第 16章
法 医 物 证 检 验
西安交通大学医学院法医系
各种生物检材
血液
血痕
精斑
唾液
软组织
硬组织（骨、牙）
毛发
指甲
提取活体检材
? 提取活体血样时，采集静脉或耳垂血。
将新鲜血液滴在消毒纱布或中速滤纸上，
约 2cm2以上，在通风干燥的地方晾干。
? 提取口腔脱落上皮细胞时，应先用清水
漱口，然后用特制的口腔提取拭子或消
毒棉签反复刮拭左右两侧颊粘膜，置通
风干燥的处晾干。
? 毛发应拔取 1-3根，尽量取毛根。
? 以上检材均用纸袋包装。
血迹检材
? 对衣裤、鞋帽以及刀、斧、石块等附着
疑有血痕的小件物品要整件提取。
? 附有血痕又可剪切的大件物品，如地毯、
被褥、床单等，可将血痕连同其周边的
部分一起剪下；
? 衣柜、墙壁、地面等不能移动的物件上
附着的血迹，可刮取或用生理盐水浸湿
的纱布提取，血痕量少时，应用少量的
棉纱线提取，以尽量提高棉纱线上血痕
的浓度。
? 血痕检材分别用纸袋包装，不能用塑料
袋包装或放入密封容器内。
精斑（ 混合斑）
? 提取阴道内容物，应用棉签在阴道穹窿部
提取，至少提取 3支以上，并标明提取序号，
分别晾干、分开包装。
? 怀疑有性侵害的尸体，必要时还应注意会
阴、下腹、口腔等部位有无精斑，并分别
提取。
? 怀疑有性侵害的现场，必须提取怀疑有精
斑的所有检材，如床单、被褥、卫生纸、
避孕套、内裤、衣物等。应该分别提取、
分别晾干、分开包装。
毛 发
? 毛发要用镊子夹取，每一根或一组
毛发应分别用纸折叠后置纸袋内送
检。
? 唾液斑检材 如烟头、果核、香口胶
同样 要用镊子夹取，分别包装。
人流组织及引产胎儿
? 人流刮宫组织的提取, 取确认为绒毛的组
织 5g以上；引产胎儿的取 5g以上的组织；
洁净容器包装, 冰冻保存, 冷藏送检 。 羊
水取 2ml以上, 洁净容器包装, 冷藏保存,
冷藏送检 。
尸体检材
? 新鲜尸体取心血。
? 心血腐败者，取深部肌肉组织。
? 腐败尸体，原则上尽量提取相对新鲜的深
部肌肉组织组织。
? 高度腐败尸体，可取肋软骨或者其它软骨、
指甲（ 2枚以上）、带毛根的毛发（ 10根以
上）。
? 以上检材必须提取其中两种；白骨化的尸
体取指甲、长骨、毛发均应提取。
? 以上检材均应用洁净容器包装、冰冻保存、
冷藏送检。
对照检材
? 根据案件需要, 应提取对照样本检材,
如已婚女性被人强奸, 必须送该女子及
其性伴侣的血样本作对照等 。
血痕检验
（ Bloodstains Test）
血痕检验的目的：
1．是否血痕
2．是人血还是动物血
3．血痕的个人识别
4．与案情有关的其他问题
血痕检验的程序：
1．肉眼检验
2．预试验
3．确正试验
4．种属鉴定
5．遗传标记测定
6．其他检验
肉眼检验
预试验
阴性
不是血痕或被坏
阳性
可能是血痕
确证试验（有时可省）
阴性
不是血痕
或量太少
或被破坏
阳性
肯定是血痕
种属试验
阴性
不是人血
或量太少
或被破坏
阳性
肯定是
人血痕
各种动物
血鉴定 个人识别
非
遗
传
标
记
测
定
出血部位
出血时间
出血量
出血者年龄
出血性别
一人血或多人血
遗传标记测定
红细胞血型 血清型 红细胞酶型 HLA DNA多态性
ABO MN P Rh Hp Gc Tf Gm PGM EsD GLOI EAP A B DR DQ
DNA指纹 VNTR STR RAPD
第一节 肉眼检验
一．血痕的部位
二．血痕的颜色
三．血痕的形状
1．滴状
2．流注状
3．擦拭状
4．喷溅状
5．血印痕
6．血泊
7．血水
8．隐性血痕
9．其他
四．血痕的范围
第二节 预试验
（ Preliminary Test）
预试验即筛选试验，要求：
1．是血痕一定呈阳性反应,预试验
阴性即可认定不是血痕或血痕已被破
坏。
2．所需的检材量少，灵敏度高，即
使肉眼看不见，也呈阳性反应。
3．操作简便快速。
血痕 Hb或正铁血红素
过氧化物酶活性
过氧化氢
水
新生态氧
无色化学物质 有色物质
氧化
血痕预试验的基本原理：
一 联苯胺试验
1 原理
2 试剂：冰醋酸
联苯胺无水乙醇饱和溶液
3%过氧化氢
3 操作：血痕少许，置与滤纸上
