第九章
维生素类药物的
分析
第一节 概述
维生素：
是维持人体正常代谢机能所
必需的 微量营养物资。
人体不能合成维生素。
VitA,D2,D3,E,K1 等脂溶性
水溶性 VitB族 (B1,B2,B6,B12)
VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺
VitM VitPP
-H 维生素 A醇
-COCH3 维生素 A醋酸酯
-COC15H31 维生素 A棕榈酸酯
R,
第二节 维生素 A
为一个具有共轭多烯侧链的
环己烯
（一）
结构与性质一、
? 具有 UV吸收
? 存在多种立体异构化合物
维生素 A 325.5 100%
新维生素 Aa 328 75%
新维生素 Ab 320.5 24%
新维生素 Ac 310.5 15%
异维生素 Aa 323 21%
异维生素 Ab 324 24%
m a x?
相对生物效价
VitA2
VitA3
? 易发生脱氢、脱水、聚合反应
鲸醇
酸
醛
环氧化物
、氧化剂紫外线、
V i t A
V i t A
V i t A
]O[
O 2
?? ???
???????? ??
? △ 或有金属离子存在时氧化 ↑
共轭多烯侧链 易被氧化（二）
环氧化物
VitA醛
VitA酸
（三） 与三氯化锑发生呈色反应
紫红蓝色 ???? ?? 3S b C lV i t ACHCl
3
溶解性（四）
不溶于水
易溶于有机溶剂和植物油等
三氯化锑反应（一）
条件 无水无醇
紫红蓝色 ???? ?? 3S b C lV i t ACHCl
3
鉴别二、
-
R C O OS b C l 5
+
C H 2
蓝色
紫红
+
C H 2
-
R C O OS b C l 5
（ BP（ 1998））
V i t AV i t A H C l 去水
△
无水乙醇 ? ???? ????? ??
λmax为 326nm
一个吸收峰
UV法（二）
λmax为 350～ 390nm
三个吸收峰
去水 VitA（ VitA3）
C H 2
↓
VitA
USP 显色剂 磷钼酸
规定斑点颜色和 Rf值
BP 杂质对照品法
显色剂 三氯化锑
TLC法（三）
立体异构体
氧化产物及光照产物
合成中间体
去氢维生素 A（ VitA2）
去水维生素 A（ VitA3）
UV法（一）
含量测定三、
三点校正法
1,条件：
（ 1）杂质的吸收在 310~340nm波
长范围内呈一条直线，且随波
长的增大吸收度减小；
（ 2）物质对光的吸收具有加和性。
2,波长的选择：
（ 1） ?1
VitA的 ?max（ 328nm）
（ 2） ?2 ?3
分别在 ?1的两侧各选一点
测定对象 VitA醋酸酯
328340316328 ???? ???
第一法 等波长差法
? ? ? ?340316328328 2523 AAA.A ???校正
第二法 等吸收度法 (皂化法 )
测定对象 VitA醇
3217
6
??? AAA ??
? ? 334310325325 260455528156 A.A.A.A ???校正
3.测定法
（ 1）基本步骤,
?第一步 A选择
选择依据：
所选 A值中杂质的干扰已基本消除
注意：
?
? C 为混合样品的浓度
第二步 求
)(%cm1 样?
l( % )C
A%
)(cm1 ??? 样
)()( % cm1% cm1 纯样 ???
第三步 求效价
换算因数）效价（ 样样 ?? % )(cm1)( Eg/IU
换算因数由纯品计算而得：
%
)(cm1
E
g/IU
纯
）效价（
换算因数＝
醋酸酯维生素 Ag344.0IU1 ??
2 9 0 7 0 0 0
g3 4 4.0
g101
g/IU
6
?
?
??
?）效价（
1530
2907000
E
g/IU
%
)(cm1
?
纯
）效价（
换算因数＝
1 9 0 0?
醇维生素 Ag300.0IU1 ??
3 3 3 0 0 0 0
g3 0 0.0
g101
g/IU
6
?
?
??
?）效价（
1820
3330000
E
g/IU
%
)(cm1
?
纯
）效价（
换算因数＝
1 8 3 0?
第四步：求标示量％
％
标示量
平均丸重＝ 100g/IU ??
％
标示量
丸标示量％＝ 1 0 0/IU ?
％
标示量
平均丸重换算因数
10 0C
A
?
??
?
? 方法：
（ 2） 第一法 维生素 A醋酸酯
iAnm360340328316300
ml/IU159S
处测、、、、分别于
溶液～
环己烷
???? ??
? 判断 是否在 326～ 329nm之间
m ax?
m ax? 在 326～ 329nm之间
改用第二法
是 否
? 求算
并与规定值比较
328i A/A
??
??
??
??
??
29 9.0
A
A
81 1.0
A
A
000 0.1
A
A
90 7.0
A
A
55 5.0
A
A
3 2 8
3 6 0
3 2 8
3 4 0
3 2 8
3 2 8
3 2 8
3 1 6
3 2 8
3 0 0
规定值 差值328i A/A
? 判断差值是否超过规定值的 02.0?
有一个以上
超过 02.0?
无超过 02.0?
? 计算 A328（校正） ? 用 A328计算
%1 0 0
A
AA
f
3 2 8
3 2 8)(3 2 8
?
?
?
校正
? ? ? ?340316328328 2523 AAA.A ???校正
0 3%－ 15% － 3%
第二法
? ?校正328A 3 2 8A
第二法
VitAD胶丸中 VitA的含量测定
精密称取本品 (规格 10000VitAIU/丸 )
装量差异项下（平均装量 0.08262g/丸）
的内容物 0.2399g 至 250ml量瓶中，用环
己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取 2.0ml，
置另一 20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻
度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大
吸收波长为 328nm，并在下列波长处测
得吸收度为
A300, 0.354
A316, 0.561
A328, 0.628
A340, 0.523
A360, 0.216
A300 /A328, 0.555
A316/A328, 0.907
A328/A328, 1.000
A340/A328, 0.811
A360/A328, 0.299
求本品中维生素 A的含量？
A300 /A328, 0.564
A316/A328, 0.893
A328/A328, 1.000
A340/A328, 0.833
A360/A328, 0.344
0.555
0.907
1.000
0.811
0.299
+ 0.01
－ 0.01
0
+ 0.02
+ 0.04
? ? ? ?
? ?
6050
5230561062802523
2523 340316328328
.
....
AAA.A
?
????
???校正
－
－
－
－
－
=
=
=
=
=
%)3~%15(%7.3
%1 0 0
A
AA
f
3 2 8
3 2 8)(3 2 8
?????
?
?
?
校正
? ?
%0.99
%100
10000
08262.0
100
20
1
250
2
2399.0
1900605.0
%100
)ml100/g(C
1900A
%
328
?
??
???
?
?
??
?
?
标示量
平均丸重
标示量
校正
适用于维生素 A醇
（等吸收度法）
第一法无法消除杂质干扰时用此法
[ 皂化法,6/7A法 ]
（ 3）第二法
i
/K O H
Anm334
325310300ml/IU159
V i t AV i t A
S
处测
、、、于～稀释至溶解
异丙醇除去植物油的干扰
甘油和脂肪酸盐植物油
醇醋酸酯
皂化液
挥干乙醚乙醚提取
乙醇
??
???? ?????? ??
?
?
?
?
?
?
?
?
???? ??
水溶性
脂溶性
? 判断 ?max是否在 323～ 327nm之间
取未皂化样品
采用色谱法纯
化后再测定
? 计算
325
300
A
A
是 否
? 判断 A300 /A325 是否大于 0.73
是 否
取未皂化样品
采用色谱法纯
化后再测定
? 计算 A325(校正 )
%1 0 0
A
AA
f
3 2 5
3 2 5)(3 2 5
?
?
?
校正
? ? 334310325325 260455528156 A.A.A.A ???校正
0 3%－ 3%
? ?校正325A 325
A ? ?校正325A
三氯化锑比色法（二）
蓝色?? 3S b C lV i t A
优点 简便 快速
λmax 618nm～ 620nm
标准曲线法
??? ?? S b O C lS b C l OH3 2
缺点
呈色不稳定 （ 5 ~ 10s内）
水分干扰
与标准曲线温差 ≤1℃
专属性差
三氯化锑有腐蚀性
苯并－二氢吡喃醇
第三节 维生素 E
O
H O
O
R 1
H O
R 2
C H 3
名 称 R1 R2 相对活性
α-生育酚
β-生育酚
γ -生育酚
δ -生育酚
CH3
CH3
H
H
CH3
H
CH3
H
1.0
0.5
0.2
0.1
* **
生物效价
右旋体, 消旋体 = 1.4, 10
（天然品） （合成品）
C H 3
C O
O
C H 3
C H 3
C H 3 C H 3 C H 3
C H 3
H 3 C
H 3 C
O
dl－ α－ 生育酚醋酸酯
结构与性质一、
苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链
1、易溶于有机溶剂，不溶于水
2,UV
3、酯键 易水解
?? ??
