,碱性
红外吸收光谱图中, 羟基的伸缩振
动范围约为：
A,3600-3300cm-1
B,3300-3000cm-1
C,3000-2700cm-1
D,2400-2100cm-1
E,1900-1650cm-1
红外吸收光谱图中, 羰基的伸缩
振动波数为
A,3600-3300cm-1
B,3300-3000cm-1
C,3000-2700cm-1
D,2400-2100cm-1
E,1900-1650cm-1
可与重氮苯磺酸作用生成红色偶氮
染料的甾体激素类药物是
A,醋酸可的松
B,睾酮
C,黄体酮
D,雌二醇
E,炔诺酮
甾体激素类药物
的分析
基本结构：环戊烷骈多氢菲
C
2 0
C
2 1
A B
C D1
2
3
4 5 6
7
8910
11
12
13
14 15
16
17
18
19
分类：
甾体激素
肾上腺皮质激素
性激素
雄性激素及蛋
白同化激素
孕激素
雌激素
O
H O
O H
O C H
2
O H
H
H H
肾上腺皮质激素
氢化可的松
O
H O
O H
O
H
F H
O C H
3
O
H
C H
3
肾上腺皮质激素
醋酸地塞米松
O
O
H
H H
H
O
C H
3
雄性激素
丙酸睾酮
O
O
H
H H
H
O
蛋白同化激素
苯丙酸诺龙
C
O
H H
H
C H
3
O
孕激素
黄体酮
C
H O
H H
H
O H
C H
雌激素
炔雌醇
一、结构与性质
1,肾上腺皮质激素
主要活性基团 性 质
△ 4 – 3 – 酮 UV、与羰基试剂反应
C17–α – 醇酮基 还 原 性
2,雄性激素及蛋白同化激素
主要活性基团 性 质
△ 4 – 3 – 酮 UV、与羰基试剂反应
C17 –β – 羟基 可成酯
3,孕激素
主要活性基团 性 质
△ 4 – 3 – 酮 UV、与羰基试 剂反应
C17 –甲酮基 与亚硝基铁氰 化纳反应
C17 –乙炔基 与 AgNO3反应
4,雌激素
主要活性基团 性 质
A环为 3–OH 苯环 UV、与重氮苯磺酸盐反应
C17 –乙炔基 与 AgNO3反应
C17 –羟基 可成酯
二、鉴别试验
（一）与强酸的呈色反应
甾体激素
类药物 呈色
H2SO4 H3PO4
HClO4 HCl
（母核）
与硫酸显色反应
显 色 荧光 加水稀释
泼尼松龙 深红 絮状 ↓灰
泼尼松 橙 黄 →蓝绿
炔雌醚 橙红 黄绿 ↓红色
炔雌醇 橙红 黄绿 絮状 ↓玫红
醋酸可的松 黄或微 褪色并澄
带橙 清
(二 ) 官能团的反应
肾上腺
皮质激
素药物
呈色
四氮唑盐
OHˉ
1 C17–α – 醇酮基 还原性
A,呈色反应
肾上
腺皮
质激
素药
物 Cu2O↓橙红色
碱性
酒石酸铜
B,沉淀反应
Ag↓黑色
氨制硝酸银
甾酮类
激素药
物
呈色
羰基试剂
2,C3–酮基和 C20–酮基
＃常用的羰基试剂：
2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼
O
O H
N
C O N H N H 2
H C l
C O N H N
O H
N
异烟腙（黄色）
睾酮
O
C
C H 3
O
2
N
C O N H N H 2
H C l
黄体酮
C O N H N
C
C H
3
N H N O C
N
N
异烟双腙（黄色）
具有甲酮
基或活泼
亚甲基的
甾体激素
类药物
呈色亚硝基铁氰化纳
间二硝基酚
芳香醛
3,甲酮基
黄体酮 蓝紫色
亚硝基铁
氰化纳
其他甾体 淡橙色
不显色
C
O
C H
3
O
黄体酮
? ? ?????? ?? ??? ]NOCNFe[
?OH
H
2
O2+
-4
F e
5
C NN OC H
C
O
O
蓝紫色
有机氟 Fˉ有机破坏
有机氯 Clˉ
4,有机卤素
茜素氟蓝 硝酸亚铈
硝酸 —硝酸银
AgCl↓
呈色
O
O
O H
O H
C H 2 N
C H 2 C O O H
C H 2 C O O H
茜素氟蓝
O
O
O H
O
C H 2 N
C H 2 C O O
C e
C H 2 C O O
F
O H
蓝紫色
F- ??Ce
雌激素
类药物
红色偶
氮染料
重氮苯磺酸
5,酚羟基
含炔基
的甾体
激素
银盐沉淀硝酸银
6,乙炔基
R C C H
A gN O 3
R C C A g↓
炔雌醇
O H
C C H
H O
O H
C C A g
H O
白
3AgN O
???? ?? 黄体酮双酮肟黄体酮 盐酸羟胺△
℃? ? ?? ? ? ~.p.m
???? ?? 苯甲酸酯炔雌醇 苯甲酰氯KOH
℃? ? ?? ? ? ~.p.m
(三 ) 制备衍生物测定 m.p.