冰醋酸 1滴
联苯胺无水乙醇饱和溶液 1滴
3%过氧化氢 1滴
1-2分种不出现兰色反应
立即出现兰色反应 阳性
不出现 阴性
4 注意事项
二 酚酞试验
1 原理
2 试剂
3 操作
三 鲁米诺试验
1 原理：鲁米诺的碱性溶液，在过氧化氢存在下，
与血红素反应发出强荧光。
2 试剂：
3 操作：
4 注意：
四 其他预试验
邻联甲苯胺试验
孔雀绿试验
氨基比林试验
第三节 确证试验
(Conclusive Test)
血痕确证试验检验的物质是血红蛋白及其衍生物，确证试验
阳性，表明检材中含有血红蛋白或其衍生物，可以判定为血痕。
确证试验灵敏度一般不太高。
常用方法,1 结晶试验
2 显微分光镜检查：光谱检查
一 血色原结晶试验
1 原理,血红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红素和变性
珠蛋白，在还原剂作用下，正铁血红素还原为血
红素，后者与变性珠蛋白或其他含氮化合物（如
吡啶 烟碱）等，结合，形成血色原结晶。
2 试剂,高山氏试剂
10% NaOH 3ml 混合置棕色瓶中
30% 葡萄糖 10ml
吡啶 3ml
试剂配置好第二日天使用较好，久置则反应缓慢，
甚，至失效。
3 操作
4 结果 桃红色的星状 菊花状或针状结晶
二 氯化血红素结晶试验
1 原理：在酸的作用下，血红蛋白分解为正铁血红素，
后者与氯离子反应生成氯化血红素结晶。
2 试剂,10%NaCl 2ml
冰醋酸 10ml
无水乙醇 5ml
3 操作
4 结果, 冷却后镜检出现菱形或瓦片状褐色结晶。
5 注意：加热须小心，若加热超过 142度，血红素被破
坏不能形成结晶。
三 显微分光镜检查
1 原理：有色物质能吸收一定波长的光，当日光通过有色
物质时，再经过分光镜时，因其中某些波长的光
被吸收，便会在光谱上相应波长区域内出现黑色
吸收线。血红蛋白及其衍生物均系有色物质，具
很强的选择性吸收光线的性质，再分光镜下检查
是否有特定的吸收线，可确定是否是血痕 。
2 方法
第四节 种属鉴定
（ Spscies Identification)
种属鉴定
环状沉淀反应
沉淀反应 免疫扩散试验
血清学方法 对流电泳
抗球蛋白消耗试验
酶联免疫吸附试验
细胞学方法
生化方法 血红蛋白等电聚焦
一 沉淀反应
1 原理 用异种动物学清蛋白作为抗原，免疫动物，可刺激动
物产生血清抗体，后者能与相应的血清抗原发生特意
性沉淀反应，而与不相应的血清蛋白则不发身生反映。
用已知抗血清与被检血痕的生理盐水寝液反应，确定
血痕的种属。
2 抗血清：抗人血红蛋白血清
抗人血清蛋白血清
（ 1）要求 （ 1） 特异性好。
（ 2）效价达 10000倍以上,10分钟内出现明显沉淀。
（ 3）澄清透明。
（ 2）抗血清的种属特异性：
a 近缘反应,
b 抗血清交叉反映的消除：
以纯化的抗原免疫动物，获得特异性血清。
用吸收法除去血清中的交叉反应抗体。
稀释抗原条整抗原抗体比例，消除抗血清的交叉反映。
（ 3）抗血清的器官特异性
3 检材处理
4影响沉淀反应的因素
5 方法
（ 1） 环状沉淀反应
（ 2） 琼脂扩散实验
（ 3）对流免疫电泳
二 抗人球蛋白消耗试验
1 原理,人血痕浸液与抗人球蛋白血清相遇时，血痕浸液中
的球蛋白就会与抗球蛋白特异性结合，抗人球蛋白
血清的效价就会减少或丧失。再用经不完全抗 D
（ 球蛋白）致敏的红细胞做指示剂，观察经吸附后的
抗人球蛋白血清的效价是否下降或消逝。如已消耗，
则指示细胞呈现凝集抑制，即为阳性反应。本试验
是检测人血清的球蛋白，此球蛋白在人体液或分泌液
中存在极少，对抗人球蛋白血清无抑制作用。
2 方法
（ 1）红细胞致敏
（ 2）抗人球蛋白血清的标化
（ 3）抗人球蛋白血清浸泡血痕
（ 4）测定吸收后抗人球蛋白血清的效价
三 薄层凝胶等电聚焦
四 其他方法
第五节 血痕的血型测定
一 血痕的红细胞血型测定
（一）血痕的 ABO血型测定
1,凝集素的测定
2 凝集原的测定 A.B.H血型物质是一种多糖体，对干燥和高
温有较强的抵抗力，当红细胞变形或细胞膜
碎裂，其上血型物质仍能保持与相应凝集素