???? ??
??
]O[
o r O HH
V i t E
醌型化合物
生育酚△
?? ??
??? ??
]O[
H N O 3
V i t E
生育红
生育酚75℃ 15′
（一） 硝酸反应
橙红色
鉴别二、
O
O
C H 3
C 1 6 H 3 3
H 3 C
C H 3
O
（橙红色）生育红
C H 3
H O
O
C H 3
C 1 6 H 3 3
C H 3
H 3 C
生育酚
HNO3
强氧化剂
取本品约 30mg，加无水
乙醇 10ml溶解后，加硝酸 2ml，
摇匀，在 75℃ 加热 15分钟，溶
液应显橙红色。
三氯化铁－联吡啶反应
红色
生育醌对
生育酚
联吡啶
??? ??
?
?? ???? ??
?
?
2
FeK O H
Fe
V i t E
3
△ [O]
（二）
O
O
H 3 C
C H 3
O H
C H 3
C 1 6 H 3 3
C H 3
C H 3
H O
O
C H 3
C 1 6 H 3 3
C H 3
H 3 C
生育酚
对 -生育醌
+3
F e[O]
弱氧化
剂
红色
+2
3
F e3+
+2
F e
N
N
N
N
= 41.0～ 45.5%
cmE
1
1
λmax = 284nm
λmin = 254nm
0.01%无水乙醇中
UV法（三）
维生素 EUV图
薄层板 硅胶 G
展开剂 环己烷 -乙醚（ 4, 1）
显色剂 硫酸（ 105℃ 5′）
VitE Rf = 0.7
TLC法（四）
游离生育酚
硫酸铈滴定液（ 0.01mol/L）
二苯胺（亮黄 →灰紫）
生育醌对生育酚 ???? ?? 34 22 CeCe
利用游离生育酚的还原性，
将硫酸铈还原成硫酸亚铈
检查三、
原理（一）
试剂（二）
n
CM
T ?
（ M生育酚 = 430.8）
）（ ml/mg154.2
2
8.43001.0
T ?
?
?
例 取本品 0.10g，加无水乙醇
5ml溶解后，加二苯胺试液 1滴，
用硫酸铈液（ 0.01mol/L）滴定，
消耗硫酸铈液（ 0.01mol/L）不
得过 1.0ml。
%100
W
TV
% ?
?
?限量
≤2.15％
%15.2
%1 0 0
1.0
0 0 2 1 5 4.00.1
%
?
?
?
?限量
限量（三）
药典规定
消耗硫酸铈液（ 0.01mol/L） ≤1.0ml
设：应消耗硫酸铈液 ≤ V ml
0.01× 1.0 ＝实际浓度 × V
硫酸铈实际浓度
）（
0.101.0
mlV
?
?
若硫酸铈液浓度不是 0.01000mol/L，
应重新计算硫酸铈的消耗量
例 Ce(SO4)2 = 0.01020mol/L
）（）（ ml.
.
..
mlV 980
010200
01010
?
?
?
四,含量测定
GC法（一）
GC特点1、
选择性好
灵敏度高
速度快
分离效能好
挥发性低、不
稳定、极性强
→衍生化易受
样品蒸气压限
制
载气 →N2
固定液 →硅酮（ OV-17）
担体 →硅藻土或高分子多孔小球
柱温 →265℃
检测器 →氢火焰离子化检测器 (FID)
内标 →正三十二烷
n ≥ 500
R≥2
VitE测定的色谱条件2、
内标法加校正因子
内标法
供试液（样品 +内标）
内标物
对照液（对照 +内标）
是样品中不存在的物质
与被测组分峰靠近
能与各组分完全分离
与被测组分的量接近
对
样
内
对
内
样
样
样
内
内
对
对
内
内
相对
W
W
A
A
A
A
W
A
W
A
W
A
W
A
f
?
?
?
??
校正因子：
1K
A
A
?
内
对
2K
A
A
?
内
样
%
W
W
K
K
%V i t E 1 0 0
1
2 ?
?
?
??
稀释度
稀释度
样
对
实际工作中的计算方法
例 内标液 取正三十二烷加正己烷溶解
并稀释成 1.0mg/ml溶液
对照液 精密称取 VitE对照品 0.2011g
置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内
标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取
1~3ul注入 GC仪，测定，计算
供试液 精密称取供试品 0.1998g置棕
色具塞锥形瓶中，精密加入内标液
10ml，密塞，振摇使溶解，取 1~3ul
注入 GC仪，测定，计算
对照液
? ? ? ? ? ??
? ? ? ? ? ??
内
对
A
A
供试液
805741
296513
?
?
内
样
A
A
0.373
0.368
%.%
.
.
.
.
%V i t E ????????
?????
?????
?
????
????
?
本品含 C31H52O3应为 96.0 ~ 102.0%
BP GC
内标 正三十二烷
R≥1.4
USP GC
内标 十六酸十六醇酯
R≥1.0
JP HPLC
外标 dl－ α－ 生育酚
R≥1.4
利用生育酚的易氧化性
还原型 氧化型
二苯胺（亮黄 →灰紫）
生育醌—对生育酚
溶解
）（
无水乙醇
???? ???
??? ?????? ??
??
??
SOCe
SOH
V i t E △
原理1、
铈量法（二）
指示剂2、
.S10
25 滴
水乙醇 ?
防止 Ce(SO4)2的水解
减慢生育酚被 O2氧化速度
C,酸性条件
Ce(SO4)2易溶于水
生育酚易溶于醇
B、溶剂
分子量较大，反应慢
易被 O2氧化
A、反应速度
H2SO4
讨论3、
%10 0
01.0
10 0
25
W
C00 23 6.0V
%10 0
W
FTV
%
?
??
??
?
?
??
?
实际
含量
）（ ml/mg36.2
2
47201.0
T ?
?
?
含量计算4,MVitE = 472
样品 → dl－ α－ 生育酚
固定相 →十八烷基硅烷键合硅胶
流动相 →甲醇 -水（ 49, 1）
检测波长 →292nm
R＞ 2.6
RSD≤0.8%
对
样
对生育酚 H
H
WW ??
JP - RP - HPLC法（外标法）（三）
测定对象 →血清中 VitA和 VitE
固定相 →十八烷基硅烷键合硅胶
流动相 →甲醇 -水（ 96, 4）
检测波长 → 8′前 330nm
8′后 292nm
样
对
对
样
样 稀释度
稀释度?
??
W
A
A
W
RP - HPLC法（外标法）（四）
N
S
C H 3
C H 2 C H 2 O H
N
NH 3 C N H 2
C H 2
+
氨基嘧啶环－ CH2－噻唑环 (季铵碱 )
第四节 维生素 B1
HCl
Cl-
（一） 溶解性
1、易溶于水
2、水溶液呈酸性
（二） UV 共轭双键
λmax = 246nm
结构与性质一、
嘧啶环 —— 伯氨
噻唑环 —— 季铵
1、可与酸成盐
2、与生物碱 ↓→↓
3、含量测定 —— 非水碱量法
? ? 蓝色荧光硫色素 正丁醇 ??? ????? ?? ? OOH
（三） 硫色素反应
（四） 碱性
荧光消失蓝色荧光
硫色素
正丁醇）（
环合
?? ??
??? ??????? ??
?? ????? ????? ??
?
?
H
CNFeK
OHN a O H
V i t B
63
2
1
]O[
?? ?? ?OH
ChP
鉴别试验二、
（一） 硫色素反应
C H 2
N
NH 3 C N H 2
C H 3N
N a S
C 2 H 4 O H
O
N
NH 3 C N H 2
H C l
N
S
C H 3
C 2 H 4 O H
C H 2
N a O H
N
NH 3 C N
N
N a S
C H 3
C 2 H 4 O H
-H 2 O
硫色素
S
C H 3
C 2 H 4 O H
N
NH 3 C N
N
H
?? ?? 环合
N
NH 3 C N
N
S
C H 3
C 2 H 4 O H
?? ?? ? H2
＋ 2H
VitB1
? ?4242 H g IH]B[H g IK ????? ?? 淡黄H+
? ?2KII IHI]B[2 ?????? ?? ? 红色H+
白色
硅钨酸 ???? ?? H+ ? ?