℃? ? ?? ? ? ~.p.m
????? ?? 睾丸素丙酸睾酮 醇制 K O H△
???? ??
盐酸氨基脲
苯丙酸诺龙 △
? ?分解℃约 ? ? ?.p.m
缩氨基脲衍生物
? ? ???? ??? ? KOHOCOCHR 醇制
香
??? O C O C HCHCH
?? SOH
OHHC ??
（四）水解产物的反应
?
戊酸戊酸雌二醇 醇制 ???? ?? N a O H
?H
特臭
己酸己酸羟孕酮 醇制 ???? ??
?OH
? ?H
特臭
△ ４ -3-酮 240nm
苯环 280nm
OCCC ???
CCCCCC ?????
（五） UV法
CH??
3300～ 3000cm-1
HC ?? 3000～ 2700cm
-1
OC ??
1900～ 1650cm-1
CC ??
1650～ 1450cm-1
1000～ 650cm-1CH??
（六） IR法
3750～ 3300cm-1ν OH?
醋酸可的松
C O
O
O
O H
C H 2 O C O C H 3
结构特征：△ 4–3–酮,C17 –OH
C20 –酮基,C11 –酮基、醋酸酯
1630cm-1
OC ??
νOH?
3420cm-
亚甲基、角
甲基吸收带
1750cm-1
1232cm-1
1052cm-1
COC ???
结构特征：△ 4–3–酮,C17 –OH
C17–乙炔基
炔诺酮
O
O H
C C H
1650cm-1
OC ??
νOH?
3300cm-
3270cm-1
ν CH? CC ??
1615cm-1
结构特征：酚羟基,C17 –OH
C17 –乙炔基
炔雌醇
O H
C C H
H O
1505cm-1ν
OH?
3505cm-
3300cm-1
ν CH?
CC ??
1590cm-1
3610cm-
νOH?
酚羟基 醇羟基
1615cm-1
苯环的骨
架振动
（七） TLC法
主要用于甾体激素类药物
制剂的鉴别
? 方法：对照品法
要求供试品溶液所显主斑
点的 颜色 和 位置 与对照品溶液
的主斑点相同。
炔诺酮
TLC图
（八） HPLC法
主要用于甾体激素类药物
制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈
德软膏、醋酸氟轻松软膏）
? 方法：对照品法
要求在含量测定项下记录
的色谱图中，供试品峰的 tR与
对照品峰的 tR一致。
三,杂质检查
（一）其他甾体
1.定义
与标示药物结构不同的甾
体化合物都称为“其他甾体”
O H
H 3 C O
O H
H 3 C O
O H
O
Li/NH3 C2H5OH 弱酸
雌二醇－ 3－甲醚
苯丙酸诺龙
的合成路线I
II
O H
O
O C O ( C H 2 ) 2 - C 6 H 5
O
强酸
苯丙酰氯
HCl
III
3,特点
（ 1）可能存在多个甾体杂质
（ 2）结构类似
2,来源
原料、中间体、异构体、
降解产物
4,方法（具有一定分离能力）
TLC法（高低浓度对比法）
HPLC法（类似高低浓度对比法）
（ 1） TLC法（高低浓度对比法）
判定方法：
?规定杂质斑点数目
?规定杂质斑点颜色
醋酸氟轻松 检查 其他甾体
取本品加氯仿 -甲醇（ 9, 1）制
成 3.0mg/ml作为供试液，精密量取适
量，加氯仿 -甲醇（ 9, 1）稀释成
0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱
法，各取 5μl，分别点于同一硅胶 G
板上，以氯仿 -甲醇（ 97, 3）为展
开剂，展开后晾干，在 105℃ 干燥 10
分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试
%%
.