特异结合的能力。应此,A.B.H血型物质的
检测就成为血痕 ABO血型鉴定的重点。
A 吸收试验
原理：血痕中的血型物质可以从抗血清中吸收相应的凝集素，
如 A 型物质可以吸收 A 凝集素,B型物质可以吸收 B 凝
集素。将被检血痕分别与已知效价的抗血清进行反应，
血痕中的血型物质与相应的凝集素特异性结合，使抗
血清中该凝集素效价减低或消失。吸收后再用相应红
细胞测定其效价，看其效价的变化，便可判断血痕的
血型。
分泌物
获得检材
中细胞 经物理化学作
用释放
DNA
经过一系列实验操作及
仪器分析得到分型结果
应用 PCR
反应的对
DNA进行
几何级数
放大
统计学计算
得出结论
DNA分型的应用
以人找物 发现犯罪嫌疑人在先, 获取证
实及犯罪事实的物证再后。
以物找人 发现证实犯罪的物证在先, 获
取犯罪嫌疑人再后。
以物找物 对发生在不同时间、不同地点
的案件所获取的犯罪物证进行串并。（如精斑、
血迹、毛发等检材的串并）
以人找人 尸源的寻找与认定。（如无名
尸、碎尸、空难、焚尸等的认定）
精斑检验
SEMINAL STAIN TEST
案情
强奸 猥亵 非法性关系 离婚
检材
裤头 卫生纸 床单 毛巾 阴道拭子
新鲜精液
鉴定
是否精斑 个人识别 生育能力鉴定
一、精液的组成
精子
精浆
精浆
水 90 %
有机物 精素 黄素 胆碱 卵磷脂 蛋白质 氨基酸 酶
离子 Na+ K+ Ca++ P++Cl- Zn+ SO4=
特有蛋白 P30 β—MSP β— SM α2 –SGP
血型物质 ABH
Gc Tf
Gm Km
Acp PGM1 DIA3
二、检材处理
精液 4度保存 晾干制成精斑
精斑 提取 晾干 纸袋保存
对照检材 唾液 血液（血痕）
女子、丈夫、嫌疑人。
精子的形态
? 正常精子分头、体、尾三部分，长 50－ 60um,外形似
蝌蚪。头部正面观呈卵圆形, 侧面观呈扁平形，由细
胞核和顶体组成。头长 3-5um，宽 2-3um，厚 1-2um。
? 颈部圆柱形，长约 6um。
? 尾部细长而弯曲，长达 40-50um。
? HE染色：精子头呈蓝色，头前半部不着色或浅染，尾
部 呈 红色。
? 可见异型精子。
精子在女性生殖道的检测时限
? 性交后阴道内 3-8H,宫颈 2-5天，子宫、输卵管 1-10天
可检活精子。
? 阴道内 3-9天，宫颈 17天可检见死精子。
? 精子检出时限与被害人的体位、活动情况有关。
? 精子检出率的高低与阴道内容物的提取部位有关，宫
颈刮片和阴道后穹隆擦拭物的精子检出率较高。
三、精液检验
? 一般性状
乳白色，粘稠状液体,PH7.2— 8.9
比重,1.021— 1.040，渗透压,0.55— 0.58
? 数量
2-2.5 ml/次,1-1.5 亿个 /ml，总数 4-6 亿个
? 形态、活动度。
头、体、尾,50-60um。
? 不正常的标准
数量, < 0.6亿 /ml, 总数 < 1亿
总量 < 1.5ml
活动不良的精子 > 40%
畸型精子 > 15%
四、精斑检验
一）肉眼检查
二）预实验
三）确证实验
四）血型测定
一）肉眼检查
? 颜色
? 形态
? 数量
? 分布
? 陈旧度
二）精斑预示验
1.紫外线检查
?原理：
紫外线
黄素 银白色荧光
400-500nm
?方法及结果
特点：
简单、快速，不破坏检材；
确定精斑的分布，范围。
特异性差。
2.Acp实验
?原理
Acp
磷酸苯二钠 萘酚
+
? 氨基安替比林
?结果 铁氢化钾
红色醌类
试剂
缓冲液 枸橼酸 1.4g
1N氢氧化钠 12.5ml
磷酸苯二钠 0.2g
4-甲基安替笔林 0.6g
加蒸馏水至 100ml
显色液
1N氢氧化钠 17.7ml
碳酸氢钠 1.4g
铁氰化钾 3.6g
加蒸溜水至 100ml
方法,
检材 +缓冲液
37℃, 5min。
显色液
深红色 + 淡黄色 —
特点
? 阳性结果说明含有酸性磷酸酶，可能是精斑。阴性结
果说明检材不是精斑或精斑酸性磷酸酶被破坏。
? 由于酸性磷酸酶非前列腺独有，因此阳性结果不可轻
易认定为精斑。
? 室温条件下酸性磷酸酶较稳定。
三）其他方法