OH4WO12
OHS i O]B[
23
222
??
?
白色扇形
苦酮酸 ???? ?? H+
（二） 沉淀反应
? ? ???? ????? ?? ?
? P b SNa SV i t B
AcPbN a O H
?
????? ?????? ?? ??? ? OHNHA g N O A g C l 白
3H N O ??? ??
?H N O
蓝淀粉试纸 ????? ?????? ?? ??? KIM n O Cl
?H?
S元素反应
Cl-反应
（三） 其他反应
三,含量测定
? ?
? ? ???
?
?
?????? ??
????
? H C l OC l OB
H C l OH C lClB
AcHg ）（
喹那啶红－亚甲蓝
（紫红 →天蓝）
（一） 非水溶液滴定法
? ?ml/mg.
..
n
Mc
T
8616
2
273 3 710
?
?
?
?
?
? ?
%
W
FTVV
% ? ? ??
???
? 空样含量
UV法（二）
片剂、注射剂
= 421%cmE 11
（每片）相当于标示量的 %=
%
WE
A
%
cm
100
1
10011
??
?
?
? 标示量
平均片重
稀释度
A = ECL
规格
g/片
g/100ml
稀释度
稀释倍数 1?g
ChP
（每 ml）相当于标示量的 %=
%
VE
A
%
cm
100
11
10011
??
?
?
? 标示量稀释度
规格
g/mlml
准确度高
灵敏度低
操作繁琐
设备简单
（三） 硅钨酸重量法
重量法特点1、
OHH C l
OHWOOHS i OOSC l NHC
OHWOS i OH C lOSC l NHC
H
?
??????????
????????
???
????????
?? ???????????
?
白
）（）（
原理2、
1 9 3 90
223 4 7 9
2733722
1,
.
.
M
M Vi t B
?
?
?
?
?
沉淀
换算因数
????? ??? ??? 硅钨酸）（硅钨酸 V i t BV i t B
2× 337.27 3479.22
取本品约 50mg，精密称定，加水
50ml溶解后，加盐酸 2ml，煮沸，立
即滴加硅钨酸试液 4ml，继续煮沸 2分
钟，用 80℃ 恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，
沉淀先用煮沸的盐酸溶液（ 1→20）
20ml分次洗涤，再用水 10ml洗涤 1次，
最后用丙酮洗涤 2次，每次 5ml，在
80℃ 干燥至恒重，精密称定，所得重
量与 0.1939相乘，即得
测定方法3、
例 精密称取本品 0.0519g，加水 50
ml溶解，加盐酸 2ml煮沸，立即滴加
硅钨酸试液 4 ml，继续煮沸 2分钟，用
80℃ 恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀
先用煮沸的盐酸溶液（ 1→20） 20 ml
分次洗涤，再用水 10ml 洗涤 1次，后
用丙酮洗涤 2次，每次 5ml。在 80℃ 干
燥至恒重，称得沉淀重量为 0.2557g。
求本品的含量按干燥品计算为多少？
(本品干燥失重项下测定结果为 3.73%)
%
%W
.W
%V i t B 1 0 0
1
1 9 3 90
1 ?
??
?
?
）水分（样
沉淀
%.
%
%..
..
%V i t B
299
100
733105190
1939025570
1
?
?
??
?
?
）（
A,取样量 ± 50mg 提高灵敏度
B,80℃ 保持 4个 H2O
C,HCl 增大沉淀颗粒
D,硅钨酸, VitB1 = 8, 1
使沉淀完全
E,硅钨酸 边搅拌边缓慢加入
增大沉淀颗粒
实验条件4、
荧光
硫色素
异丁醇
铁氰化钾
??? ??
????? ??
?
V i t B
NaOH
（四） 硫色素荧光法
原理1、
激发波长 365nm
发射波长 435nm
方法与计算2、
+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇
+ NaOH + 异丁醇
+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇
+ NaOH + 异丁醇
S
d
A
b
%
W
W
dS
bA
%V i t B 1 0 01 ?
?
?
?
?
?
?
稀释度
稀释度
样
对
对照液
供试液
特点3、
（ 1）灵敏度高，线性范围宽
（ 2）代谢产物不干扰，适用于
体液分析
第五节 维生素 C
6
5
4
3 2
1
O
O HH O
O
C O HH
C H
2
O H
L－抗坏血酸
1、易溶于水
2、水溶液呈酸性
结构与性质一、
（一） 溶解性
O
二烯醇结构 二酮基结构
二烯醇结构（二） 强还原性
O HO H
CC
OO
C C
C H 2 O H
OO
O
O
C O HH
C H
2
O H
C HH O
C H O H
C O
C O
C O O N a H
H + O H -
有活性 有活性 无活性
O H
O
O
C O HH
C H 2 O H
H O
[ O ]
显色
糠醛衍生物
糠醛 酚类脱水
?? ???? ???? ??
?H△
糖类的显色反应
蓝色糠醛 吡咯脱水 ?? ???? ???? ??
?H
Vi tC 50℃
结构与糖类相似（三） 具糖的性质
O
O HH O
O
C O HH
C H
2
O H
1
23
4
5
6
C3－ OH的
pKa = 4.17
C2－ OH的
pKa = 11.57
酸性（四） 一元酸
O
O HH O
O
C O HH
C H
2
O H
1
23
4
5
6
L(+)－抗坏血酸
活性最强
手性 C（ C4,C5）（五） 光学活性
*
*
与碱反应
单钠盐??? ?? 32 CONa
酮酸盐水解 ?? ????? ?? N a O H
（六） 水解反应
O H
O
O
C O HH
C H 2 O H
H O
O H
O
O
C O HH
C H 2 O H
N a O
C O O N a
OC
OC
C H O H
H O C H
C H
2
O H
N a 2 C O 3
??? ?? N a O H
nm
nm
m a x
OH
m a x
H
?????? ??
?????? ??
?
?
（七） UV特征
去氢抗坏血酸?? ?? ]O[V i t C
与氧化剂的反应（一）
鉴别试验二、
O H
O
O
C O HH
C H 2 O H
H O
C H 2 O H
OO
O
O
C O HH?? ?? ]O[
（银镜）黑??? ??? AgA g NO V i t C
1、与 AgNO3反应
2、与 2,6 - 二氯靛酚反应 (ChP2000)
无色二氯靛酚,?? ??? V i t C62
氧化型
玫瑰红色
?H
还原型
蓝色
?OHOHˉ
(ChP2000)
N
C l
H O
C l
O
N
C l
H O
C l
O H
H
（ 玫瑰色）
（无色）
红碱性酒石酸铜 ??? ?? ? OCu
V i t C
3、与碱性酒石酸铜反应 USP
4、与 KMnO4反应
??? ?? ?? MnK M n O V i t C
糖类的反应（二）
蓝色
糠醛戊糖
脱水三氯醋酸
?
?? ?????? ??V i t C或盐酸
50℃ 吡咯
USP
O
O
C O HH
C H 2 O H
H O O H
C H 2 O H
O
O
C O HH
HH O O
C C
O H
O O
C H O H
3
C H 2 O H
H 2 O
- C O 2
- H 2 O
O
C H
N
（蓝色）
O C H O
(糠醛 )
O
C H O H 3 C H 2 O HCH （戊糖）
N
N
H
50℃
(吡咯 )
UV（三） BP
0.01mol/L HCl
nmm ax 2 43??
58554511 ~E %cm ?
???? ??? ? IIV i t C H 去氢抗坏血酸
2
指示剂 淀粉指示液
原理1、
碘量法（一）
含量测定三、
O
O
C O HH
O O
C H 2 O H
H I2+
O H
O
O
C O HH
C H 2 O H
H O
H+
?? I
取本品约 0.2g，精密称定，加新
沸过的冷水 100ml与稀醋酸 10ml使溶
解，加淀粉指示液 1ml，立即用碘滴
定液（ 0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝
色，在 30秒内不褪。每 1ml碘滴定液
(0.1mol/L)相当于 8.806mg的 C6H8O6
方法2、
）（ ml/mg.
..
n
MC
T
8 0 68
2
131 7 610
?
?
?
?
?