% ??? ? ??
?
???
?限量
液，立即检视，供试品溶液如显杂
质斑点，不得多于 2个，其颜色与对
照液的主斑点比较，不得更深。
1 2
特点：
（ 1）简便易行，不需特殊的仪
器；
（ 2）不需对照品；
（ 3）只能控制单个杂质的限量；
（ 4）要求杂质与主成分的显色
灵敏度接近。
（ 2） HPLC法（高低浓度对比法）
判定方法：
?规定杂质峰数目
?规定杂质峰面积
取本品适量，精密称定，以无水
乙醇为溶剂，配制成每 1ml含 2mg的溶
液（ 1）与每 1ml含 0.04mg的溶液（ 2），
用含量测定项下的方法和溶液
(0.16mg/ml)，取 10μl注入液相色谱仪，
调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达
记录仪的满量程。再分别取溶液（ 1）
醋酸甲地孕酮 检查 其他甾体
和溶液（ 2）各 10μl，进样。记录至
主成分峰保留时间的 2倍。溶液（ 1）
显示的杂质峰数不得超过 4个，各杂
质峰面积及其总和分别不得大于溶液
（ 2）主峰面积的 1/2和 3/4。
供试溶液：溶液（ 1） 2mg/ml
对照溶液：溶液（ 2） 0.04mg/ml
特点：
（ 1）需特殊的仪器；
（ 2）不需对照品；
（ 3）可以控制杂质的总量；
（二）游离磷酸
地塞米松磷酸钠
氢化可的松磷酸钠
倍他米松磷酸钠
氢化泼尼松磷酸钠
对照品法
原理：
? ?? ? ???? ??
??? ???? ??
?????
??
??
?
??
?
?
OnHM o OPH
POHPO
M o OH
还原
钼蓝
对照液
供试液
对
样还原钼酸铵
A
Anm
??? ???? ????? ?? ???
方法：
检查 游离磷酸地塞米松磷酸钠
精密称取本品 20mg，置 25ml量瓶
中，加水 15ml溶解，精密加钼酸铵硫
酸试液 2.5ml与 1-氨基 -2-萘酚 -4-磺酸溶
液 1ml，加水至刻度，摇匀，在 20℃ 放
置 30～ 50分钟，照分光光度法，在 740
nm处测定吸收度，与对照液 4.0ml同法
处理的吸收度比较，不得更大。
（ 对照液 0.0035%KH2PO4）
? ? ?
??
?
??
??
POKH
POH
%
.
%..
L ????
???
???
??
?????????
?
%.???
（三）甲醇和丙酮
（灵敏度法）甲醇 不得出峰
检测限 = 3.1ng
丙酮 ≤5.0%
内标法 + 校正因子
GC法
地塞米松磷酸钠 检查 甲醇和丙酮
精密称取本品 0.16g，置 10ml量瓶
中，精密加内标溶液 2ml，加水稀释至
刻度，作为供试液；另精密量取甲醇 10
μl(≈7.9mg)与丙酮 100μl(≈79mg)置
100ml量瓶中，精密加内标溶液 20ml，
加水至刻度，作为对照液。照气相色谱
法测定，含丙酮不得过 5.0%，并不得
出现甲醇峰。
O
H O 雌酮
O H
C C H
H O 炔雌醇
???
O
O
H 3 C
H O
二酮烯
羟基雄甾
??????
?????
,
乙炔化
（四）雌酮
原理 Zimmermann反应
紫红色间二硝基苯 ????? ??碱性 KOH乙醇
O
C C H 2
高纯度
O
H O
N O 2
N O 2
硒四、
来源 合成中用二氧化硒 (SeO2)脱氢
剧毒
原理
nmA ???
