第五节 定性和定量分析一,定性分析二、定量分析定性鉴别纯度检查和杂质限量测定单组分的定量方法多组分的定量方法一、定性分析
（一）定性鉴别定性鉴别的依据 →吸收光谱的特征吸收光谱的形状吸收峰的数目吸收峰的位置 （ 波长 ）
吸收峰的强度相应的吸光系数续前
1．对比吸收光谱的一致性同一测定条件下,
与标准对照物谱图或标准谱图进行对照比较续前
2．对比吸收光谱的特征值
m i n%11m a xm a x,，,shcmE?
续前
3．对比吸光度或吸光系数的比值：
例：
45.3~15.388.1~70.1
550
361
278
361
550361278
12
A
A
A
A
VB
，
三处最大吸收，，
定性鉴别：药典规定
续前
（二）纯度检查和杂质限量测定
1,纯度检查 （ 杂质检查 ）
1） 峰位不重叠：
找 λ→使主成分无吸收,杂质有吸收 →直接考察杂质含量
2） 峰位重叠：
主成分强吸收,杂质无吸收 / 弱吸收 →与纯品比较,E↓
杂质强吸收 >> 主成分吸收 →与纯品比较,E↑,光谱变形续前
2．杂质限量的测定：
例：肾上腺素中微量杂质 —— 肾上腺酮含量计算
2mg/mL -0.05mol/L的 HCL溶液,λ 310nm下测定规定 A310≤0.05 即符合要求的杂质限量 ≤0.06%
%06.0100
2
101.1
%
/101.1
100/101.1
1435
05.0
3
3
4
%1
1
肾上腺酮
mlmg
mlg
lE
A
C
cm
二、定量分析
（ 一 ） 单组分的定量方法
1．吸光系数法
2．标准曲线法
3,对照法：外标一点法
lECA定量依据：
续前
1．吸光系数法（绝对法）
要求单色光前提：
iE CAmLgCigW 求含样过程,已知稀释 )/(/)(
lE
AmLgC
i]1 0 0/[
l
ALm o lC
i]/[或
%1 0 0%
样C
Ci i
练习
例：维生素 B12 的水溶液在 361nm处的百分吸光系数为 207,用 1cm比色池测得某维生素 B12溶液的吸光度是 0.414,求该溶液的浓度 （ 见书 P201例 1）
解：
mLgmLglE AC /0.20100/0 0 2 0 0.01207 414.0
练习
例：精密称取 B12样品 25.0mg,用水溶液配成 100ml。
精密吸取 10.00ml,又置 100ml容量瓶中,加水至刻度 。 取此溶液在 1cm的吸收池中,于 361nm处测定吸光度为 0.507,求 B12的百分含量？ （ 见书 P61例 2）
解：
mLgmLgC i /1045.2100/1045.21207 507.0 53
mLgC /1050.210010100 1050.2 5
2
样
%0.98%100
1050.2
1045.2%100%
5
5
12
样C
CB i
练习
例：
解：
%)0.764(
591.010010
25000.20
367
255
iE
AmLmL
mLmg
mlmLH C L
求已知测移取稀至样品稀至吡啶
mLgmLglE AC i /1092.7100/1092.7764 591.0 64
%0.99%100
250
10
100
100.2
1092.7
%100%
2
6
样C
C
i i
续前
2．标准曲线法条件前提：固定仪器和测定
CACKA
样样同上条件固定条件查得测定样品曲线分别测定配制标准系列过程：
CA
ACA
~
标样标样标样标样
A
AC
C
A
A
C
C?
示例
芦丁含量测定
mLmg
mLmLmLmg
250.3
255~0/200.0
样品标样分别移取
0.710mg/25mL
续前
3．对照法：外标一点法
注：当样品溶液与标准品溶液的稀释倍数相同时标样与样品浓度相近；截距为固定仪器和测定条件；前提：
0
标样 和分别测定一定过程,AA
S
i
Si A
ACC
sC
iC
C
S
i
Si A
Amm
%1 0 0% mmi i
练习
例,维生素 B12的含量测定精密吸取 B12注射液 2.50mL,加水稀释至 10.00mL；
另配制对照液,精密称定对照品 25.00mg,加水稀释至 1000mL。 在 361nm处,用 1cm吸收池,分别测定吸光度为 0.508和 0.518,求 B12注射液注射液的浓度以及标示量的百分含量 （ 该 B12注射液的标示量为 100μg/ mL） 见书 P203例题
解：
1）对照法
mLgCC ii /1.98518.0 508.01 0 0 01 0 0 000.2510 5.2
%1.98%100%12 标示量标示量 iCB
练习
2）吸光系数法
12 0 7
5 0 8.0
10
50.2
ii ClE
AC?