???? ??? ? IIV i t C H 去氢抗坏血酸
2
（ 1）酸性环境 d, HCl
（ 2） 新沸冷 H2O
减慢 VitC被 O2氧化速度
讨论4、
（ 3）立即滴定
赶走水中 O2
减少 O2的干扰
（ 4）附加剂干扰的排除
片剂 —— 滑石粉 —— 过滤
注射剂 —— 抗氧剂 —— 丙酮
甲醛
Na2SO3 NaHSO3
Na2S2O3 Na2S2O5
CH HO
O a S 3a S O + H2 N H ON 2 2 5
2
H
O N
H C
O
S 3 a
33 C O C HCH
3
3
CH
CH
C
NaSO 3
OH
2,6 - 二氯靛酚钠滴定法法（二）
酚亚胺二氯靛酚,?? ????? V i t C
USP JP
原理1、
空
样二氯靛酚液
空白
样品
V
VH AcH P O
????? ??????? ??
?3
自身指示终点法
蓝色
玫瑰红
?? ??
?? ??
?
?
OH
H
无色还原 ?? ??
方法2、
（ 2）快速滴定 2min内
（ 1）酸性环境 HPO3-HAc
稳定 VitC
防止其他还原性物质干扰
（ 3）剩余比色测定
AV i t C 测二氯靛酚 ?? ??
（定量过量） （测剩余染料）
讨论3、
（ 4）缺点
需经常标定
贮存 ≤一周
不稳定
干扰多 氧化力较强
HPLC法（三）
1,HPLC的优点
灵敏度高
选择性高
分离分析同步
微量分析
干扰少
快速
2,HPLC法分离 VitC常用方法及测
定对象
对象 制剂、生物样品、果汁
方法 离子交换色谱法
离子对色谱法
分配色谱法（正、反相）
血、尿、组织、细胞等
例 多种维生素片中 VitA,VitB1、
VitB2, VitB6,烟酰胺,VitC、
VitE的含量测定
色谱柱 ODS
流动相 A、水 -甲醇（ 4, 1）
B、甲醇
（梯度洗脱）
抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠
水溶性维生素
离子对色谱法（樟脑磺酸）
内标法 + 校正因子
内标物 —— 苯酚
脂溶性维生素 外标法
108,在三氯醋酸或盐酸存在下, 经
水解, 脱羧, 失水后, 加入吡
咯即产生蓝色产物的药物应是
A,氯氮卓
B,维生素 A
C,普鲁卡因
D,盐酸吗啡
E,维生素 C
99,88．中国药典（ 2000年版）采用
以下何法测定维生素 E含量
A,酸碱滴定法
B,氧化还原法
C,紫外分光光度法
D,气相色谱法
E,非水滴定法
98,79．中国药典（ 2000年版）采用
气相色谱法测定维生素 E含
量，内标物质为
A,正二十二烷
B,正二十六烷
C,正三十烷
D,正三十二烷
E,正三十六烷
99,77,下列药物的碱性溶液，加入
铁氰化钾后，再加正丁醇，
显蓝色荧光的是
A,维生素 A
B,维生素 B1
C,维生素 C
D,维生素 D
E,维生素 E
97,77．既具有酸性又具有还原性的
药物是
A,维生素 A
B,咖啡因
C,苯巴比妥
D,氯丙嗪
E,维生素 C
99m,132.维生素 C的鉴别反应，常采
用的试剂有
A,碱性酒石酸铜
B,硝酸银
C,碘化铋钾
D,乙酰丙酮
E,三氯醋酸和吡咯
99m,84,测定维生素 C注射液的含量
时，在操作过程中要加入
丙酮，这是为了
A,保持维生素 C的稳定
B,增加维生素 C的溶解度
C,使反应完全
D,加快反应速度
E,消除注射液中抗氧剂的干扰
98,85,能发生硫色素特征反应的药物
是
A,维生素 A
B,维生素 B1
C,维生素 C
D,维生素 E
E,烟酸
97,81．使用碘量法测定维生素 C的
含量,已知维生素 C的分子量
为 176.13，每 1ml碘滴定液
(0.1mol/L) 相当于维生素 C
的量为
A,17.61mg B,8.806mg
C,176.1mg D,88.06mg
E,1.761mg
97,[121— 125]（ 99,[121— 125]）
可发生以下反应或现象的药物为
A.维生素 B1 B.维生素 C
C.两者均能 D.两者均不能
121.与碘化汞钾生成黄色沉淀
122.麦芽酚反应
123.在乙醚中不溶
124.与 2,6-二氯靛酚反应使颜色消失
125.硫色素反应
A
D
C
B
A
115．维生素 A的鉴别试验为
A,三氯化铁反应
B,硫酸锑反应
C,2,6-二氯靛酚反应
D,三氯化锑反应
E,间二硝基苯的碱性乙醇液反
应
77．中国药典（ 2000年版）规定维生
素 A的测定采用紫外分光光度法
（三点校正法），此法又分为
A．等波长差法
B．等吸收度法
C,6/7 A法
D．差示分光法
E．双波长法
78．维生素 E的鉴别试验有
A．硫色素反应
B．硝酸氧化呈色反应
C．硫酸 -乙醇呈色反应
D．碱性水解后加三氯化铁乙醇
液与 2,2-联吡啶乙醇液呈色反
应
E,Marquis反应
80,下面哪些描述适用于维生素 A
A,分子具有长二烯醇侧链，易被氧化
B,具有较长的全反式共轭多烯结构
C.含酯键，经水解后产生苯并二氢吡
喃衍生物，易被氧化
D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳
定兰色，很快转变为紫红色
E.样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加
热后，呈橙红色
维生素 A与 反应即显
蓝色，渐变成紫红色；反应需在
条件下进行。
（ ） 维生素 A分子中由于具有共
轭多烯侧链，因而其性质很稳定，
不易被氧化变质。
三氯化锑
无水
×
维生素 E在酸性或碱性溶液中加热
可水解生成游离, 当有氧或
其他氧化剂存在时, 则进一步被氧化
成醌型化合物, 尤其在碱性下更易发
生 。
生育酚
维生素 B1 的噻唑环在 介质
中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合
环合，然后经 等氧化剂氧
化生成具有荧光的,加 荧
光消失，加 荧光又显出；此反应
称为 反应。
碱性
铁氰化钾
硫色素 酸
碱
硫色素
维生素 C是 元弱酸，具有强
性，易被氧化剂氧化，常用
作其它制剂的 剂。
一
还原
抗氧
维生素 E中游离生育酚的检查时
规定消耗硫酸铈滴定液 （ 0.01mol/L）
不得过 1.0ml,现硫酸铈滴定液的实
际浓度为 0.01053mol/L,应不得超过
多少 ml？
A,0.95 B,0.97
C,0.99 D,0.92
E,1.05
中国药典维生素 C的含量测定
取本品约 0.2g,精密称定, 加 新
沸过的冷水 100ml与 稀醋酸 10ml使溶
解, 加淀粉指示液 1ml,立即 用碘滴
定液 (0.1mol/L)滴定, 至溶液显蓝色,
在 30秒内不褪 。 每 1ml碘滴定液
(0.1mol/L)相当于 8.806mg的 C6H8O6。
已知：取样量为 0.2084g,消耗碘滴
定液 （ 0.09981mol/L） 22.75ml。
要求：（ 1）解释划线部分
（ 2）计算本品的含量是否符合
规定
（规定本品含 C6H8O6应不低于 99.0%）
%.
%
..
...
%
W
FTV
%V i t C
995
100
1020840
09981000880607522
100
?
?
?
??
?
?
??
?
VitB1片 UV法含量测定 取本品 20片，
精密称定，研细，精密称取适量（约相
当于 VitB1 25mg），置 100ml量瓶中，加
盐酸溶液 (9→1000)约 70ml，振摇 15分钟，
加盐酸溶液 (9→1000)稀释至刻度。用干
燥滤纸滤过，精密量取续滤液 5.0ml，置
另一 100ml量瓶中，再加盐酸溶液
(9→1000)稀释至刻度，摇匀，在 246nm
处测定吸收度，按 C12H17ClN4OS·HCl的
吸收系数（ ）为 421计算，即得。%
cmE 11
已知 20片重 = 1.4070g A246=0.461
取样量 = 0.1551g
规格 = 10mg/片
求 本品含量是否符合药典规定？
（应相当于标示量的 90.0～ 110.0%)
%.
%
.
.
.
.
%
WE
A
399
100
010
20
4 0 7 01
100
1
100
5
1 5 5 10
1
100421
4610
100
1
100
?
??
??
?
?
???
?
?