环己烷
苯并苯硒二唑二氨基萘 ??????? ?? ?????,Se,
?????,.pH
???? ???? ?????? ?? SeSe 盐酸羟胺氧瓶燃烧
方法
?醋酸氟轻松 检查 硒
取本品 50mg，照氧瓶燃烧法
进行破坏后，将吸收液转移至
100ml容量瓶中，用水 15ml冲洗燃
烧瓶及铂丝，并入吸收液中，用
水加至刻度。取硒对照液
（ 0.05ug/ml）和上述供试品溶液
分别用氨试液调节 pH值至 2.0 0.2
后，转移至分液漏斗中，用水
? ?
少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液
漏斗中，使成 60ml，各加盐酸羟胺
溶液（ 1→2） 1ml，摇匀后，立即
精密加二氨基奈试液 5ml，摇匀，
在室温下放置 100分钟，精密加环己
烷 5ml，强烈振摇 2′，静置分层，取
环己烷脱水后，测 A378nm。
规定 A供 ＜ A对。
%
.
L ????
???????
???????
?
%.????
四、含量测定
（一） UV法
△ ４ -3-酮 240nm（ ± ）
肾上腺皮质激素
雄性激素和蛋白同化激素
孕激素
苯环 280nm（ ± ）
雌激素
（二）反应分光光度法
1,适用于非分光光度活性药物
2,使待测组分光谱位移，避免干扰
3,增加测定灵敏度
4,增加选择性
弱、非分
光光度活
性药物
强分光
光度活
性药物
化学反应
肾上腺皮质激素类
C17 -α－醇酮基
强还原性
1,原理
有色甲瓒四氮唑盐 醇酮基 ????? ?? ?????COH - [还原 ]
四氮唑比色法
醛基酮
甾基甲酸衍生物
醇酮基
???????
?? ???? ?? e[O]
羧酸衍生物羟基 ???????
OH-
分子重排
O O H
H
O H
C
O
H O
C
O H
C
N N
N N
H
三苯甲瓒 ↓深红
C
N N
N N
+
C l
-
氯化三苯四氮唑
（ TTC）
红四氮唑（ RT）
nm~m a x 4 904 80??
?OH
e2?
C l
-
+
C
N N
N N
O C H
3
+
-
C l
C
N N
N N
O C H
3
蓝四氮唑
（ BT）
?OH e4?
H
C
N N
N N
O C H
3
H
C
N N
N N
O C H
3
双甲瓒（暗蓝）
nmm ax 52 5??
2,方法
ChP TTC（ RT）
BP TTC（ RT）
USP BT
对照品法
?? ??
????? ???? ??
?? ℃
氢氧化四甲基铵
对照液
供试液
A
TTC
40～ 45′
暗
醋酸泼尼松龙软膏 含量测定
对照液,精密称取醋酸泼尼松龙对照品
20mg，置 100ml量瓶中，加无水乙醇振
摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试液,精密称取本品 4g（约相当于醋
酸泼尼松龙 20mg），置烧杯中，加无水
乙醇约 30ml，置水浴上加热，充分搅拌，
使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰浴中冷却，
滤过，滤液置 100ml量瓶中，同法提取
三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀
释至刻度，摇匀，即得。
测定法,精密量取上述溶液各 1ml，分
别置 干燥具塞试管 中，各精密加无水乙
醇 9ml与氯化三苯四氮唑试液 2ml，摇匀，
再各精密加氢氧化四甲基铵试液 1ml，
摇匀，在 25℃ 暗处放置 40～ 50分钟，照
分光光度法，在 485nm的波长处分别测
定吸收度，计算，即得。操作应避光。
3,讨论
（ 1） 基团对反应速度的影响
C11= O＞ C11－ OH
C21－ OH＞ C21-酯
C16无论何种取代基 ν↓
（ 2） 溶剂、水分的影响
含水量＞ 5%→ν↓
含水 10%→A↓10%
含水 30%→ 几无反应
— 无醛无水乙醇醛 → A↑
—无水乙醇
（ 3） O2与光线的影响
反应过程
反应产物
怕光 →避光、快速
O2影响
颜色强
度和稳
定性
→隔绝空气、
快速、充 N2
（ 4）碱的种类及加入顺序
反应应在强碱性（ pH13.75）
条件下进行
以 氢氧化四甲基铵 的结果最佳
碱试液四氮唑盐皮质激素溶液 ??