mLgC i /1.98
%1.98%100%12 标示量标示量 iCB
续前 （ 二 ） 多组分的定量方法
cba AAAA 总定量依据：
三种情况：
1,两组分吸收光谱不重叠 （ 互不干扰 ）
两组分在各自 λmax下不重叠 → 分别按单组分定量
a
a
aa
aa
E
ACCEA
1
1
11由
b
b
bb
bb
E
ACCEA
2
2
22由
bb
aa
AE
AE
222
111；测定；测定过程：
续前
2,两组分吸收光谱部分重叠
λ1→ 测 A1→b 组分不干扰 → 可按单组分定量测 Ca
λ2→ 测 A2→a 组分干扰 → 不能按单组分定量测 Ca
baba
aa
AEE
AE
2222
111；和测定；测定过程：
a
a
aa
aa
E
ACCEA
1
1
11由
bbaababa CECEAAA 22222由
b
a
aba
b E
CEAC
2
22
续前
3,两组分吸收光谱完全重叠 —— 混合样品测定
（ 1） 解线性方程组法
（ 2） 等吸收双波长消去法
（ 3） 系数倍率法
1．解线性方程组法
步骤：
baba
baba
AEE
AEE
2222
1111；和测定；和测定
bbaababa CECEAAA 11111
bbaababa CECEAAA 22222
baba
bbabba
a EEEE
EAEAC
1221
1221
baba
abaaba
b EEEE
EAEAC
1221
2112
2．等吸收双波长法
步骤：
消除 a的影响测 b
baba
baba
AAA
AAA
222
111
babbaabababa AAAAAAAAA )()( 212121
aa AAa 2121 和的等吸收点选
bb
b
bb
bbba
CE
CEE
AAA
)( 21
21
b
ba
bb
ba
b E
A
EE
AC
21
续前
消去 b的影响测 a
注：须满足两个基本条件
选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点
选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大
bb AAb '2'1'2'1 和的等吸收点选
aa
a
aa
aaba
CE
CEE
AAA
)(
'
21
'2'1
a
ba
aa
ba
a E
A
EE
AC
''
'2'1
3．系数倍率法
前提：干扰组分 b不成峰形无等吸收点续前? 步骤,b曲线上任找一点 →λ
1
另一点 →λ2
优点：同时将待测组分和干扰组分放大信号 K倍,
提高了待测组分测定灵敏度
ab
λ1 λ2
倍率因子令 K
A
A
b
b
2
1
)()(
)()(
1212
1122
12
aabb
abab
bababa
AKAAKA
AAAAK
AKAA
bA1
bA2
aaaaaba CEKEAKAA )( 1212
的干扰消除了 bCA aba
练习解：
1,取咖啡酸,在 165℃ 干燥至恒重,精密称取 10.00mg,加少量乙醇溶解,转移至 200mL容量瓶中,加水至刻度线,取此溶液 5.00mL,置于 50mL容量瓶中,加 6mol/L的 HCL 4mL,加水至刻度线 。 取此溶液于 1cm比色池中,在 323nm处测定吸光度为 0.463,已知该波长处的,求咖啡酸百分含量 （ 见书后 P215 题 16）
9.9 2 7%11?cmE
mLgmLgC i /10900.4100/10900.419.927 463.0 64
mLgC /10000.5505200 1000.10 6
3
样
%0.98%100
10000.5
10900.4%100%
6
6
样咖啡酸
C
C i
50
5
200
1
稀释因子注：
练习解：
2,精密称取 0.0500g样品,置于 250mL容量瓶中,加入
0.02mol/L HCL溶解,稀释至刻度 。 准确吸取 2mL,稀释至
100mL。 以 0.02mol/L HCL为空白,在 263nm处用 1cm吸收池测定透光率为 41.7%,其摩尔吸光系数为 12000,被测物分子量为 100.0,试计算 263nm处 和样品的百分含量 。
（见书后 P215题 17）
%11cmE
12000.100 120001010%11ME cm
mLgmLg
lE
T
lE
A
C i
/10165.3100/10166.3
11 2 0 0
417.0lglg
64
mLgC /10000.4100 22500500.0 6样
%15.79%100
10000.4
10165.3%100%
6
6
样样品
C
C i
（一）定性鉴别定性鉴别的依据 →吸收光谱的特征吸收光谱的形状吸收峰的数目吸收峰的位置 （ 波长 ）
吸收峰的强度相应的吸光系数续前
1．对比吸收光谱的一致性同一测定条件下,
与标准对照物谱图或标准谱图进行对照比较续前
2．对比吸收光谱的特征值
m i n%11m a xm a x,，,shcmE?