? 标示量
平均片重
稀释度
维生素类药物的
分析
第一节 概述
维生素：
是维持人体正常代谢机能所
必需的 微量营养物资。
人体不能合成维生素。
VitA,D2,D3,E,K1 等脂溶性
水溶性 VitB族 (B1,B2,B6,B12)
VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺
VitM VitPP
-H 维生素 A醇
-COCH3 维生素 A醋酸酯
-COC15H31 维生素 A棕榈酸酯
R,
第二节 维生素 A
为一个具有共轭多烯侧链的
环己烯
（一）
结构与性质一、
? 具有 UV吸收
? 存在多种立体异构化合物
维生素 A 325.5 100%
新维生素 Aa 328 75%
新维生素 Ab 320.5 24%
新维生素 Ac 310.5 15%
异维生素 Aa 323 21%
异维生素 Ab 324 24%
m a x?
相对生物效价
VitA2
VitA3
? 易发生脱氢、脱水、聚合反应
鲸醇
酸
醛
环氧化物
、氧化剂紫外线、
V i t A
V i t A
V i t A
]O[
O 2
?? ???
???????? ??
? △ 或有金属离子存在时氧化 ↑
共轭多烯侧链 易被氧化（二）
环氧化物
VitA醛
VitA酸
（三） 与三氯化锑发生呈色反应
紫红蓝色 ???? ?? 3S b C lV i t ACHCl
3
溶解性（四）
不溶于水
易溶于有机溶剂和植物油等
三氯化锑反应（一）
条件 无水无醇
紫红蓝色 ???? ?? 3S b C lV i t ACHCl
3
鉴别二、
-
R C O OS b C l 5
+
C H 2
蓝色
紫红
+
C H 2
-
R C O OS b C l 5
（ BP（ 1998））
V i t AV i t A H C l 去水
△
无水乙醇 ? ???? ????? ??
λmax为 326nm
一个吸收峰
UV法（二）
λmax为 350～ 390nm
三个吸收峰
去水 VitA（ VitA3）
C H 2
↓
VitA
USP 显色剂 磷钼酸
规定斑点颜色和 Rf值
BP 杂质对照品法
显色剂 三氯化锑
TLC法（三）
立体异构体
氧化产物及光照产物
合成中间体
去氢维生素 A（ VitA2）
去水维生素 A（ VitA3）
UV法（一）
含量测定三、
三点校正法
1,条件：
（ 1）杂质的吸收在 310~340nm波
长范围内呈一条直线，且随波
长的增大吸收度减小；
（ 2）物质对光的吸收具有加和性。
2,波长的选择：
（ 1） ?1
VitA的 ?max（ 328nm）
（ 2） ?2 ?3
分别在 ?1的两侧各选一点
测定对象 VitA醋酸酯
328340316328 ???? ???
第一法 等波长差法
? ? ? ?340316328328 2523 AAA.A ???校正
第二法 等吸收度法 (皂化法 )
测定对象 VitA醇
3217
6
??? AAA ??
? ? 334310325325 260455528156 A.A.A.A ???校正
3.测定法
（ 1）基本步骤,
?第一步 A选择
选择依据：
所选 A值中杂质的干扰已基本消除
注意：
?
? C 为混合样品的浓度
第二步 求
)(%cm1 样?
l( % )C
A%
)(cm1 ??? 样
)()( % cm1% cm1 纯样 ???
第三步 求效价
换算因数）效价（ 样样 ?? % )(cm1)( Eg/IU
换算因数由纯品计算而得：
%
)(cm1
E
g/IU
纯
）效价（
换算因数＝
醋酸酯维生素 Ag344.0IU1 ??
2 9 0 7 0 0 0
g3 4 4.0
g101
g/IU
6
?
?
??
?）效价（
1530
2907000
E
g/IU
%
)(cm1
?
纯
）效价（
换算因数＝
1 9 0 0?
醇维生素 Ag300.0IU1 ??
3 3 3 0 0 0 0
g3 0 0.0
g101
g/IU
6
?
?
??
?）效价（
1820
3330000
E
g/IU
%
)(cm1
?
纯
）效价（
换算因数＝
1 8 3 0?
第四步：求标示量％
％
标示量
平均丸重＝ 100g/IU ??
％
标示量
丸标示量％＝ 1 0 0/IU ?
％
标示量
平均丸重换算因数
10 0C
A
?
??
?
? 方法：
（ 2） 第一法 维生素 A醋酸酯
iAnm360340328316300
ml/IU159S
处测、、、、分别于
溶液～
环己烷
???? ??
? 判断 是否在 326～ 329nm之间
m ax?
m ax? 在 326～ 329nm之间
改用第二法
是 否
? 求算
并与规定值比较
328i A/A
??
??
??
??
??
29 9.0
A
A
81 1.0
A
A
000 0.1
A
A
90 7.0
A
A
55 5.0
A
A
3 2 8
3 6 0
3 2 8
3 4 0
3 2 8
3 2 8
3 2 8
3 1 6
3 2 8
3 0 0
规定值 差值328i A/A
? 判断差值是否超过规定值的 02.0?
有一个以上
超过 02.0?
无超过 02.0?
? 计算 A328（校正） ? 用 A328计算
%1 0 0
A
AA
f
3 2 8
3 2 8)(3 2 8
?
?
?
校正
? ? ? ?340316328328 2523 AAA.A ???校正
0 3%－ 15% － 3%
第二法
? ?校正328A 3 2 8A
第二法
VitAD胶丸中 VitA的含量测定
精密称取本品 (规格 10000VitAIU/丸 )
装量差异项下（平均装量 0.08262g/丸）
的内容物 0.2399g 至 250ml量瓶中，用环
己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取 2.0ml，
置另一 20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻
度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大
吸收波长为 328nm，并在下列波长处测
得吸收度为
A300, 0.354
A316, 0.561
A328, 0.628
A340, 0.523
A360, 0.216
A300 /A328, 0.555
A316/A328, 0.907
A328/A328, 1.000
A340/A328, 0.811
A360/A328, 0.299
求本品中维生素 A的含量？
A300 /A328, 0.564
A316/A328, 0.893
A328/A328, 1.000
A340/A328, 0.833
A360/A328, 0.344
0.555
0.907
1.000
0.811
0.299
+ 0.01
－ 0.01
0
+ 0.02
+ 0.04
? ? ? ?
? ?
6050
5230561062802523
2523 340316328328
.
....
AAA.A
?
????
???校正
－
－
－
－
－
=
=
=
=
=
%)3~%15(%7.3
%1 0 0
A
AA
f
3 2 8
3 2 8)(3 2 8
?????
?
?
?
校正
? ?
%0.99
%100
10000
08262.0
100
20
1
250
2
2399.0
1900605.0
%100
)ml100/g(C
1900A
%
328
?
??
???
?
?
??
?
?
标示量
平均丸重
标示量
校正
适用于维生素 A醇
（等吸收度法）
第一法无法消除杂质干扰时用此法
[ 皂化法,6/7A法 ]
（ 3）第二法
i
/K O H
Anm334
325310300ml/IU159
V i t AV i t A
S
处测
、、、于～稀释至溶解
异丙醇除去植物油的干扰
甘油和脂肪酸盐植物油
醇醋酸酯
皂化液
挥干乙醚乙醚提取
乙醇
??
???? ?????? ??
?
?
?
?
?
?
?
?
???? ??
水溶性
脂溶性
? 判断 ?max是否在 323～ 327nm之间
取未皂化样品
采用色谱法纯
化后再测定
? 计算
325
300
A
A
是 否
? 判断 A300 /A325 是否大于 0.73
是 否
取未皂化样品
采用色谱法纯
化后再测定
? 计算 A325(校正 )
%1 0 0
A
AA
f
3 2 5
3 2 5)(3 2 5
?
?
?
校正
? ? 334310325325 260455528156 A.A.A.A ???校正
0 3%－ 3%
? ?校正325A 325
A ? ?校正325A
三氯化锑比色法（二）
蓝色?? 3S b C lV i t A
优点 简便 快速
λmax 618nm～ 620nm
标准曲线法
??? ?? S b O C lS b C l OH3 2
缺点
呈色不稳定 （ 5 ~ 10s内）
水分干扰
与标准曲线温差 ≤1℃
专属性差
三氯化锑有腐蚀性
苯并－二氢吡喃醇
第三节 维生素 E
O
H O
O
R 1
H O
R 2
C H 3
名 称 R1 R2 相对活性
α-生育酚
β-生育酚
γ -生育酚
δ -生育酚
CH3
CH3
H
H
CH3
H
CH3
H
1.0
0.5
0.2
0.1
* **
生物效价
右旋体, 消旋体 = 1.4, 10
（天然品） （合成品）
C H 3
C O
O
C H 3
C H 3
C H 3 C H 3 C H 3
C H 3
H 3 C
H 3 C
O
dl－ α－ 生育酚醋酸酯
结构与性质一、
苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链
1、易溶于有机溶剂，不溶于水
2,UV
3、酯键 易水解
?? ??