加入顺序：
（ 5） 温度与时间
t℃ ↑→ν↑→甲瓒分解 ↑→%↓
ChP 25℃ 40～ 45′
BP 30℃ 1h
4,特点：
缺点 影响因素太多
优点 测定结果能指示药品
的稳定性（氧化及降
解产物无此反应）
肾上腺皮质激素、
雄性激素和蛋白同
化激素、孕激素
C3－酮基
1,原理
异烟腙（黄）酮基 异烟肼 ??? ????C HCl
（缩合）
异烟肼比色法
C O N H N
O H
N
异烟腙（黄色）
2,方法
??? ??
??? ????? ??
?? ℃
异烟肼挥去乙醇
对照液
供试液
A
?C H C l
暗 45′
对照品法
醋酸地塞米松软膏 含量测定
对照液：精密称取醋酸地塞米松对照品
25mg，置 100ml量瓶中，加无水乙醇适
量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量
取 5ml，用无水乙醇稀释至 50ml，摇匀。
供试液：精密称取本品适量（约相当于
醋酸地塞米松 25mg），置烧杯中，加无
水乙醇约 25ml，置水浴中加热，搅拌，
使醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷却，
滤过，滤液置 100ml量瓶中，同法提取
三次，滤液并入量瓶中，用无水乙醇稀
释至刻度，摇匀，即得。
测定法：精密量取上述溶液各 10ml，分
别置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，
残渣中加氯仿 10ml，振摇，使残渣溶解，
各精密加 0.1%异烟肼甲醇溶液 10ml，摇
匀，置 55℃ 暗处保温 45分钟，取出，放
冷，用氯仿稀释至 25ml。摇匀，在 415
nm的波长处分别测定吸收度，计算即得。
3.讨论
反应速度（ 1）
C3= O ＞ C17= O, C20= O
C11= O 不反应
反应专属性 C3－酮基
（ 2）溶剂的选择
异烟肼盐酸盐 →甲醇、乙醇
无水甲醇
无水乙醇
（ 3）水分,O2与光线的影响
含水量 ↑→腙水解 ↑→A↓→%↓
不挥发溶剂、不吸收水分时 →
O2与光线无影响
酸、异烟肼的量(3)
盐酸, 异烟肼 = 2, 1
样品, 异烟肼 = 1, 8 →ν↑
酸度 ↑→ 异烟肼盐 ↓
酸度 ↓→ A↓
温度(4) t℃ ↑ → ν↑
1,原理
λmax=465
λmax=515
雌激素Kober反应比色法
桃红黄色雌激素 乙醇 ?? ??????? ?? ???? OHSOH△ △
O H
C H 3 O
雌二醇 -3-甲醚
C H 3
C H 3 O
C H 3
C H 3 O
λmax=465
λmax=515
??? ?? ?? SOH
?? SOHOH ?