?碘化碘甲结晶实验
胆碱 +碘 碘胆碱结晶
?苦味酸结晶实验
精素 +苦味酸 精素苦味酸结晶
?锌的检出
精液中锌的含量最高
三、精斑的确证实验
一）形态学检查 精子的检出
二）免疫学检验 抗人精沉淀实验
抗 P30沉淀实验
其他
三）生化检验 LDH—X
GD—DAP
一）精子的检出
方法
结果
HE染色 顶部不着色 蓝颈 红 尾
品红 -美蓝 红头 蓝尾
藻红染色 红色
确证标准
一个完整的精子
数个典型的精子头
二）免疫学方法
?抗人精血清沉淀实验
?抗 P30血清沉淀实验
高度的种属特异性与器官特异性
无精子的精斑亦可为阳性
P30性质稳定 检出时间长
?其他
抗 β —微精蛋白沉淀实验
抗 P30单克隆抗体 ELISA法
方法
环状沉淀
免疫扩散
酶标抗体
单向 扩散
双向扩散
三）生化检验
1,LDH—X带检测
LDH—1
LDH—2
LDH—3
LDH—X
LDH—4
LDH—5
m w
2,GP—DAP （甘氨酰脯氨酰二肽基氨肽酶）
1） GP—DAP活性；
精液 4171Iu/L平均。
阴道液、初乳、血清、唾液、
尿液等 < 100 Iu/L
2）电泳区带
精液
阴道液
初乳
血清
四、种属鉴定
? 抗人精血清沉淀反应
? 抗 P30血清沉淀实验
五、血型测定
ABO血型
酶型
DNA
一） ABO血型测定
中和实验
ELISA法
二）酶型蛋白型测定
PGM1 Fu GLO1 G6PD AK PePA
ORM1 Gc Gm Km
DIA3 r — GGT
精液 Fu等电聚焦分型
1-1 2-1 2-2
精斑 ORM1等电聚焦分型
1-1 2-1 2-2
精斑 DIA3电泳分型
1-1 2-1 2-2
精斑 r-GGT电泳分型
1-1 2-1 2-1
三） DNA分型
混合斑 （ 精子、阴道上皮细胞
SDS、蛋白酶 K
完整精子 DNA（阴道上皮细胞）
DDT
二次消化 SDS、蛋白酶
DNA（精子）
混合斑 DNA提取
? 1) 取适量含有混合斑的检测, 剪碎后放入 5ml小烧杯
中, 加入 3ml纯水, 300μl 10% SDS及 150μl 5mg/ml
的 PK酶, 用牙签搅拌后, 放入 37℃ 水浴 6小时以上
（ 最好过夜 ） 。
? 2) 将水浴好的检材移入 1.5ml离心管 （ 检材载体用一
次性注射器挤压后去除 ）, 13,000rpm 离心 3分钟,
去上清, 每管加 1.4ml 纯水, 振荡, 13000rpm 离心 3
分钟 。 洗三次后, 移入 0.5ml离心管中, 13000rpm离
心 3分钟, 弃上清 。
混合斑 DNA提取
? 3) 向沉淀物的离心管中加入 200μl 5％ 的 Chelex-
100（ 可根据检材量的多少进行调节 ）, 4μl 5mg/ml
的 PK酶及 8μl 1M的 DTT（ PK酶及 DTT的终浓度分别为
100μg/ml 和 0.039M）, 振荡后 56℃ 保温过夜 。 次日
取出振荡, 100℃ 保温 8分钟, 振荡, 13000rpm离心 3
分钟, 上清用于 PCR扩增或放 4℃ 保存备用 。
Y-STR基因座的特点
1,呈单倍型父系遗传
2,突变率低
3,特别适用于法医学中混合斑的分析和父系家
族成员的亲权鉴定
N Sample DYS393 DYS19 DYS389Ⅱ DYS390 DYS391 DYS385
4 嫌犯甲 13 17 29 23 10 12/18
嫌犯乙 12 16 30 23 10 12/19
精斑 12 16 30 23 10 12/19
5 嫌犯 13 15 31 23 10 13/17
卫生纸 13 15 31 23 10 13/17
6 嫌犯 12 15 28 23 11 13/13
受害人内裤 12 15 28 23 11 13/13
7 嫌犯 12 16 29 23 10 11/16
受害人内裤 12 16 29 23 10 11/16
8 嫌犯甲 12 15 29 23 10 12/12
嫌犯乙 12 14 28 24 10 13/21
嫌犯丙 13 15 28 23 10 12/12
混合斑 12/13 15 28/29 23 10 12/12