???? ??
??
]O[
o r O HH
V i t E
醌型化合物
生育酚△
?? ??
??? ??
]O[
H N O 3
V i t E
生育红
生育酚75℃ 15′
（一） 硝酸反应
橙红色
鉴别二、
O
O
C H 3
C 1 6 H 3 3
H 3 C
C H 3
O
（橙红色）生育红
C H 3
H O
O
C H 3
C 1 6 H 3 3
C H 3
H 3 C
生育酚
HNO3
强氧化剂
取本品约 30mg，加无水
乙醇 10ml溶解后，加硝酸 2ml，
摇匀，在 75℃ 加热 15分钟，溶
液应显橙红色。
三氯化铁－联吡啶反应
红色
生育醌对
生育酚
联吡啶
??? ??
?
?? ???? ??
?
?
2
FeK O H
Fe
V i t E
3
△ [O]
（二）
O
O
H 3 C
C H 3
O H
C H 3
C 1 6 H 3 3
C H 3
C H 3
H O
O
C H 3
C 1 6 H 3 3
C H 3
H 3 C
生育酚
对 -生育醌
+3
F e[O]
弱氧化
剂
红色
+2
3
F e3+
+2
F e
N
N
N
N
= 41.0～ 45.5%
cmE
1
1
λmax = 284nm
λmin = 254nm
0.01%无水乙醇中
UV法（三）
维生素 EUV图
薄层板 硅胶 G
展开剂 环己烷 -乙醚（ 4, 1）
显色剂 硫酸（ 105℃ 5′）
VitE Rf = 0.7
TLC法（四）
游离生育酚
硫酸铈滴定液（ 0.01mol/L）
二苯胺（亮黄 →灰紫）
生育醌对生育酚 ???? ?? 34 22 CeCe
利用游离生育酚的还原性，
将硫酸铈还原成硫酸亚铈
检查三、
原理（一）
试剂（二）
n
CM
T ?
（ M生育酚 = 430.8）
）（ ml/mg154.2
2
8.43001.0
T ?
?
?
例 取本品 0.10g，加无水乙醇
5ml溶解后，加二苯胺试液 1滴，
用硫酸铈液（ 0.01mol/L）滴定，
消耗硫酸铈液（ 0.01mol/L）不
得过 1.0ml。
%100
W
TV
% ?
?
?限量
≤2.15％
%15.2
%1 0 0
1.0
0 0 2 1 5 4.00.1
%
?
?
?
?限量
限量（三）
药典规定
消耗硫酸铈液（ 0.01mol/L） ≤1.0ml
设：应消耗硫酸铈液 ≤ V ml
0.01× 1.0 ＝实际浓度 × V
硫酸铈实际浓度
）（
0.101.0
mlV
?
?
若硫酸铈液浓度不是 0.01000mol/L，
应重新计算硫酸铈的消耗量
例 Ce(SO4)2 = 0.01020mol/L
）（）（ ml.
.
..
mlV 980
010200
01010
?
?
?
四,含量测定
GC法（一）
GC特点1、
选择性好
灵敏度高
速度快
分离效能好
挥发性低、不
稳定、极性强
→衍生化易受
样品蒸气压限
制
载气 →N2
固定液 →硅酮（ OV-17）
担体 →硅藻土或高分子多孔小球
柱温 →265℃
检测器 →氢火焰离子化检测器 (FID)
内标 →正三十二烷
n ≥ 500
R≥2
VitE测定的色谱条件2、
内标法加校正因子
内标法
供试液（样品 +内标）
内标物
对照液（对照 +内标）
是样品中不存在的物质
与被测组分峰靠近
能与各组分完全分离
与被测组分的量接近
对
样
内
对
内
样
样
样
内
内
对
对
内
内
相对
W
W
A
A
A
A
W
A
W
A
W
A
W
A
f
?
?
?
??
校正因子：
1K
A
A
?
内
对
2K
A
A
?
内
样
%
W
W
K
K
%V i t E 1 0 0
1
2 ?
?
?
??
稀释度
稀释度
样
对
实际工作中的计算方法
例 内标液 取正三十二烷加正己烷溶解
并稀释成 1.0mg/ml溶液
对照液 精密称取 VitE对照品 0.2011g
置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内
标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取
1~3ul注入 GC仪，测定，计算
供试液 精密称取供试品 0.1998g置棕
色具塞锥形瓶中，精密加入内标液
10ml，密塞，振摇使溶解，取 1~3ul
注入 GC仪，测定，计算
对照液
? ? ? ? ? ??
? ? ? ? ? ??
内
对
A
A
供试液
805741
296513
?
?
内
样
A
A
0.373
0.368
%.%
.
.
.
.
%V i t E ????????
?????
?????
?
????
????
?
本品含 C31H52O3应为 96.0 ~ 102.0%
BP GC
内标 正三十二烷
R≥1.4
USP GC
内标 十六酸十六醇酯
R≥1.0
JP HPLC
外标 dl－ α－ 生育酚
R≥1.4
利用生育酚的易氧化性
还原型 氧化型
二苯胺（亮黄 →灰紫）
生育醌—对生育酚
溶解
）（
无水乙醇
???? ???
??? ?????? ??
??
??
SOCe
SOH
V i t E △
原理1、
铈量法（二）
指示剂2、
.S10
25 滴
水乙醇 ?
防止 Ce(SO4)2的水解
减慢生育酚被 O2氧化速度
C,酸性条件
Ce(SO4)2易溶于水
生育酚易溶于醇
B、溶剂
分子量较大，反应慢
易被 O2氧化
A、反应速度
H2SO4
讨论3、
%10 0
01.0
10 0
25
W
C00 23 6.0V
%10 0
W
FTV
%
?
??
??
?
?
??
?
实际
含量
）（ ml/mg36.2
2
47201.0
T ?
?
?
含量计算4,MVitE = 472
样品 → dl－ α－ 生育酚
固定相 →十八烷基硅烷键合硅胶
流动相 →甲醇 -水（ 49, 1）
检测波长 →292nm
R＞ 2.6
RSD≤0.8%
对
样
对生育酚 H
H
WW ??
JP - RP - HPLC法（外标法）（三）
测定对象 →血清中 VitA和 VitE
固定相 →十八烷基硅烷键合硅胶
流动相 →甲醇 -水（ 96, 4）
检测波长 → 8′前 330nm
8′后 292nm
样
对
对
样
样 稀释度
稀释度?
??
W
A
A
W
RP - HPLC法（外标法）（四）
N
S
C H 3
C H 2 C H 2 O H
N
NH 3 C N H 2
C H 2
+
氨基嘧啶环－ CH2－噻唑环 (季铵碱 )
第四节 维生素 B1
HCl
Cl-
（一） 溶解性
1、易溶于水
2、水溶液呈酸性
（二） UV 共轭双键
λmax = 246nm
结构与性质一、
嘧啶环 —— 伯氨
噻唑环 —— 季铵
1、可与酸成盐
2、与生物碱 ↓→↓
3、含量测定 —— 非水碱量法
? ? 蓝色荧光硫色素 正丁醇 ??? ????? ?? ? OOH
（三） 硫色素反应
（四） 碱性
荧光消失蓝色荧光
硫色素
正丁醇）（
环合
?? ??
??? ??????? ??
?? ????? ????? ??
?
?
H
CNFeK
OHN a O H
V i t B
63
2
1
]O[
?? ?? ?OH
ChP
鉴别试验二、
（一） 硫色素反应
C H 2
N
NH 3 C N H 2
C H 3N
N a S
C 2 H 4 O H
O
N
NH 3 C N H 2
H C l
N
S
C H 3
C 2 H 4 O H
C H 2
N a O H
N
NH 3 C N
N
N a S
C H 3
C 2 H 4 O H
-H 2 O
硫色素
S
C H 3
C 2 H 4 O H
N
NH 3 C N
N
H
?? ?? 环合
N
NH 3 C N
N
S
C H 3
C 2 H 4 O H
?? ?? ? H2
＋ 2H
VitB1
? ?4242 H g IH]B[H g IK ????? ?? 淡黄H+
? ?2KII IHI]B[2 ?????? ?? ? 红色H+
白色
硅钨酸 ???? ?? H+ ? ?