铁－酚试剂
[(NH4)2Fe(SO4)2 + H2SO4 + H2O2 + 苯酚 ]
* 铁盐的作用
加快黄色产物的形成、转化
加强红色产物的稳定性
* 酚的作用
加快红色产物的形成
消除反应产生的荧光
Iron-phenol Reagent
2,特点：
优点 较高的灵敏度
具有一定的选择性
缺点 非化学计量反应
反应应控制条件、
注意平行原则
（三） HPLC法 USP,BP,JP均采用
RP－ HPLC（大多内标法）
特点 用样量少，灵敏度高，分离效
果好，测定速度快
（甾体激素类药物常含有结构相似的
其他甾体杂质，对利用结构特征设计
的比色法有干扰）
1、熟悉本类药物的分类，掌握其结构
特征与分析方法的关系
2、掌握红外光谱鉴别法及某些官能团
的呈色反应，了解其他鉴别方法
3、掌握本类药物中其他甾体的检查方
法，了解其他特殊杂质的检查
第十章 复习内容
4、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法
的原理、方法及测定条件。了解
UV法,Kober反应比色法及 HPLC
法在其含量测定中的应用
112,甾体激素类药物的结构中能和
四氮唑盐发生显色反应的基团
A,酚羟基
B,活泼次甲基
C,甲酮基
D,C17 -α-醇酮基
E,酮基
用异烟肼比色法测定甾体激素药物
含量时, 其溶液的环境是
A,强酸性
B,中性
C,强碱性
D,弱碱性
E,以上都不对
问题 31～ 35
A．维生素 B1 B．醋酸地塞米松
C．两者皆是 D．两者皆不是
31,异烟肼比色法
32,硫色素反应
33,紫外分光光度法
34,羟肟酸铁反应
35,绿奎宁（ Thaciaquin）反应
B
A
C
D
D
可用于氢化可的松鉴别的试剂有
A,氨制硝酸银
B,异烟肼
C,红四氮唑
D,硫酸
E,重氮苯磺酸
75．可用于甾体激体类药物的测定方
法有
A．高效液相色谱法
B．四氮唑盐法
C．紫外分光光度法
D．异烟肼比色法
E,Kober反应比色法
能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰
紫色的药物是
A,雌二醇
B,黄体酮
C,醋酸可的松
D,苯丙酸诺龙
E,以上都不对
98,74,各国药典对甾体激素类药物
常用 HPLC或 GC法测定其含
量, 主要原因是
A,它们没有特征紫外吸收, 不能用
紫外分光光度法
B,不能用滴定分析法进行测定
C,由于, 其它甾体, 的存在, 色谱法
可消除它们的干扰
D,色谱法比较简单, 精密度好
E,色谱法准确度优于滴定分析法
113．异烟肼比色法测定甾体激素类
药物时，药物的呈色基团是
A,酮基
B,酚羟基
C,活泼次甲基
D,炔基
E,甾体母核
99,90,四氮唑比色法可用于下列哪
个药物的含量测定
A,可的松
B,睾丸素
C,雌二醇
D,炔雌醇
E,黄体酮
95,[116—120]可适用的药物：
A,可的松 B,雌二醇
C,两者均可 D,两者均不可
116．亚硝酸钠滴定法
117．高效液相色谱法
118．能与羰基试剂缩合
119．可用铁酚试剂比色法测定
120．可用四氮唑比色法测定
D
C
A
B
A
114,Kober反应是
A,雌性激素与硫酸乙醇共热呈色
B,皮质激素与硫酸一乙醇共热呈色
C,雌性激素与硫酸－乙醇共热呈色,
用水或稀硫酸稀释后加热颜色改变
D,维生素 A与无水三氯化锑的无醇氯
仿溶液呈色
E,异丙嗪于酸性条件下与钯离子呈色
96,139,黄体酮在酸性溶液中可与下
列哪些试剂反应呈色
A,2,4-二硝基苯肼
B,三氯化铁
C,硫酸苯肼
D,异烟肼
E,四氮唑盐
95,76,Kober反应及铁一酚试剂法
适用于哪一药物的含量测定
A,黄体酮
B,雌二醇
C,甲基睾丸素
D,甲基炔诺酮
E,氢化可的松
用四氮唑比色法测定皮质激素类
药物, 是利用 C17–α醇酮基的何种性
质
A,氧化性
B,还原性
C,可加成性
D,酸性
E,碱性
红外吸收光谱图中, 羟基的伸缩振
动范围约为：
A,3600-3300cm-1
B,3300-3000cm-1
C,3000-2700cm-1
D,2400-2100cm-1
E,1900-1650cm-1
红外吸收光谱图中, 羰基的伸缩
振动波数为
A,3600-3300cm-1
B,3300-3000cm-1
C,3000-2700cm-1
D,2400-2100cm-1
E,1900-1650cm-1
可与重氮苯磺酸作用生成红色偶氮
染料的甾体激素类药物是
A,醋酸可的松
B,睾酮
C,黄体酮
D,雌二醇
E,炔诺酮