刑事案件的 Y-STR分型结果
法 医 物 证 检 验
西安交通大学医学院法医系
各种生物检材
血液
血痕
精斑
唾液
软组织
硬组织（骨、牙）
毛发
指甲
提取活体检材
? 提取活体血样时，采集静脉或耳垂血。
将新鲜血液滴在消毒纱布或中速滤纸上，
约 2cm2以上，在通风干燥的地方晾干。
? 提取口腔脱落上皮细胞时，应先用清水
漱口，然后用特制的口腔提取拭子或消
毒棉签反复刮拭左右两侧颊粘膜，置通
风干燥的处晾干。
? 毛发应拔取 1-3根，尽量取毛根。
? 以上检材均用纸袋包装。
血迹检材
? 对衣裤、鞋帽以及刀、斧、石块等附着
疑有血痕的小件物品要整件提取。
? 附有血痕又可剪切的大件物品，如地毯、
被褥、床单等，可将血痕连同其周边的
部分一起剪下；
? 衣柜、墙壁、地面等不能移动的物件上
附着的血迹，可刮取或用生理盐水浸湿
的纱布提取，血痕量少时，应用少量的
棉纱线提取，以尽量提高棉纱线上血痕
的浓度。
? 血痕检材分别用纸袋包装，不能用塑料
袋包装或放入密封容器内。
精斑（ 混合斑）
? 提取阴道内容物，应用棉签在阴道穹窿部
提取，至少提取 3支以上，并标明提取序号，
分别晾干、分开包装。
? 怀疑有性侵害的尸体，必要时还应注意会
阴、下腹、口腔等部位有无精斑，并分别
提取。
? 怀疑有性侵害的现场，必须提取怀疑有精
斑的所有检材，如床单、被褥、卫生纸、
避孕套、内裤、衣物等。应该分别提取、
分别晾干、分开包装。
毛 发
? 毛发要用镊子夹取，每一根或一组
毛发应分别用纸折叠后置纸袋内送
检。
? 唾液斑检材 如烟头、果核、香口胶
同样 要用镊子夹取，分别包装。
人流组织及引产胎儿
? 人流刮宫组织的提取, 取确认为绒毛的组
织 5g以上；引产胎儿的取 5g以上的组织；
洁净容器包装, 冰冻保存, 冷藏送检 。 羊
水取 2ml以上, 洁净容器包装, 冷藏保存,
冷藏送检 。
尸体检材
? 新鲜尸体取心血。
? 心血腐败者，取深部肌肉组织。
? 腐败尸体，原则上尽量提取相对新鲜的深
部肌肉组织组织。
? 高度腐败尸体，可取肋软骨或者其它软骨、
指甲（ 2枚以上）、带毛根的毛发（ 10根以
上）。
? 以上检材必须提取其中两种；白骨化的尸
体取指甲、长骨、毛发均应提取。
? 以上检材均应用洁净容器包装、冰冻保存、
冷藏送检。
对照检材
? 根据案件需要, 应提取对照样本检材,
如已婚女性被人强奸, 必须送该女子及
其性伴侣的血样本作对照等 。
血痕检验
（ Bloodstains Test）
血痕检验的目的：
1．是否血痕
2．是人血还是动物血
3．血痕的个人识别
4．与案情有关的其他问题
血痕检验的程序：
1．肉眼检验
2．预试验
3．确正试验
4．种属鉴定
5．遗传标记测定
6．其他检验
肉眼检验
预试验
阴性
不是血痕或被坏
阳性
可能是血痕
确证试验（有时可省）
阴性
不是血痕
或量太少
或被破坏
阳性
肯定是血痕
种属试验
阴性
不是人血
或量太少
或被破坏
阳性
肯定是
人血痕
各种动物
血鉴定 个人识别
非
遗
传
标
记
测
定
出血部位
出血时间
出血量
出血者年龄
出血性别
一人血或多人血
遗传标记测定
红细胞血型 血清型 红细胞酶型 HLA DNA多态性
ABO MN P Rh Hp Gc Tf Gm PGM EsD GLOI EAP A B DR DQ
DNA指纹 VNTR STR RAPD
第一节 肉眼检验
一．血痕的部位
二．血痕的颜色
三．血痕的形状
1．滴状
2．流注状
3．擦拭状
4．喷溅状
5．血印痕
6．血泊
7．血水
8．隐性血痕
9．其他
四．血痕的范围
第二节 预试验
（ Preliminary Test）
预试验即筛选试验，要求：
1．是血痕一定呈阳性反应,预试验
阴性即可认定不是血痕或血痕已被破
坏。
2．所需的检材量少，灵敏度高，即
使肉眼看不见，也呈阳性反应。
3．操作简便快速。
血痕 Hb或正铁血红素
过氧化物酶活性
过氧化氢
水
新生态氧
无色化学物质 有色物质
氧化
血痕预试验的基本原理：
一 联苯胺试验
1 原理
2 试剂：冰醋酸
联苯胺无水乙醇饱和溶液
3%过氧化氢