OH4WO12
OHS i O]B[
23
222
??
?
白色扇形
苦酮酸 ???? ?? H+
（二） 沉淀反应
? ? ???? ????? ?? ?
? P b SNa SV i t B
AcPbN a O H
?
????? ?????? ?? ??? ? OHNHA g N O A g C l 白
3H N O ??? ??
?H N O
蓝淀粉试纸 ????? ?????? ?? ??? KIM n O Cl
?H?
S元素反应
Cl-反应
（三） 其他反应
三,含量测定
? ?
? ? ???
?
?
?????? ??
????
? H C l OC l OB
H C l OH C lClB
AcHg ）（
喹那啶红－亚甲蓝
（紫红 →天蓝）
（一） 非水溶液滴定法
? ?ml/mg.
..
n
Mc
T
8616
2
273 3 710
?
?
?
?
?
? ?
%
W
FTVV
% ? ? ??
???
? 空样含量
UV法（二）
片剂、注射剂
= 421%cmE 11
（每片）相当于标示量的 %=
%
WE
A
%
cm
100
1
10011
??
?
?
? 标示量
平均片重
稀释度
A = ECL
规格
g/片
g/100ml
稀释度
稀释倍数 1?g
ChP
（每 ml）相当于标示量的 %=
%
VE
A
%
cm
100
11
10011
??
?
?
? 标示量稀释度
规格
g/mlml
准确度高
灵敏度低
操作繁琐
设备简单
（三） 硅钨酸重量法
重量法特点1、
OHH C l
OHWOOHS i OOSC l NHC
OHWOS i OH C lOSC l NHC
H
?
??????????
????????
???
????????
?? ???????????
?
白
）（）（
原理2、
1 9 3 90
223 4 7 9
2733722
1,
.
.
M
M Vi t B
?
?
?
?
?
沉淀
换算因数
????? ??? ??? 硅钨酸）（硅钨酸 V i t BV i t B
2× 337.27 3479.22
取本品约 50mg，精密称定，加水
50ml溶解后，加盐酸 2ml，煮沸，立
即滴加硅钨酸试液 4ml，继续煮沸 2分
钟，用 80℃ 恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，
沉淀先用煮沸的盐酸溶液（ 1→20）
20ml分次洗涤，再用水 10ml洗涤 1次，
最后用丙酮洗涤 2次，每次 5ml，在
80℃ 干燥至恒重，精密称定，所得重
量与 0.1939相乘，即得
测定方法3、
例 精密称取本品 0.0519g，加水 50
ml溶解，加盐酸 2ml煮沸，立即滴加
硅钨酸试液 4 ml，继续煮沸 2分钟，用
80℃ 恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀
先用煮沸的盐酸溶液（ 1→20） 20 ml
分次洗涤，再用水 10ml 洗涤 1次，后
用丙酮洗涤 2次，每次 5ml。在 80℃ 干
燥至恒重，称得沉淀重量为 0.2557g。
求本品的含量按干燥品计算为多少？
(本品干燥失重项下测定结果为 3.73%)
%
%W
.W
%V i t B 1 0 0
1
1 9 3 90
1 ?
??
?
?
）水分（样
沉淀
%.
%
%..
..
%V i t B
299
100
733105190
1939025570
1
?
?
??
?
?
）（
A,取样量 ± 50mg 提高灵敏度
B,80℃ 保持 4个 H2O
C,HCl 增大沉淀颗粒
D,硅钨酸, VitB1 = 8, 1
使沉淀完全
E,硅钨酸 边搅拌边缓慢加入
增大沉淀颗粒
实验条件4、
荧光
硫色素
异丁醇
铁氰化钾
??? ??
????? ??
?
V i t B
NaOH
（四） 硫色素荧光法
原理1、
激发波长 365nm
发射波长 435nm
方法与计算2、
+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇
+ NaOH + 异丁醇
+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇
+ NaOH + 异丁醇
S
d
A
b
%
W
W
dS
bA
%V i t B 1 0 01 ?
?
?
?
?
?
?
稀释度
稀释度
样
对
对照液
供试液
特点3、
（ 1）灵敏度高，线性范围宽
（ 2）代谢产物不干扰，适用于
体液分析
第五节 维生素 C
6
5
4
3 2
1
O
O HH O
O
C O HH
C H
2
O H
L－抗坏血酸
1、易溶于水
2、水溶液呈酸性
结构与性质一、
（一） 溶解性
O
二烯醇结构 二酮基结构
二烯醇结构（二） 强还原性
O HO H
CC
OO
C C
C H 2 O H
OO
O
O
C O HH
C H
2
O H
C HH O
C H O H
C O
C O
C O O N a H
H + O H -
有活性 有活性 无活性
O H
O
O
C O HH
C H 2 O H
H O
[ O ]
显色
糠醛衍生物
糠醛 酚类脱水
?? ???? ???? ??
?H△
糖类的显色反应
蓝色糠醛 吡咯脱水 ?? ???? ???? ??
?H
Vi tC 50℃
结构与糖类相似（三） 具糖的性质
O
O HH O
O
C O HH
C H
2
O H
1
23
4
5
6
C3－ OH的
pKa = 4.17
C2－ OH的
pKa = 11.57
酸性（四） 一元酸
O
O HH O
O
C O HH
C H
2
O H
1
23
4
5
6
L(+)－抗坏血酸
活性最强
手性 C（ C4,C5）（五） 光学活性
*
*
与碱反应
单钠盐??? ?? 32 CONa
酮酸盐水解 ?? ????? ?? N a O H
（六） 水解反应
O H
O
O
C O HH
C H 2 O H
H O
O H
O
O
C O HH
C H 2 O H
N a O
C O O N a
OC
OC
C H O H
H O C H
C H
2
O H
N a 2 C O 3
??? ?? N a O H
nm
nm
m a x
OH
m a x
H
?????? ??
?????? ??
?
?
（七） UV特征
去氢抗坏血酸?? ?? ]O[V i t C
与氧化剂的反应（一）
鉴别试验二、
O H
O
O
C O HH
C H 2 O H
H O
C H 2 O H
OO
O
O
C O HH?? ?? ]O[
（银镜）黑??? ??? AgA g NO V i t C
1、与 AgNO3反应
2、与 2,6 - 二氯靛酚反应 (ChP2000)
无色二氯靛酚,?? ??? V i t C62
氧化型
玫瑰红色
?H
还原型
蓝色
?OHOHˉ
(ChP2000)
N
C l
H O
C l
O
N
C l
H O
C l
O H
H
（ 玫瑰色）
（无色）
红碱性酒石酸铜 ??? ?? ? OCu
V i t C
3、与碱性酒石酸铜反应 USP
4、与 KMnO4反应
??? ?? ?? MnK M n O V i t C
糖类的反应（二）
蓝色
糠醛戊糖
脱水三氯醋酸
?
?? ?????? ??V i t C或盐酸
50℃ 吡咯
USP
O
O
C O HH
C H 2 O H
H O O H
C H 2 O H
O
O
C O HH
HH O O
C C
O H
O O
C H O H
3
C H 2 O H
H 2 O
- C O 2
- H 2 O
O
C H
N
（蓝色）
O C H O
(糠醛 )
O
C H O H 3 C H 2 O HCH （戊糖）
N
N
H
50℃
(吡咯 )
UV（三） BP
0.01mol/L HCl
nmm ax 2 43??
58554511 ~E %cm ?
???? ??? ? IIV i t C H 去氢抗坏血酸
2
指示剂 淀粉指示液
原理1、
碘量法（一）
含量测定三、
O
O
C O HH
O O
C H 2 O H
H I2+
O H
O
O
C O HH
C H 2 O H
H O
H+
?? I
取本品约 0.2g，精密称定，加新
沸过的冷水 100ml与稀醋酸 10ml使溶
解，加淀粉指示液 1ml，立即用碘滴
定液（ 0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝
色，在 30秒内不褪。每 1ml碘滴定液
(0.1mol/L)相当于 8.806mg的 C6H8O6
方法2、
）（ ml/mg.
..
n
MC
T
8 0 68
2
131 7 610
?
?
?
?
?