续前
3．对比吸光度或吸光系数的比值：
例：
45.3~15.388.1~70.1
550
361
278
361
550361278
12
A
A
A
A
VB
，
三处最大吸收，，
定性鉴别：药典规定
续前
（二）纯度检查和杂质限量测定
1,纯度检查 （ 杂质检查 ）
1） 峰位不重叠：
找 λ→使主成分无吸收,杂质有吸收 →直接考察杂质含量
2） 峰位重叠：
主成分强吸收,杂质无吸收 / 弱吸收 →与纯品比较,E↓
杂质强吸收 >> 主成分吸收 →与纯品比较,E↑,光谱变形续前
2．杂质限量的测定：
例：肾上腺素中微量杂质 —— 肾上腺酮含量计算
2mg/mL -0.05mol/L的 HCL溶液,λ 310nm下测定规定 A310≤0.05 即符合要求的杂质限量 ≤0.06%
%06.0100
2
101.1
%
/101.1
100/101.1
1435
05.0
3
3
4
%1
1
肾上腺酮
mlmg
mlg
lE
A
C
cm
二、定量分析
（ 一 ） 单组分的定量方法
1．吸光系数法
2．标准曲线法
3,对照法：外标一点法
lECA定量依据：
续前
1．吸光系数法（绝对法）
要求单色光前提：
iE CAmLgCigW 求含样过程,已知稀释 )/(/)(
lE
AmLgC
i]1 0 0/[
l
ALm o lC
i]/[或
%1 0 0%
样C
Ci i
练习
例：维生素 B12 的水溶液在 361nm处的百分吸光系数为 207,用 1cm比色池测得某维生素 B12溶液的吸光度是 0.414,求该溶液的浓度 （ 见书 P201例 1）
解：
mLgmLglE AC /0.20100/0 0 2 0 0.01207 414.0
练习
例：精密称取 B12样品 25.0mg,用水溶液配成 100ml。
精密吸取 10.00ml,又置 100ml容量瓶中,加水至刻度 。 取此溶液在 1cm的吸收池中,于 361nm处测定吸光度为 0.507,求 B12的百分含量？ （ 见书 P61例 2）
解：
mLgmLgC i /1045.2100/1045.21207 507.0 53
mLgC /1050.210010100 1050.2 5
2
样
%0.98%100
1050.2
1045.2%100%
5
5
12
样C
CB i
练习
例：
解：
%)0.764(
591.010010
25000.20
367
255
iE
AmLmL
mLmg
mlmLH C L
求已知测移取稀至样品稀至吡啶
mLgmLglE AC i /1092.7100/1092.7764 591.0 64
%0.99%100
250
10
100
100.2
1092.7
%100%
2
6
样C
C
i i
续前
2．标准曲线法条件前提：固定仪器和测定
CACKA
样样同上条件固定条件查得测定样品曲线分别测定配制标准系列过程：
CA
ACA
~
标样标样标样标样
A
AC
C
A
A
C
C?
示例
芦丁含量测定
mLmg
mLmLmLmg
250.3
255~0/200.0
样品标样分别移取
0.710mg/25mL
续前
3．对照法：外标一点法
注：当样品溶液与标准品溶液的稀释倍数相同时标样与样品浓度相近；截距为固定仪器和测定条件；前提：
0
标样 和分别测定一定过程,AA
S
i
Si A
ACC
sC
iC
C
S
i
Si A
Amm
%1 0 0% mmi i
练习
例,维生素 B12的含量测定精密吸取 B12注射液 2.50mL,加水稀释至 10.00mL；
另配制对照液,精密称定对照品 25.00mg,加水稀释至 1000mL。 在 361nm处,用 1cm吸收池,分别测定吸光度为 0.508和 0.518,求 B12注射液注射液的浓度以及标示量的百分含量 （ 该 B12注射液的标示量为 100μg/ mL） 见书 P203例题
解：
1）对照法
mLgCC ii /1.98518.0 508.01 0 0 01 0 0 000.2510 5.2
%1.98%100%12 标示量标示量 iCB
练习
2）吸光系数法
12 0 7
5 0 8.0
10
50.2
ii ClE
AC?