3 操作：血痕少许，置与滤纸上
冰醋酸 1滴
联苯胺无水乙醇饱和溶液 1滴
3%过氧化氢 1滴
1-2分种不出现兰色反应
立即出现兰色反应 阳性
不出现 阴性
4 注意事项
二 酚酞试验
1 原理
2 试剂
3 操作
三 鲁米诺试验
1 原理：鲁米诺的碱性溶液，在过氧化氢存在下，
与血红素反应发出强荧光。
2 试剂：
3 操作：
4 注意：
四 其他预试验
邻联甲苯胺试验
孔雀绿试验
氨基比林试验
第三节 确证试验
(Conclusive Test)
血痕确证试验检验的物质是血红蛋白及其衍生物，确证试验
阳性，表明检材中含有血红蛋白或其衍生物，可以判定为血痕。
确证试验灵敏度一般不太高。
常用方法,1 结晶试验
2 显微分光镜检查：光谱检查
一 血色原结晶试验
1 原理,血红蛋白在碱性溶液中分解为正铁血红素和变性
珠蛋白，在还原剂作用下，正铁血红素还原为血
红素，后者与变性珠蛋白或其他含氮化合物（如
吡啶 烟碱）等，结合，形成血色原结晶。
2 试剂,高山氏试剂
10% NaOH 3ml 混合置棕色瓶中
30% 葡萄糖 10ml
吡啶 3ml
试剂配置好第二日天使用较好，久置则反应缓慢，
甚，至失效。
3 操作
4 结果 桃红色的星状 菊花状或针状结晶
二 氯化血红素结晶试验
1 原理：在酸的作用下，血红蛋白分解为正铁血红素，
后者与氯离子反应生成氯化血红素结晶。
2 试剂,10%NaCl 2ml
冰醋酸 10ml
无水乙醇 5ml
3 操作
4 结果, 冷却后镜检出现菱形或瓦片状褐色结晶。
5 注意：加热须小心，若加热超过 142度，血红素被破
坏不能形成结晶。
三 显微分光镜检查
1 原理：有色物质能吸收一定波长的光，当日光通过有色
物质时，再经过分光镜时，因其中某些波长的光
被吸收，便会在光谱上相应波长区域内出现黑色
吸收线。血红蛋白及其衍生物均系有色物质，具
很强的选择性吸收光线的性质，再分光镜下检查
是否有特定的吸收线，可确定是否是血痕 。
2 方法
第四节 种属鉴定
（ Spscies Identification)
种属鉴定
环状沉淀反应
沉淀反应 免疫扩散试验
血清学方法 对流电泳
抗球蛋白消耗试验
酶联免疫吸附试验
细胞学方法
生化方法 血红蛋白等电聚焦
一 沉淀反应
1 原理 用异种动物学清蛋白作为抗原，免疫动物，可刺激动
物产生血清抗体，后者能与相应的血清抗原发生特意
性沉淀反应，而与不相应的血清蛋白则不发身生反映。
用已知抗血清与被检血痕的生理盐水寝液反应，确定
血痕的种属。
2 抗血清：抗人血红蛋白血清
抗人血清蛋白血清
（ 1）要求 （ 1） 特异性好。
（ 2）效价达 10000倍以上,10分钟内出现明显沉淀。
（ 3）澄清透明。
（ 2）抗血清的种属特异性：
a 近缘反应,
b 抗血清交叉反映的消除：
以纯化的抗原免疫动物，获得特异性血清。
用吸收法除去血清中的交叉反应抗体。
稀释抗原条整抗原抗体比例，消除抗血清的交叉反映。
（ 3）抗血清的器官特异性
3 检材处理
4影响沉淀反应的因素
5 方法
（ 1） 环状沉淀反应
（ 2） 琼脂扩散实验
（ 3）对流免疫电泳
二 抗人球蛋白消耗试验
1 原理,人血痕浸液与抗人球蛋白血清相遇时，血痕浸液中
的球蛋白就会与抗球蛋白特异性结合，抗人球蛋白
血清的效价就会减少或丧失。再用经不完全抗 D
（ 球蛋白）致敏的红细胞做指示剂，观察经吸附后的
抗人球蛋白血清的效价是否下降或消逝。如已消耗，
则指示细胞呈现凝集抑制，即为阳性反应。本试验
是检测人血清的球蛋白，此球蛋白在人体液或分泌液
中存在极少，对抗人球蛋白血清无抑制作用。
2 方法
（ 1）红细胞致敏
（ 2）抗人球蛋白血清的标化
（ 3）抗人球蛋白血清浸泡血痕
（ 4）测定吸收后抗人球蛋白血清的效价
三 薄层凝胶等电聚焦
四 其他方法
第五节 血痕的血型测定
一 血痕的红细胞血型测定
（一）血痕的 ABO血型测定
1,凝集素的测定
2 凝集原的测定 A.B.H血型物质是一种多糖体，对干燥和高
温有较强的抵抗力，当红细胞变形或细胞膜
碎裂，其上血型物质仍能保持与相应凝集素
特异结合的能力。应此,A.B.H血型物质的