???? ??? ? IIV i t C H 去氢抗坏血酸
2
（ 1）酸性环境 d, HCl
（ 2） 新沸冷 H2O
减慢 VitC被 O2氧化速度
讨论4、
（ 3）立即滴定
赶走水中 O2
减少 O2的干扰
（ 4）附加剂干扰的排除
片剂 —— 滑石粉 —— 过滤
注射剂 —— 抗氧剂 —— 丙酮
甲醛
Na2SO3 NaHSO3
Na2S2O3 Na2S2O5
CH HO
O a S 3a S O + H2 N H ON 2 2 5
2
H
O N
H C
O
S 3 a
33 C O C HCH
3
3
CH
CH
C
NaSO 3
OH
2,6 - 二氯靛酚钠滴定法法（二）
酚亚胺二氯靛酚,?? ????? V i t C
USP JP
原理1、
空
样二氯靛酚液
空白
样品
V
VH AcH P O
????? ??????? ??
?3
自身指示终点法
蓝色
玫瑰红
?? ??
?? ??
?
?
OH
H
无色还原 ?? ??
方法2、
（ 2）快速滴定 2min内
（ 1）酸性环境 HPO3-HAc
稳定 VitC
防止其他还原性物质干扰
（ 3）剩余比色测定
AV i t C 测二氯靛酚 ?? ??
（定量过量） （测剩余染料）
讨论3、
（ 4）缺点
需经常标定
贮存 ≤一周
不稳定
干扰多 氧化力较强
HPLC法（三）
1,HPLC的优点
灵敏度高
选择性高
分离分析同步
微量分析
干扰少
快速
2,HPLC法分离 VitC常用方法及测
定对象
对象 制剂、生物样品、果汁
方法 离子交换色谱法
离子对色谱法
分配色谱法（正、反相）
血、尿、组织、细胞等
例 多种维生素片中 VitA,VitB1、
VitB2, VitB6,烟酰胺,VitC、
VitE的含量测定
色谱柱 ODS
流动相 A、水 -甲醇（ 4, 1）
B、甲醇
（梯度洗脱）
抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠
水溶性维生素
离子对色谱法（樟脑磺酸）
内标法 + 校正因子
内标物 —— 苯酚
脂溶性维生素 外标法
108,在三氯醋酸或盐酸存在下, 经
水解, 脱羧, 失水后, 加入吡
咯即产生蓝色产物的药物应是
A,氯氮卓
B,维生素 A
C,普鲁卡因
D,盐酸吗啡
E,维生素 C
99,88．中国药典（ 2000年版）采用
以下何法测定维生素 E含量
A,酸碱滴定法
B,氧化还原法
C,紫外分光光度法
D,气相色谱法
E,非水滴定法
98,79．中国药典（ 2000年版）采用
气相色谱法测定维生素 E含
量，内标物质为
A,正二十二烷
B,正二十六烷
C,正三十烷
D,正三十二烷
E,正三十六烷
99,77,下列药物的碱性溶液，加入
铁氰化钾后，再加正丁醇，
显蓝色荧光的是
A,维生素 A
B,维生素 B1
C,维生素 C
D,维生素 D
E,维生素 E
97,77．既具有酸性又具有还原性的
药物是
A,维生素 A
B,咖啡因
C,苯巴比妥
D,氯丙嗪
E,维生素 C
99m,132.维生素 C的鉴别反应，常采
用的试剂有
A,碱性酒石酸铜
B,硝酸银
C,碘化铋钾
D,乙酰丙酮
E,三氯醋酸和吡咯
99m,84,测定维生素 C注射液的含量
时，在操作过程中要加入
丙酮，这是为了
A,保持维生素 C的稳定
B,增加维生素 C的溶解度
C,使反应完全
D,加快反应速度
E,消除注射液中抗氧剂的干扰
98,85,能发生硫色素特征反应的药物
是
A,维生素 A
B,维生素 B1
C,维生素 C
D,维生素 E
E,烟酸
97,81．使用碘量法测定维生素 C的
含量,已知维生素 C的分子量
为 176.13，每 1ml碘滴定液
(0.1mol/L) 相当于维生素 C
的量为
A,17.61mg B,8.806mg
C,176.1mg D,88.06mg
E,1.761mg
97,[121— 125]（ 99,[121— 125]）
可发生以下反应或现象的药物为
A.维生素 B1 B.维生素 C
C.两者均能 D.两者均不能
121.与碘化汞钾生成黄色沉淀
122.麦芽酚反应
123.在乙醚中不溶
124.与 2,6-二氯靛酚反应使颜色消失
125.硫色素反应
A
D
C
B
A
115．维生素 A的鉴别试验为
A,三氯化铁反应
B,硫酸锑反应
C,2,6-二氯靛酚反应
D,三氯化锑反应
E,间二硝基苯的碱性乙醇液反
应
77．中国药典（ 2000年版）规定维生
素 A的测定采用紫外分光光度法
（三点校正法），此法又分为
A．等波长差法
B．等吸收度法
C,6/7 A法
D．差示分光法
E．双波长法
78．维生素 E的鉴别试验有
A．硫色素反应
B．硝酸氧化呈色反应
C．硫酸 -乙醇呈色反应
D．碱性水解后加三氯化铁乙醇
液与 2,2-联吡啶乙醇液呈色反
应
E,Marquis反应
80,下面哪些描述适用于维生素 A
A,分子具有长二烯醇侧链，易被氧化
B,具有较长的全反式共轭多烯结构
C.含酯键，经水解后产生苯并二氢吡
喃衍生物，易被氧化
D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳
定兰色，很快转变为紫红色
E.样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加
热后，呈橙红色
维生素 A与 反应即显
蓝色，渐变成紫红色；反应需在
条件下进行。
（ ） 维生素 A分子中由于具有共
轭多烯侧链，因而其性质很稳定，
不易被氧化变质。
三氯化锑
无水
×
维生素 E在酸性或碱性溶液中加热
可水解生成游离, 当有氧或
其他氧化剂存在时, 则进一步被氧化
成醌型化合物, 尤其在碱性下更易发
生 。
生育酚
维生素 B1 的噻唑环在 介质
中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合
环合，然后经 等氧化剂氧
化生成具有荧光的,加 荧
光消失，加 荧光又显出；此反应
称为 反应。
碱性
铁氰化钾
硫色素 酸
碱
硫色素
维生素 C是 元弱酸，具有强
性，易被氧化剂氧化，常用
作其它制剂的 剂。
一
还原
抗氧
维生素 E中游离生育酚的检查时
规定消耗硫酸铈滴定液 （ 0.01mol/L）
不得过 1.0ml,现硫酸铈滴定液的实
际浓度为 0.01053mol/L,应不得超过
多少 ml？
A,0.95 B,0.97
C,0.99 D,0.92
E,1.05
中国药典维生素 C的含量测定
取本品约 0.2g,精密称定, 加 新
沸过的冷水 100ml与 稀醋酸 10ml使溶
解, 加淀粉指示液 1ml,立即 用碘滴
定液 (0.1mol/L)滴定, 至溶液显蓝色,
在 30秒内不褪 。 每 1ml碘滴定液
(0.1mol/L)相当于 8.806mg的 C6H8O6。
已知：取样量为 0.2084g,消耗碘滴
定液 （ 0.09981mol/L） 22.75ml。
要求：（ 1）解释划线部分
（ 2）计算本品的含量是否符合
规定
（规定本品含 C6H8O6应不低于 99.0%）
%.
%
..
...
%
W
FTV
%V i t C
995
100
1020840
09981000880607522
100
?
?
?
??
?
?
??
?
VitB1片 UV法含量测定 取本品 20片，
精密称定，研细，精密称取适量（约相
当于 VitB1 25mg），置 100ml量瓶中，加
盐酸溶液 (9→1000)约 70ml，振摇 15分钟，
加盐酸溶液 (9→1000)稀释至刻度。用干
燥滤纸滤过，精密量取续滤液 5.0ml，置
另一 100ml量瓶中，再加盐酸溶液
(9→1000)稀释至刻度，摇匀，在 246nm
处测定吸收度，按 C12H17ClN4OS·HCl的
吸收系数（ ）为 421计算，即得。%
cmE 11
已知 20片重 = 1.4070g A246=0.461
取样量 = 0.1551g
规格 = 10mg/片
求 本品含量是否符合药典规定？
（应相当于标示量的 90.0～ 110.0%)
%.
%
.
.
.
.
%
WE
A
399
100
010
20
4 0 7 01
100
1
100
5
1 5 5 10
1
100421
4610
100
1
100
?
??
??
?
?
???
?
?
? 标示量
平均片重
稀释度