mLgC i /1.98
%1.98%100%12 标示量标示量 iCB
续前 （ 二 ） 多组分的定量方法
cba AAAA 总定量依据：
三种情况：
1,两组分吸收光谱不重叠 （ 互不干扰 ）
两组分在各自 λmax下不重叠 → 分别按单组分定量
a
a
aa
aa
E
ACCEA
1
1
11由
b
b
bb
bb
E
ACCEA
2
2
22由
bb
aa
AE
AE
222
111；测定；测定过程：
续前
2,两组分吸收光谱部分重叠
λ1→ 测 A1→b 组分不干扰 → 可按单组分定量测 Ca
λ2→ 测 A2→a 组分干扰 → 不能按单组分定量测 Ca
baba
aa
AEE
AE
2222
111；和测定；测定过程：
a
a
aa
aa
E
ACCEA
1
1
11由
bbaababa CECEAAA 22222由
b
a
aba
b E
CEAC
2
22
续前
3,两组分吸收光谱完全重叠 —— 混合样品测定
（ 1） 解线性方程组法
（ 2） 等吸收双波长消去法
（ 3） 系数倍率法
1．解线性方程组法
步骤：
baba
baba
AEE
AEE
2222
1111；和测定；和测定
bbaababa CECEAAA 11111
bbaababa CECEAAA 22222
baba
bbabba
a EEEE
EAEAC
1221
1221
baba
abaaba
b EEEE
EAEAC
1221
2112
2．等吸收双波长法
步骤：
消除 a的影响测 b
baba
baba
AAA
AAA
222
111
babbaabababa AAAAAAAAA )()( 212121
aa AAa 2121 和的等吸收点选
bb
b
bb
bbba
CE
CEE
AAA
)( 21
21
b
ba
bb
ba
b E
A
EE
AC
21
续前
消去 b的影响测 a
注：须满足两个基本条件
选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点
选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大
bb AAb '2'1'2'1 和的等吸收点选
aa
a
aa
aaba
CE
CEE
AAA
)(
'
21
'2'1
a
ba
aa
ba
a E
A
EE
AC
''
'2'1
3．系数倍率法
前提：干扰组分 b不成峰形无等吸收点续前? 步骤,b曲线上任找一点 →λ
1
另一点 →λ2
优点：同时将待测组分和干扰组分放大信号 K倍,
提高了待测组分测定灵敏度
ab
λ1 λ2
倍率因子令 K
A
A
b
b
2
1
)()(
)()(
1212
1122
12
aabb
abab
bababa
AKAAKA
AAAAK
AKAA
bA1
bA2
aaaaaba CEKEAKAA )( 1212
的干扰消除了 bCA aba
练习解：
1,取咖啡酸,在 165℃ 干燥至恒重,精密称取 10.00mg,加少量乙醇溶解,转移至 200mL容量瓶中,加水至刻度线,取此溶液 5.00mL,置于 50mL容量瓶中,加 6mol/L的 HCL 4mL,加水至刻度线 。 取此溶液于 1cm比色池中,在 323nm处测定吸光度为 0.463,已知该波长处的,求咖啡酸百分含量 （ 见书后 P215 题 16）
9.9 2 7%11?cmE
mLgmLgC i /10900.4100/10900.419.927 463.0 64
mLgC /10000.5505200 1000.10 6
3
样
%0.98%100
10000.5
10900.4%100%
6
6
样咖啡酸
C
C i
50
5
200
1
稀释因子注：
练习解：
2,精密称取 0.0500g样品,置于 250mL容量瓶中,加入
0.02mol/L HCL溶解,稀释至刻度 。 准确吸取 2mL,稀释至
100mL。 以 0.02mol/L HCL为空白,在 263nm处用 1cm吸收池测定透光率为 41.7%,其摩尔吸光系数为 12000,被测物分子量为 100.0,试计算 263nm处 和样品的百分含量 。
（见书后 P215题 17）
%11cmE
12000.100 120001010%11ME cm
mLgmLg
lE
T
lE
A
C i
/10165.3100/10166.3
11 2 0 0
417.0lglg
64
mLgC /10000.4100 22500500.0 6样
%15.79%100
10000.4
10165.3%100%
6
6
样样品
C
C i