检测就成为血痕 ABO血型鉴定的重点。
A 吸收试验
原理：血痕中的血型物质可以从抗血清中吸收相应的凝集素，
如 A 型物质可以吸收 A 凝集素,B型物质可以吸收 B 凝
集素。将被检血痕分别与已知效价的抗血清进行反应，
血痕中的血型物质与相应的凝集素特异性结合，使抗
血清中该凝集素效价减低或消失。吸收后再用相应红
细胞测定其效价，看其效价的变化，便可判断血痕的
血型。
分泌物
获得检材
中细胞 经物理化学作
用释放
DNA
经过一系列实验操作及
仪器分析得到分型结果
应用 PCR
反应的对
DNA进行
几何级数
放大
统计学计算
得出结论
DNA分型的应用
以人找物 发现犯罪嫌疑人在先, 获取证
实及犯罪事实的物证再后。
以物找人 发现证实犯罪的物证在先, 获
取犯罪嫌疑人再后。
以物找物 对发生在不同时间、不同地点
的案件所获取的犯罪物证进行串并。（如精斑、
血迹、毛发等检材的串并）
以人找人 尸源的寻找与认定。（如无名
尸、碎尸、空难、焚尸等的认定）
精斑检验
SEMINAL STAIN TEST
案情
强奸 猥亵 非法性关系 离婚
检材
裤头 卫生纸 床单 毛巾 阴道拭子
新鲜精液
鉴定
是否精斑 个人识别 生育能力鉴定
一、精液的组成
精子
精浆
精浆
水 90 %
有机物 精素 黄素 胆碱 卵磷脂 蛋白质 氨基酸 酶
离子 Na+ K+ Ca++ P++Cl- Zn+ SO4=
特有蛋白 P30 β—MSP β— SM α2 –SGP
血型物质 ABH
Gc Tf
Gm Km
Acp PGM1 DIA3
二、检材处理
精液 4度保存 晾干制成精斑
精斑 提取 晾干 纸袋保存
对照检材 唾液 血液（血痕）
女子、丈夫、嫌疑人。
精子的形态
? 正常精子分头、体、尾三部分，长 50－ 60um,外形似
蝌蚪。头部正面观呈卵圆形, 侧面观呈扁平形，由细
胞核和顶体组成。头长 3-5um，宽 2-3um，厚 1-2um。
? 颈部圆柱形，长约 6um。
? 尾部细长而弯曲，长达 40-50um。
? HE染色：精子头呈蓝色，头前半部不着色或浅染，尾
部 呈 红色。
? 可见异型精子。
精子在女性生殖道的检测时限
? 性交后阴道内 3-8H,宫颈 2-5天，子宫、输卵管 1-10天
可检活精子。
? 阴道内 3-9天，宫颈 17天可检见死精子。
? 精子检出时限与被害人的体位、活动情况有关。
? 精子检出率的高低与阴道内容物的提取部位有关，宫
颈刮片和阴道后穹隆擦拭物的精子检出率较高。
三、精液检验
? 一般性状
乳白色，粘稠状液体,PH7.2— 8.9
比重,1.021— 1.040，渗透压,0.55— 0.58
? 数量
2-2.5 ml/次,1-1.5 亿个 /ml，总数 4-6 亿个
? 形态、活动度。
头、体、尾,50-60um。
? 不正常的标准
数量, < 0.6亿 /ml, 总数 < 1亿
总量 < 1.5ml
活动不良的精子 > 40%
畸型精子 > 15%
四、精斑检验
一）肉眼检查
二）预实验
三）确证实验
四）血型测定
一）肉眼检查
? 颜色
? 形态
? 数量
? 分布
? 陈旧度
二）精斑预示验
1.紫外线检查
?原理：
紫外线
黄素 银白色荧光
400-500nm
?方法及结果
特点：
简单、快速，不破坏检材；
确定精斑的分布，范围。
特异性差。
2.Acp实验
?原理
Acp
磷酸苯二钠 萘酚
+
? 氨基安替比林
?结果 铁氢化钾
红色醌类
试剂
缓冲液 枸橼酸 1.4g
1N氢氧化钠 12.5ml
磷酸苯二钠 0.2g
4-甲基安替笔林 0.6g
加蒸馏水至 100ml
显色液
1N氢氧化钠 17.7ml
碳酸氢钠 1.4g
铁氰化钾 3.6g
加蒸溜水至 100ml
方法,
检材 +缓冲液
37℃, 5min。
显色液
深红色 + 淡黄色 —
特点
? 阳性结果说明含有酸性磷酸酶，可能是精斑。阴性结
果说明检材不是精斑或精斑酸性磷酸酶被破坏。
? 由于酸性磷酸酶非前列腺独有，因此阳性结果不可轻
易认定为精斑。
? 室温条件下酸性磷酸酶较稳定。
三）其他方法
?碘化碘甲结晶实验
胆碱 +碘 碘胆碱结晶
?苦味酸结晶实验
精素 +苦味酸 精素苦味酸结晶
?锌的检出
精液中锌的含量最高
三、精斑的确证实验
一）形态学检查 精子的检出
二）免疫学检验 抗人精沉淀实验
抗 P30沉淀实验
其他
三）生化检验 LDH—X
GD—DAP
一）精子的检出
方法
结果
HE染色 顶部不着色 蓝颈 红 尾
品红 -美蓝 红头 蓝尾
藻红染色 红色
确证标准
一个完整的精子
数个典型的精子头
二）免疫学方法
?抗人精血清沉淀实验
?抗 P30血清沉淀实验
高度的种属特异性与器官特异性
无精子的精斑亦可为阳性
P30性质稳定 检出时间长
?其他
抗 β —微精蛋白沉淀实验
抗 P30单克隆抗体 ELISA法
方法
环状沉淀
免疫扩散
酶标抗体
单向 扩散
双向扩散
三）生化检验
1,LDH—X带检测
LDH—1
LDH—2
LDH—3
LDH—X
LDH—4
LDH—5
m w
2,GP—DAP （甘氨酰脯氨酰二肽基氨肽酶）
1） GP—DAP活性；
精液 4171Iu/L平均。
阴道液、初乳、血清、唾液、
尿液等 < 100 Iu/L
2）电泳区带
精液
阴道液
初乳
血清
四、种属鉴定
? 抗人精血清沉淀反应
? 抗 P30血清沉淀实验
五、血型测定
ABO血型
酶型
DNA
一） ABO血型测定
中和实验
ELISA法
二）酶型蛋白型测定
PGM1 Fu GLO1 G6PD AK PePA
ORM1 Gc Gm Km
DIA3 r — GGT
精液 Fu等电聚焦分型
1-1 2-1 2-2
精斑 ORM1等电聚焦分型
1-1 2-1 2-2
精斑 DIA3电泳分型
1-1 2-1 2-2
精斑 r-GGT电泳分型
1-1 2-1 2-1
三） DNA分型
混合斑 （ 精子、阴道上皮细胞
SDS、蛋白酶 K
完整精子 DNA（阴道上皮细胞）
DDT
二次消化 SDS、蛋白酶
DNA（精子）
混合斑 DNA提取
? 1) 取适量含有混合斑的检测, 剪碎后放入 5ml小烧杯
中, 加入 3ml纯水, 300μl 10% SDS及 150μl 5mg/ml
的 PK酶, 用牙签搅拌后, 放入 37℃ 水浴 6小时以上
（ 最好过夜 ） 。
? 2) 将水浴好的检材移入 1.5ml离心管 （ 检材载体用一
次性注射器挤压后去除 ）, 13,000rpm 离心 3分钟,
去上清, 每管加 1.4ml 纯水, 振荡, 13000rpm 离心 3
分钟 。 洗三次后, 移入 0.5ml离心管中, 13000rpm离
心 3分钟, 弃上清 。
混合斑 DNA提取
? 3) 向沉淀物的离心管中加入 200μl 5％ 的 Chelex-
100（ 可根据检材量的多少进行调节 ）, 4μl 5mg/ml
的 PK酶及 8μl 1M的 DTT（ PK酶及 DTT的终浓度分别为
100μg/ml 和 0.039M）, 振荡后 56℃ 保温过夜 。 次日
取出振荡, 100℃ 保温 8分钟, 振荡, 13000rpm离心 3
分钟, 上清用于 PCR扩增或放 4℃ 保存备用 。
Y-STR基因座的特点
1,呈单倍型父系遗传
2,突变率低
3,特别适用于法医学中混合斑的分析和父系家
族成员的亲权鉴定
N Sample DYS393 DYS19 DYS389Ⅱ DYS390 DYS391 DYS385
4 嫌犯甲 13 17 29 23 10 12/18
嫌犯乙 12 16 30 23 10 12/19
精斑 12 16 30 23 10 12/19
5 嫌犯 13 15 31 23 10 13/17
卫生纸 13 15 31 23 10 13/17
6 嫌犯 12 15 28 23 11 13/13
受害人内裤 12 15 28 23 11 13/13
7 嫌犯 12 16 29 23 10 11/16
受害人内裤 12 16 29 23 10 11/16
8 嫌犯甲 12 15 29 23 10 12/12
嫌犯乙 12 14 28 24 10 13/21
嫌犯丙 13 15 28 23 10 12/12
混合斑 12/13 15 28/29 23 10 12/12
刑事案件的 Y-STR分型结果
